评价荧光定量PCR技术在痰结核菌检测中的应用

陈文龙

【摘  要】目的：探讨在痰结核细菌检测中应用荧光定量PCR检测方式的临床效果。方法：建立检测痰结核荧光定量PCR技术，对多种敏感性和特异性进行检验，通过对150例住院患者痰结核细菌检测，得出相关数据，并进行对比分析。结果：使用荧光定量PCR技术的患者标本阳性检出率为35.33%。培养法的患者标本阳性检出率为17.33%，涂片法的患者标本阳性检出率为12.00%。荧光定量PCR技术均优于培养法和涂片法，更能有效检测出结合杆菌，数据比较存在显著差异性，P<0.05。结论：荧光明显定量PCR技术明显优于传统的结合杆菌监测方式，敏感性和检出率均较高，且具有特异性，诊断价值更高，可有效诊断患者结核疾病，尤其对涂片染色和结核阴性结核病有良好的诊断效果。

【关键词】荧光定量PCR;痰结合菌;诊断价值

【中图分类号】R440      【文献标识码】A      【文章编号】1672-3783（2020）03-0039-01

结核病属于临床常见感染性疾病，全球均具有较高的感染率，是一种单一病原体疾病，死亡率极高，严重威胁患者的身体健康，因此目前采取有效措施，及时诊断结核疾病，做好结核疾病的防控工作^[1]。目前，比较常见的结核疾病诊断方式为传统培养法和涂片法，但是此种诊断方式存在很多弊端，准确性和特异性不高。基于此，本研究对痰结核细菌标本进行荧光定量PCR诊断，对此种诊断方式的诊断价值进行评估。

1 资料与方法

1.1一般资料

本文从2014年6月至2017年7月，收治的150例住院患者作为研究对象，这些研究对象均为结核患者，患者最大年龄为66岁，最小年龄为19岁，其中包括50例女性患者和100例男性患者。

1.2方法

采集标本。所有患者均按照结核病细菌学诊断操作流程进行诊断;首先需采集患者痰液，痰液采集时间为每日清晨，采集剂量为4毫升。若患者患有胸膜炎，则还需对患者胸水进行采集，然后将采集的标本处理过后进行实验室诊断，诊断期间需利用涂片抗酸染色和结核细菌培养方式诊断。诊断程序包括编号标本和化验单，其余诊断操作方式均严格按照流程进行规范操作;与此同时采用荧光定量PCR技术对标本进行检验，检验试剂为MX300P，试剂产自中山达安基因股份有限公司。在痰液标本中加入4倍体积4%氢氧化钠，摇匀后将其放置实验室内，待30分钟后痰液会形成液体，然后将其中1毫升液体放置在离心管中，离心管长度为1.5毫升，5分钟后离心弃上清。待其沉淀过后，利用无菌生理盐水进行清洗，其于体液标本也依次方式进行处理。

1.3数据处理

利用专业的统计学软件SPSS19.0对荧光定量PCR技术诊断价值进行分析和统计，阳性、阴性检出率为计数资料，采用（n，%）表示和卡方检验，计量资料采用（）表示和T检验，若P<0.05则数据对比差异性显著。

2 结果

涂片法阴性患者标本共有150例，呈阳性的有18例，阴性的有132例，阳性检出率为12.00%（18/150）。

培养法取150例结核疾病患者，标本呈阳性的有26例，呈阴性的有124例，阳性检出率为17.33%（26/150）.

荧光定量取150例结核疾病患者，标本呈阳性的有53例，呈阴性的有97例，阳性检出率为35.33%（53/150）.三种监测方式最终检出的阳性标本例数为450例，呈阳性的有97例，呈阴性的有353例，阳性检出率为61.33%。

3 讨论

结核病目前比较准确的分离方式为结核菌分离培养，传统的分离检测方式主要包括涂片法和培养检测法，可通过实验人员的检测实现结核疾病的诊断，但是此种方式往往需要很多人员方能实现检测和诊断的目的，诊断花费时间较长，不仅使检测结核细菌的效率受到影响，还在一定程度上降低阳性检出率，存在诊断结核菌不准确现象，有一定的检测弊端，其次此种诊断方式无法准确判断细菌的染色和生长特异，容易发生误诊现象，不仅会延误病情，还在一定程度上增加患者病情恶化的概率，使患者错过最佳时间，严重威胁患者的生命安全。因此为了克服传统检测方式的弊端，需采取更先进的结核菌检测技术^[2]。

荧光定量PCR属于一种新型诊断方式，弥补了传统检测方式的优势，可缩短检测时间，提高检测效率，同时具有敏感度、特异度等優势，能够快速培养生长缓慢细菌。其次此种检测方式完全是在密闭系统中扩张完成，不仅可实现实时测定，还能降低污染的可能性，以免患者痰核细菌因污染物增长呈假阳性;也能最大程度的降低误诊概率，提高检测的准确性，诊断价值较高，检测效率高，检测结果好，广受结核疾病患者的欢迎和喜爱，可作为临床检测结核杆菌的主要诊断方式^[3]。

荧光定量诊断方式还具有以下几方面优势：（1）可快速解决污染问题，此种方式检测完全在单管中进行，期间不需要打开管盖，可杜绝污染物入侵，降低污染的发生概率。（2）此种检测方式自动化程度高，结核细菌反应完全是由计算机完成，不仅高效、快速，还可减少相关人员接触致癌物质，降低细菌的传播概率。（3）此种检测方式具有敏感性、特异和准确性。（4）此种诊断方式可实现对结核细菌的实施检测，弥补了传统定量只能检测最终结果的局限性，可对每个样品进行CT计算，获得定量结果准确性更高^[4-5]。

经实验研究表明，荧光定量PCR技术明显优于传统的痰液涂片和培养方式，此种检测方式能够提高结核杆菌的检出率，并根据检测结果快速为患者治疗针对性的检验方式，及时控制病情，为患者赢得最佳治疗时间，降低患者病死率，保证患者的身体健康。

参考文献

[1] 姜晚云.荧光定量PCR技术在结核杆菌检测中的应用[J].中外医学研究，2014，12（14）：65- 66.

[2] 杨洪毅，石洁，刘国栋，赵玉玲，李辉.荧光定量PCR技术在痰结核菌检测中的应用[J].现代预防医学，2013，40（08）：1483-1484.

[3] 肖慧霞，王晓平，王福锐，刘晓妮.荧光定量PCR技术在结核分枝杆菌检测中的应用[J].宁夏医学杂志，2011，33（02）：173-174.

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[5] 应春妹，汪雅萍，张灏旻，陈小颖，于嘉屏.荧光定量PCR技术在结核分枝杆菌检测中的应用[J].上海交通大学学报（医学版），2007（11）：1400-1401.