结肠癌患者血清miR-192和miR-23a水平的变化及其临床意义

富荣威，张英辉

（1沈阳二四五医院 检验科，辽宁 沈阳110042；2北部战区总医院 检验科，辽宁 沈阳110016）

结肠癌属于胃肠道常见肿瘤，其发生及发展属于多步骤及多基因过程，由于结肠癌处于腹腔内，影像学检查及内镜检查难度较大，影响早期诊断［1］。微小RNA （miR）属于非蛋白质编码小分子RNA，其中miR-192属于抑癌基因，miR-23a属于促癌基因，在肿瘤的发生及发展中均起到重要作用［2-3］。基于此，本研究旨在探讨结肠癌患者血清miR-192及miR-23a水平的变化情况及其临床意义，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取我院2016年3月至2019年2月期间收治的64例结肠癌患者作为结肠癌组，选取同期我院收治的42例肿瘤性息肉患者作为良性息肉组，并选取同期我院30例健康体检者作为对照组。结肠癌组：男28例，女36例；年龄32～73岁，平均 （52.63±4.28）岁。良性息肉组：男18例，女24例；年龄31～72岁，平均 （52.49±4.22）岁。对照组：男13例，女17例；年龄32～70岁，平均 （52.14±4.19）岁。三组的一般资料比较无统计学差异 （P＞0.05），具有可比性。

1.2 检验方法入院时所有入选者均空腹抽取肘静脉血，结肠癌组术后2周再次抽取肘静脉血，将标本装入试管中，于室温下静置1 h，3 000 r／min离心5 min，取血清，置于-70℃冰箱内保存待测。采用PCR技术测定血清miR-192及miR-23a，取5 mL血液置于真空管内，2 000 r／min离心10 min，取1 mL血清，加入1 mL TRIzo1，充分混匀，4℃下1 200 r／min离心10 min，取上清液，加入0.2 mL氯仿，静置约3 min，再次离心15 min，取上清液，加入0.5 mL异丙醇，于-70℃冰箱内静置过夜。第2 d，溶解后，4℃下1 200 r／min离心10 min，去除上清液，采用DEPC水配置的75%乙醇洗清，稍微晾干，加入20 μL经DEPC处理的双蒸水，溶解。采用紫外线分度计测定中 RNA量及 A260、A280值。于各组 RNA抽提物中取 1 μg RNA进行反转录，获取cDNA；样品混合均匀后进行离心，置于37℃下孵育60 min。将逆转录产物置于保存于-20℃下，采用primer express 3.0软件，结合目标基因的miRNA序列及引物设计原则设计，合成qPCR检测引物及探针。目标基因探针及内参基因探针均为5'端，标记采用FAM报告荧光，3'端标记采用TAMRA淬灭荧光。取中RNA 2 μg加入内参U6和目的小分子RNA miR-192及miR-23a逆转录引物，置于70℃下反应约10 min，再给予冰育约2 min，加入其他试剂。反应程序：置于42℃及70℃下反应，时间为60 min与10 min，立即取出cDNA产物，置于冰上冷却、备用；模板选取逆转录产物，扩增时采用实时定量PCR仪，置于95℃下反应，反应3 min与15 s，以促进起始模板及PCR循环模板变性；再置于60℃下反应45 s，达到退火效果，循环35次。采用相对定量法计算miRNA相对量表达，以2-△△CT法分析基因相对表达量。

1.3 统计学方法采用SPSS 25.0统计学软件处理数据，计量资料以±s表示，采用t检验；多组间比较采用单因素方差分析检验；相关性采用Pearson法检验；P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组的血清miR-192及miR-23a水平比较miR-192水平：结肠癌组＜良性息肉组＜对照组；miR-23a水平：结肠癌组＞良性息肉组＞对照组，组间比较差异有统计学意义 （P＜0.05）。 见表 1。

表1 三组的血清miR-192及miR-23a水平比较 （±s）

表1 三组的血清miR-192及miR-23a水平比较 （±s）

组别 n miR-192 miR-23a结肠癌组 64 0.76±0.34 3.47±1.12良性息肉组 42 1.43±0.61 1.30±0.59对照组 30 3.14±1.02 0.96±0.25 F 126.361 115.209 P 0.000 0.000

2.2 结肠癌组手术前后miR-192及miR-23a水平比较与术前相比，结肠癌组术后miR-192水平较高，miR-23a水平较低，差异有统计学意义 （P＜0.05）。见表2。

表2 结肠癌组手术前后miR-192及miR-23a水平比较 （±s）

表2 结肠癌组手术前后miR-192及miR-23a水平比较 （±s）

时间 n miR-192 miR-23a术后 64 2.43±0.89 1.09±0.48术前 64 0.76±0.34 3.47±1.12 t 14.023 15.626 P 0.000 0.000

2.3 结肠癌组血清miR-192与miR-23a相关性相关性分析结果显示，结肠癌组血清miR-192与miR-23a水平呈负相关（r＝ -0.997，P＝ 0.000）。

3 讨论

miR-192基因位于人体11号染色体，多表达于肝脏、结肠、肾脏等组织中，其在结肠癌、肺癌、肝癌等疾病中表达水平较低，被称为肿瘤抑制性miRNA［4］。miR-192的差异性表达可用于恶性肿瘤的早期诊断，且在其转移、分期、预后判定中具有重要意义，其可有效抑制二氢叶酸还原酶的作用，进而控制细胞周期；机体还可通过上调miR-192基因表达，使细胞周期发生阻滞［5］。本研究结果显示，miR-192表达水平：结肠癌组＜良性息肉组＜对照组，结肠癌组术后miR-192表达水平高于术前，表明机体下调miR-192表达水平与结肠癌的发生及发展密切相关，结肠癌原发病去除后，使机体微环境有效改善，机体miR-192的表达水平也随之升高。

miR-23a属于miR-23的亚型，参与了细胞发育的各个阶段，且在肿瘤的发生及发展中发挥重要作用，属致癌基因，在结肠癌、肺癌等恶性肿瘤中呈高表达，在肿瘤细胞转移中起促进作用［6］。miR-23a通过靶向性抑制作用，使抑制因子1蛋白发生转移，进而使细胞增殖、转移及侵袭进程不断加快；此外，miR-23a表达上调还可反映浸润深度、结肠癌分期情况、肠道黏膜恶性转化情况等，在结肠癌转移、浸润等方面也发挥重要作用［3-4］。本研究结果显示结肠癌组miR-23a表达水平＞良性息肉组＞对照组，结肠癌组术后miR-23a表达水平低于术前，表明miR-23a表达增加与结肠癌的发生及发展密切相关，结肠癌原发病去除后，机体微环境有效改善，机体miR-192表达水平也随之降低；同时相关性分析结果显示，结肠癌组血清miR-192与miR-23a水平呈负相关，表明两者存在内在联系。

综上所述，血清miR-192及miR-23a水平变化在结肠癌的发生及发展中发挥重要作用，两项指标有望作为结肠癌诊断的重要肿瘤标记物。