注射用重组人干扰素α-1b溶解后活性稳定性及雾化粒径研究*

陶婉君，李 根，郭文玫

（电子科技大学医学院附属妇女儿童中心医院·四川省成都市妇女儿童中心医院，四川 成都610091）

干扰素具有广谱抗病毒和免疫调节作用，临床常用于治疗病毒性疾病[1-2]。雾化吸入重组人干扰素ɑ-1b（rhIFN α-1b）已被国家标准处方集[3]和《儿童雾化中心规范化管理指南》[4]《重组人干扰素α-1b在儿科的临床应用专家共识》[5]推荐使用，其对儿童病毒感染的治疗有重要作用[6-7]。rhIFN α-1b药品说明书上的适应证为用于治疗病毒性疾病和某些恶性肿瘤。目前关于rhIFN α-1b超药品说明书雾化的研究多为针对某病毒性疾病的疗效、用药剂量。为保证疗效，需规范超药品说明书用药治疗过程，增加用药安全性。本研究中对注射用rhIFN α-1b雾化的粒径和溶解后的活性稳定性进行了考察，为规范使用rhIFN α-1b雾化吸入疗法提供参考。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Winner311XP型激光粒度仪（济南微纳颗粒仪器股份有限公司）；ZJ24型CO2培养箱（美国NBS公司）；XPS-1B型倒置显微镜（重庆光电仪器有限公司）；MD SpectraMax M3型酶标仪（美国分子仪器公司）；S型冷凝管；pHfe20-K型酸度计（瑞士Mettler Toledo公司）；HYC-360型2～8℃冰箱（海尔集团）；SW-CJ-1F型净化工作台（苏州净化设备有限公司）；ML203型电子天平（瑞士Mettler Toledo公司，精度为万分之一）；NEC25S型空气压缩泵雾化器（欧姆龙健康医疗＜中国＞有限公司）；M102型网式雾化器（江苏鱼跃医疗设备股份有限公司）。

1.2 试药

注射用rhIFN α-1b[深圳科兴生物工程有限公司，批号为201802010，规格为每支20 μg，（20 μg相当于20万IU）]；人羊膜成纤维细胞（WISH，上海细胞研究所）；水疱性口炎病毒（VSV）株（中国食品药品检定研究院）；胎牛血清（Immuno Probe），1640培养基（gibco）；消化液、染色液、脱色液均为自配；灭菌用注射用水（国药集团容生制药有限公司，批号为1711516）；氯化钠注射液（中国大冢制药有限公司，批号为7G97D2）。

2 方法与结果

2.1 注射用rhIFN α-1b溶解后活性稳定性

无菌条件下操作。取10支样品，分别用1 mL灭菌注射用水和氯化钠注射液溶解，混匀，分装至小离心管，作为供试品溶液，分别在4℃及25℃温度条件下存放0，1，6，12，24 h。取以上不同条件存放供试品溶液各1支，用测定培养液稀释成105 IU/mL的溶液。在96孔细胞培养板中，每个稀释度各2孔。

照2015年版《中国药典（三部）》干扰素活性测定法测定。Wish/VSV微量病毒抑制法的具体操作步骤：在96孔培养板中，每孔加入3.5×105/mLWish细胞100μL，置含5%CO2的37℃恒温培养箱培养5 h。待其生长成单层细胞后，弃上清液，于培养板内1次加入系列稀释液（稀释度为10-1，10-2，10-3，10-4，10-5，10-6，10-7，10-8，共8个稀释度）的检测，每孔100 μL，每个稀释度各2孔。同时，设置8个稀释度的rhIFN α-1b标准品作为对照，将含有rhIFN α-1b检测样品和标准品的培养板置含5%CO2的37℃恒温箱中孵育20 h。弃上清液后，于rhIFN α-1b检测样品和标准品培养板孔内各分别加入100 CID5OVSV病毒株，再培养24 h。待标准品溶液的50%病变点在1 IU/mL时。弃去细胞培养板中的上清液，每孔加入染色液50μL，室温放置30min后，用流水小心冲去染色液，并吸干残留水分，每孔加入脱色液100 μL，室温放置3～5 min，混匀，用酶标仪以630 nm为参比波长，在570nm波长处测定吸光度，记录测定结果。

以灭菌注射用水为溶剂的供试品溶液，经4℃温度条件下存放1，6，12，24 h后的生物学活性相当于0 h活性的96.76%～100.46%，生物活性未明显下降，相对稳定；供试品溶液经25℃温度条件下存放1，6，12，24 h后的生物学活性相当于0 h活性的91.24%～103.69%，生物活性有波动，但仍在合格范围内。详见表1。

表1rhIFN α-1b用不同溶剂溶解后的活性测定结果（×105IU/mL，平均值/2孔）

2.2 不同雾化器雾化注射用rhIFN α-1b的粒径分布

分别选用欧姆龙NE-C25S型压缩式雾化器和鱼跃M102型网式雾化器。用5 mL注射用水充分溶解注射用rhIFN α-1b后，转移至雾化器雾化壶内，雾化10～15 min。使用激光粒度仪检测，并记录药液雾化后微粒的粒径分布情况。

压缩式雾化器雾化微粒粒径分布：注射用rhIFN α-1b药液雾化后微粒粒径呈正态分布，详见表2。药液全部雾化后粒径小于12 μm，超过80%的微粒粒径分布于1～5 μm。试验表明，rhIFN α-1b雾化后，药液微粒可到达肺泡组织，又不易随气流呼出，可作用于肺部组织。

表2 压缩式雾化器雾化粒径分布

网式雾化器雾化微粒粒径分布：注射用rhIFN α-1b药液雾化后微粒粒径呈正态分布，详见表3。药液全部雾化后粒径小于12 μm，超过70%的微粒粒径分布于1～5 μm区间。试验表明，rhIFNα-1b雾化后，药液微粒可到达肺泡组织，又不易随气流呼出，可作用于肺部组织。

表3 网式雾化器雾化粒径分布表

3 讨论

儿童雾化吸入治疗可使药物直接作用于气道黏膜，具有靶向性强、疗效高、安全性好、操作简便、儿童顺应性高等优点，并可经支气管、细支气管到达肺部，较多地集中在肺部组织，较肌肉注射给药作用更持久[8]。临床使用中，注射用rhIFN ɑ-1b常单用或联合用药，超说明书雾化用于治疗毛细支气管炎、病毒性肺炎、慢性支气管炎、手足口病、疱疹性咽峡炎等疾病[9]。注射用rhINF ɑ-1b雾化治疗疾病过程中，影响有效性和安全性的因素很多，如不同的雾化吸入装置产生的气溶胶颗粒大小不一，不同大小的气溶胶颗粒雾化吸入时到达儿童气道的部位不同，药物溶解后的稳定性等[10-11]。

注射用rhIFN α-1b药品说明书中的溶剂为灭菌注射用水，临床雾化常选用灭菌注射用水或氯化钠注射液作为溶剂。本研究结果显示，选择灭菌注射用水或氯化钠注射液作为溶剂，注射用rhIFN α-1b溶解后的活性变化均在合格范围内，提示注射用rhIFN α-1b在4℃或25℃保存24 h内稳定。

雾化吸入临床应用广泛，但吸入专用制剂品种少，临床使用西药注射液、中药注射液、中草药汤剂等进行雾化[12-13]。但这些药物雾化后能否形成0.5～10 μm微粒（雾化颗粒直径对药物沉积位置有直接影响，有效雾化颗粒直径应在0.5～10 μm，其中粒径为5～10 μm的微粒主要沉积于口咽部，粒径为3～5 μm的微粒主要沉积于肺部，粒径小于3μm的微粒50%～60%沉积于肺泡），以及其稳定性、安全性、有效性尚待进一步研究。临床常用雾化器主要有射流雾化器（压缩式雾化器）、超声雾化器及振动筛孔雾化器（网式雾化器）3种[14]。超声雾化器的剧烈震荡可使雾化器中的液体加温，可能会影响某些药物中所含蛋白质或肽类化合物的结构和稳定性[15]。振动筛孔雾化器是通过压电陶瓷片的高频振动，使药液穿过细小的筛孔而产生药雾的装置，减少超声振动液体产热对药物的影响，筛孔的直径可决定产生药雾颗粒的大小[16]。以压缩泵或氧气驱动的雾化器是目前临床最常用的雾化吸入器具，其原理是高速运动的压缩气体通过狭小开口后突然减压，在局部产生负压将药液吸出，并通过高速运动的持续气流形成药雾微粒，其中大药雾微粒通过挡板回落至贮药池，小药雾微粒则随气流输出，药雾微粒的大小与气流的压力和流速有关，增加气流速度可使雾化输出量增加，减小药雾微粒，缩短雾化时间[17]。本研究结果显示，注射用rhINF α-1b药液用2种雾化器雾化后微粒粒径均呈正态分布，但用压缩式雾化器雾化效果更好，药液全部雾化后粒径小于12 μm，超过80%的微粒粒径分布于1～5 μm，该区间雾化微粒既可到达肺泡组织，又不易随气流呼出，绝大部分药液可作用于肺泡，但不同厂家、不同型号的雾化器的雾化效果可能不同。

临床通常将注射用rhIFN α-1b与常见儿童雾化药物配伍，如与吸入用布地奈德混悬液、吸入用异丙托溴铵溶液、吸入用硫酸沙丁胺醇溶液、硫酸特布他林雾化液、注射用盐酸氨溴索等配伍。目前未见配伍后及雾化后注射用rhIFN α-1b生物活性和结构稳定性变化的相关报道，后续研究需进一步对注射用rhIFN α-1b配伍后的混合溶液进行外观、pH、雾化前后生物活性检测，以及雾化后rhIFN α-1b结构变化检测，为临床合理用药提供参考。

雾化吸入rhIFN ɑ-1b尽管被《儿童雾化中心规范化管理指南》《重组人干扰素α-1b在儿科的临床应用专家共识》等推荐使用，但不可忽视在我国属超药品说明书用药，会面临一定风险和法律问题，故医院需强化超药品说明书用药管理，做好备案；超药品说明书用药需谨慎，并做好患者的知情同意；药师应及时与医师沟通，做好处方点评，合理监控超药品说明书用药。