CYP1A1 基因多态性与肺癌易感性的关系研究

姜雪燕，田晓燕，陈鹏，陈圆，付荣，史丽君，邬秀娟

（内蒙古自治区肿瘤医院，内蒙古 呼和浩特）

0 引言

肺癌是因吸烟、辐射、肺部慢性疾病、遗传等因素引发的恶性肿瘤，其发病率及死亡率极高，是全世界公认的对人群健康和生命威胁最大的疾病之一。近年来，有研究发现肺癌与DNA 修复酶相关，修复酶基因突变，会导致DNA 损伤无法及时修复，从而引起肺癌易感性增加[1]。细胞色素P450（CYP450）作为I 相代谢酶的主要组成，越来越多学者开始研究CYP450家族中的相关酶基因多态性与肺癌的关系[2]。本文从主要研究CYP450 家族中广泛存在的CYP1A1，研究其主要位点MspI 的基因多态性，分析其与肺癌易感性的关系。

1 资料和方法

1.1 一般资料

选择2017 年6 月至2019 年6 月我院接受的124 例肺癌患者为研究对象，将其划分为观察组，同期抽取124 例体检健康人群设为对照组。其中对照组男性73 例，女性51 例，平均年龄（59.18±9.02）岁，鳞癌33 例，腺癌59 例，腺鳞癌6 例，小细胞肺癌26 例；观察组男性69 例，女性55 例，平均年龄（60.02±9.57）岁，研究对象资料经检验无显著性差异（P＞0.05）。

观察组纳入标准：①患者经病理学检测或灌洗液、痰液细胞学检测可确诊为肺癌，病理分期均为Ⅲ～Ⅳ期；②不存在其他部位恶性肿瘤；③不存在严重心、脑、肝、肾等器质性疾病；④无恶性贫血；⑤免疫正常的患者；⑥所有患者均对本研究方案完全知情且自愿参与。

1.2 方法

1.2.1 样本采集与处理

所有患者于清晨空腹状态下抽血，采取外周静脉血3～5 mL，使用EDTA 抗凝采血管收集并置于-80 ℃环境保存。送至实验室后，取出冷冻保存的血液样本于室温下溶解，采用离心柱法提取200 μL 血液的DNA，研究使用的试剂为上海麦克林科技有限公司提供，均按照试剂盒说明书进行操作。

1.2.2 CYP1A1 基因PCR 扩增与鉴定

CYP1A1 基 因PCR 扩 增 采 用QuantStudio 5 IVD 实时荧光定量PCR 仪（美国赛默飞世尔科技公司），利用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）技术分析CYP1A1 MspI 位点多态性，PCR 反应体系总体积 为50 μL，其 中PCR 反 应 缓 冲 液50 mmol/L，DNF 模板75 ng，dNTP200 μmol/L，上 游 引 物0.4 μL，下 游 引 物0.4 μL，TaqDNA 聚 合 酶1 U。CYP1A1 下 游 引 物 序 列 为5’-CAGTGAAGAGGTGTAGCCGCT-3’，上 游 引 物 序 列 为5’-TAGGAGTCTTGTCTCATGCCT-3’。PCR 扩 增 条 件 为95 ℃预变形5 min，在94 ℃ 60 s、60 ℃ 60 s、72 ℃ 60 s 温度和时间条件下循环35 次，末次循环后以72 ℃孵育8 min。扩增产物加样于2%的琼脂糖凝胶中，混匀后在电流20 mA、电压80 V 的条件下进行30 min 电泳。采用DL2000（大连宝生物工程有限公司）观察凝胶成像并拍照，回收PCR 产物并用分光光度仪判定回收是否成功。

1.2.3 测序

PCR 产物采用oligo6.0 软件进行测序，测序后所得序列与Genebank 中的CYP1A1 基因序列进行核对，碱基判读结果需多次核对，尽可能减少误差。

1.3 统计学方法

研究涉及的计数资料以频数表示，基因型频率以SPSS 17.0 for windows 软件行统计学分析，采用t 和χ2检验，P＜0.05 表示数据差异具有统计学意义。

2 结果

两组CYP1A1 MspI 位点基因多态性频率分析：两组CYP1A1 基因野生型（m1/m1）、突变杂合型（m1/m2）发生频率分布不具有统计学意义（P＜0.05），突变纯合型（m2/m2）频率显著高于对照组，数据差异具有统计学意义（P＜0.05），证明CYP1A1 MspI 位点为m2/m2 基因型与肺癌易感性有相关性，详见表1。

表1 观察组和对照组CYP1A1 基因多态性频率对比[n(%)]

3 讨论

肺癌是临床上发作率极高的恶性肿瘤疾病，目前已成为全世界共同关注的重点健康问题。肺癌可因吸烟、辐射、肺部慢性疾病、遗传、大气污染等因素诱发，此外，近年来有研究发现，肺癌与DNA 修复酶密切相关，DNA 修复酶基因突变，会促使肺癌发生和发展[3]。而CYP450 作为I 相代谢酶的重要组成，是研究肺癌遗传分子学机制重要的出发点。

CYP1A1 是CYP450 家族的主要成员，其中CYP1A1 基因编码芳烃羟化酶，其可激活进入人体的多环芳烃类致癌物，使其转化为酚类和环氧化合物[4]。目前，已有研究发现CYP1A1、基因缺陷会导致子宫内膜癌、食管癌等疾病的发生，而其对于肺癌是否具有影响性，还需进一步探明[5-6]。

CYP1A1 常见的突变位点为MspI 位点，其中MspI 位点基因多态性具有3 种基因型：野生型（m1/m1）、突变杂合型（m1/m2）、突变纯合型（m2/m2），其会对化学物质产生代谢活化作用，从而改变癌基因或抑癌基因表达，影响肿瘤生成；本研究结果显示肺癌人群与正常人群CYP1A1 MspI 位点m1/m1、m1/m2 基因型发生频率不具有统计学意义（P＞0.05），而m2/m2 型频率明显增高，差异具有显著性（P＜0.05），证明CYP1A1 MspI 突变纯合型基因型是肺癌的危险因素。

综上所述，运用分子生物学检测肺癌患者基因及分子的改变，证明CYP1A1 MspI （m2/m2）基因型的人群更易感肺癌，为肺癌的遗传分子学机制提供了有效依据，但由于遗传因素对基因变异的影响具有多样性，CYP450 家族中的相关酶基因多态性与肺癌易感性还需要进一步考证。