肿瘤组织LVD 和D2-40 与早期结直肠癌淋巴结转移的相关性研究

张伟林

（桂林市中西医结合医院，广西 桂林）

0 引言

结直肠癌的发生发展不仅意味着肿瘤增生增大，累及周围组织和器官，而且伴随肿瘤细胞的转移[1]。淋巴结转移是结直肠癌常见的转移途径[2]。研究结直肠癌周围淋巴管分布的密度与淋巴结转移的关系，可为术中淋巴结清扫和根治性手术范围的确定提供重要的依据[3]。本研究旨在探讨肿瘤组织LVD 和D2-40 与早期结直肠癌淋巴结转移的相关性。

1 资料与方法

1.1 基本资料

收集我院2014 年1 月至2019 年12 月存档组织石蜡标本，其中直肠癌标本60 例，男患者35 例，女患者25 例，年龄范围为29-82 岁，平均年龄为（53.55±10.53）岁，肿瘤直径≤=4.5cm 32例，＞4.5cm 28 例；肿瘤位置在高位者11 例，中位者26 例，低位者23 例；高分化腺癌12 例，中分化腺癌28 例，低分化腺癌20 例；累及黏膜、黏膜下层、肌层者15 例，累及浆膜及浆膜外45 例；淋巴转移者18 例，无转移42 例；远处转移者6 例，无远处转移者54 例。另外收集60 例距离肿瘤10cm 的组织，以此作为健康对照组。

1.2 方法

均切片3um，通过免疫组化SP 法检测D2-40 单克隆抗体表达，标记微淋巴管密度。具体步骤如下：切片，二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化，过氧化氢抑制内源性过氧化物酶10 分钟，PBS 浸洗3 次，每次3 分钟，滴加D2-40 单克隆抗体，37℃孵育30 分钟至1 个小时，PBS 浸洗3 次，每次3 分钟；滴加多聚物酶标记的二抗，37℃孵育30 分钟至1 个小时，PBS 浸洗3 次，每次3 分钟；0.05%DBA＋0.03%过氧化氢显色8-15 分钟，流水冲洗，苏木素复染，微波蓝染；梯度乙醇脱水，二甲苯浸洗固定，树脂封片，光学显微镜下观察并计数。

1.3 观察指标

比较两组标本组织的D2-40 标记LMVD，分析结直肠癌边缘区和病理特征的关系。D2-40 阳性染色的位置在淋巴管内皮细胞胞膜、细胞质，显色棕黄色，呈颗粒状。根据Weidner 方法对LMVD 进行计数。采用200*（0.74mm2）的显微镜计数LMVD，每个患者计数3 个区域，取其平均值。

1.4 统计学方法

采用SPSS 20.0 统计学软件进行统计分析，对正态分布的数据进行t 检验，对非正态分布的数据进行卡方检验，采用平均数±标准差的形式表示数据的分布趋势，P＜0.05 表示数据的比较差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 比较两组标本组织的D2-40 标记LMVD

根据表1 分析，在肿瘤组织中，微淋巴管分布在肿瘤边缘和肿瘤中心，分布的位置和形态差异明显。与对照组对比，结直肠癌组分布的微淋巴管数目LMVD 明显更多，P＜0.05；与肿瘤的中心对比，肿瘤边缘的微淋巴管数目明显更多，P＜0.05，如表1。

表1 比较两组标本组织的D2-40 标记LMVD

2.2 分析结直肠癌边缘区和病理特征的关系

根据表2 分析，结直肠癌边缘区高LMVD 和肿瘤浸润深度、淋巴结转移、远处转移、Dukes 分期密切相关。与性别、年龄、肿瘤直径、分布位置、分化程度无明显关系，见表2。

表2 分析结直肠癌边缘区和病理特征的关系

3 讨论与结论

肿瘤大小和淋巴结转移是影响患者预后的重要因素，小于4cm的肿瘤对生存率无明显影响，但淋巴结的转移比肿瘤大小更为重要[4]。结直肠癌淋巴结有无转移直接影响了外科手术治疗效果、患者的预后和生存率[5]。据研究[6]，在常规病理检查无淋巴结转移的II 期患者中，20%死于复发，如果有淋巴结转移，复发比例将会更高。本研究显示，在肿瘤组织中，微淋巴管分布在肿瘤边缘和肿瘤中心，分布的位置和形态差异明显。与对照组对比，结直肠癌组分布的微淋巴管数目LMVD 明显更多，P＜0.05；与肿瘤的中心对比，肿瘤边缘的微淋巴管数目明显更多，P＜0.05。结直肠癌边缘区高LMVD 和肿瘤浸润深度、淋巴结转移、远处转移、Dukes 分期密切相关。与性别、年龄、肿瘤直径、分布位置、分化程度无明显关系。随着病变的发展，肿瘤增大，浸润加深，结直肠癌从B 期到C 期或从C 期转到D 期，淋巴结的转移率也随之增高[7]。肿瘤组织一旦侵及浆膜层，大大增加淋巴结和远处转移发生的可能性。本研究表明，肿瘤的分期与淋巴结转移有关。据研究[8]，侵及浆膜层的结直肠癌，发生淋巴结转移为38%，如加上淋巴管受侵发生淋巴结转移为66%。

综上所述，结直肠癌边缘区高LMVD 和肿瘤淋巴结转移存在密切的关系，在结直肠癌淋巴结转移的过程中，淋巴管生成起到重要的推动作用。