紫外分光光度法测定石榴补血糖浆中总黄酮的含量

周琴，孙莹，宋明玉，麦麦提艾力·依甘拜尔迪，田芳

（新疆维吾尔药业有限责任公司，新疆 乌鲁木齐）

0 引言

石榴是石榴科植物石榴（Punica granatum L）的干燥果实，性味甘、酸涩、温，具有杀虫、收敛、涩肠、止痢等功效。根据目前的研究报道，石榴中主要化学成分为多酚类、黄酮类、生物碱和有机酸，此外还含有甾类、磷脂、甘油三酯、挥发油、氨基酸及矿物质等。石榴的根、叶、花、果实、果皮、种子均可入药。石榴的不同部位所含的化学成分的种类及含量各不相同。石榴的果汁、果皮、叶、树皮中黄酮类、鞣质类、生物碱、有机酸和特殊结构的多元酚的含量各有偏重；石榴籽及其他部位则多含甾类、磷脂、三酰甘油等成分[1-4]。

石榴补血糖浆原名为“阿娜尔补血糖浆”，“阿娜尔”为维语“石榴”之意，用于补血、止血、养心强身的常规药品，是新疆维吾尔药业有限责任公司独家品种，功能主治为，维医：补血健脑。用于异常胆液质偏盛引起的贫血，心悸、气短、焦虑、头晕等。中医：补气血。用于气血虚引起的气短、头晕、心悸、健忘等。目前对石榴化学成分研究报道较多，关于石榴补血糖浆成分研究还未见报道，本文采用紫外分光光度法建立石榴补血糖浆总黄酮含量测定方法，并对15批石榴补血糖浆进行了含量检测。

1 实验材料

1.1 仪器

紫外-可见分光光度计Agilent Cary 60（安捷伦科技（中国）有限公司），电子天平（型号AL204，MS105DU）（梅特勒-托利多仪器（上海）养心公司），超声提取器（SK250HP，上海科导超声仪器有限公司）。

1.2 试剂

槲皮素对照品（批号：10081-200907，100mg/支，中国食品药品检定研究院）；无水乙醇（分析纯，500mL/瓶，天津市北联精细化学品开发有限公司）。

1.3 药品

石榴补血糖浆，规格：200mL/瓶，批号：0180501，（由新疆维吾尔药业有限责任生产）。

2 方法与结果

2.1 供试品溶液的制备

精密量取石榴补血糖浆（批号：0180501）0.5mL，至100mL容量瓶中，加入90%乙醇混匀，超声20分钟，取出放冷，定容至刻度，摇匀，过滤，即得。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取槲皮素对照品0.01027g（批号：10081-200907），至100mL容量瓶中，加入适量70%乙醇超声溶解后，定容至刻度，即得0.1027mg/mL的对照品溶液。

2.3 测定波长的选择

分别量取上述配制好的供试品溶液和对照品溶液适量，以70%乙醇为空白，在200～800nm波长范围内进行紫外扫描。结果发现，总黄酮在375nm处出现有吸收峰，故选择检测波长为375nm，结果见图1。

图1 测定波长的选择

2.4 标准曲线的绘制

精密移取槲皮素对照品溶液 1mL、2mL、3mL、4mL、5mL 置于50mL容量瓶中加入90%乙醇混匀，定容至刻度。以90%乙醇为空白，在375nm波长处测定吸光度。以吸光度Y为纵坐标，浓度X为横坐标，最小二乘法直线回归，得槲皮素标准曲线为：Y=0.07477*X-0.00898，Y为吸光度，X为质量浓度，R2=0.99985。结果表明，槲皮素在2.054ug/mL-10.27ug/mL 范围内呈良好线性关系，结果见图2。

图2 标准曲线

2.5 精密度试验

精密量取供试品溶液0.5mL，至于100mL容量瓶中，按“2.1”项下方法进行溶液的制备，在375nm波长下测定吸光度，重复测定6次，测定吸光度。经计算得知总黄酮吸光度的RSD=1.45%（n=6），结果表明该方法精密度良好。

2.6 重复性考察

精密吸取石榴补血糖浆0.5mL，至100mL容量瓶中，按“2.1”项下方法进行溶液的制备，共6份，在375nm波长下测定样品吸光度，RSD=1.79%，结果表明重复性良好，结果见表1。

表1 重复性考察结果（n=6）

2.7 稳定性考察

精密吸取石榴补血糖浆0.5mL，至100mL容量瓶中，按“2.1”项下方法进行溶液的制备，在波长为375nm下于0h、1h、2h、4h、6h、8h、10h、24h 测定样品吸光度，RSD=0.708%，结果表明稳定性良好，结果见表2。

表2 稳定性考察结果（n=8）

2.8 加样回收率考察

精密吸取石榴补血糖浆0.25mL（浓度为238.3μg），共9份，至100mL容量瓶中，分别按照50%、100%、150%加入高、中、低浓度的槲皮素对照品（136μg/mL）1mL、2mL、3mL 各 3份，加 90%乙醇稀释，超声处理20分钟，放冷，定容至刻度，摇匀，在波长为375nm下测定吸光度，平均回收率为101.11%，，RSD=1.17%，结果表明，该方法回收率良好，结果见表3。

表3 加样回收率考察结果（n=9）

2.9 样品含量测定

取15批石榴补血糖浆样品，均为新疆维吾尔药业有限责任公司生产，精密量取0.5mL样品置于100mL容量瓶中，并设置平行样，按“2.1”项下方法进行溶液的制备。在375nm下测定吸光度，计算计算含量，结果见图3，平均含量为775.21μg/mL。

图1 15批样品总黄酮含量测定（n=15）

3 讨论

黄酮类化合物泛指2个具有酚轻基的苯环通过中央三碳原子相互连接而成的一系列化合物[6]。有研究表明，黄酮类化合物有抗氧化、抗炎、镇痛、调节免疫、抗衰老、降血脂作用[7]。目前，对石榴的研究比较多，包括对石榴皮、石榴籽、石榴花等的成分和药理作用研究较多，对于石榴补血糖浆只有1篇药理药效的研究[8]，于石榴补血糖浆的化学成分研究还未见报道。

实验以槲皮素为对照品，绘制标准曲线，采用紫外-可见分光光度法对石榴补血糖浆中总黄酮进行含量测定，精密性、重现性、稳定性和加样回收率均符合规定。实验结果表明：该方法简便可行，可用于石榴补血糖浆中总黄酮含量测定。