老年健忘中医证型分布规律及与ApoE基因相关性

姚雪婷 梅应兵 孙勤国 彭玉英

(1武汉市第三医院老年病科，湖北 武汉 430060；2湖北省中医院(光谷院区)老年病科；3武汉市青山区红钢城街社区卫生服务中心)

健忘症好发于老年人群，可分为生理性及病理性两种类型，生理性健忘患者临床症状较轻，可于适当调养后恢复正常，而病理性健忘则较为严重，若未尽早采取有效的治疗措施，可能发展为老年性痴呆，对患者及其家人的生活质量造成严重影响〔1～3〕。目前对老年痴呆的研究也成为这一领域的研究热点〔4,5〕。作为老年痴呆的重要前驱症状，老年健忘的研究尚处于起步阶段。基于中医“治未病”理论，本课题通过流行病学调查，总结老年健忘(老年脑动脉硬化)的中医证型及其分布规律，寻找痴呆早期的病机关键及病情演变规律。同时研究老年健忘(老年脑动脉硬化)患者载脂蛋白(Apo)E基因情况，探讨中医健忘与ApoE基因的相关性，为中医辨证提供微观证据。

1 资料与方法

1.1一般资料 本研究选取2014～2017年11月武汉市某社区580例社区60岁以上老年人为研究对象，对其进行记忆力减退(健忘)、临床痴呆评定量表(CDR)、简易精神状态检查(MMSE)量表、海金斯基缺血指数量表(HIS)、HAMD抑郁量表评分，评估结果显示，580例社区老人中包括179例健忘老人及401例非健忘老人。

1.2研究方法 (1)脑动脉硬化各中医证候判别模式。精髓空虚：头晕、头痛、失眠、脑鸣、耳鸣、健忘、乏力、心悸、腰酸、眼花、视力下降、舌淡、薄苔、细脉、沉脉。痰浊阻滞：头晕、头痛、失眠、太息、胸脘痞闷、胸胁脘腹胀痛、肥胖、口苦、口干、心烦、舌暗、薄苔、黄苔、弦脉、沉脉。气机郁滞：头晕、头痛、健忘、急躁、胸胁脘腹胀痛、太息、薄苔、舌红、黄苔、涩脉、弦脉。肾气亏虚：头晕、失眠、多梦、耳鸣、健忘、腰酸、急躁、齿松、齿痕舌、舌胖、舌暗、薄苔、白苔、细脉、尿频。(2)基因测序法检测ApoE基因多态性位点基因型：清晨抽取2 ml静脉血至于含乙二胺四乙酸(EDTA)试管中，并送至武汉市第三医院病理科提取DNA。20 μl PCR反应体系：2 μl 10×PCR缓冲液(Mg+)、4 μl 5×Q-Solution、0.2 μl HotStarTaq DNA Polymerase、2 μl dNTPmix，正向引物1 μl，反向引物1 μl，模板DNA 1 μl，无菌水8.8 μl。PCR条件：预变性：95℃ 15 min，变性：94℃ 50 s，退火：63～58℃ 1 min(-0.5℃/1 min)，延伸：72℃ 1 min，上述过程循环10次，变性：94℃ 50 s，退火：57℃ 1 min，延伸：72℃ 1 min，上述过程循环30次，最后72℃延伸10 min。采用PCR纯化试剂盒纯化PCR产物，随后进行测序。数据分析采用DNA sequencing analysis 5.1。试验仪器及试剂均购自QIAGEN公司。

1.3观察指标 ①采用Logistic多因素回归分析老年健忘的影响因素的。②通过记录健忘患者的主要、次要症状及舌质、舌苔、脉象，确定老年健忘的主要证型。③比较健忘与非健忘老人ApoE基因多态性位点基因型及等位基因频率。④比较健忘组不同中医证型受试者ApoE基因多态性位点基因型及等位基因频率。

1.4统计学处理 采用SPSS20.0软件进行方差分析、LSD-t检验、χ2检验。

2 结 果

2.1老年健忘症的影响因素的Logistic多因素回归分析 年龄、婚姻状况及邻里关系与老年健忘症患病显著相关(P<0.05)，见表1。

表1 老年健忘症的影响因素的Logistic多因素回归分析(n=179)

2.2老年健忘患者中医证型分布情况 179例老年健忘患者中中医证型为精髓空虚、痰浊阻滞、气机郁滞、肾气亏虚者分别为62例(34.64%)、35例(19.55%)、49例(27.37%)、33例(18.44%)。

2.3老年健忘与非健忘人群ApoE基因多态性位点基因型分布 共检测出ApoE基因E2/2、E2/3、E3/3、E2/4、E3/4、E4/4六种基因型(图1)，其中健忘患者E3/3基因型频率明显低于非健忘人群，E2/3、E3/4及E4/4基因型频率明显高于非健忘人群(P<0.05)；健忘与非健忘人群E2/2及E2/4基因型频率不存在显著差异(P>0.05)，见表2。

1～6：E2/2、E2/3、E3/3、E2/4、E3/4、E4/4图1 ApoE基因多态性基因检测图谱

表2 老年健忘与非健忘人群ApoE基因多态性位点基因型情况比较〔n(%)〕

2.4老年健忘与非健忘人群ApoE基因多态性位点等位基因频率比较 健忘患者ε3等位基因频率明显低于非健忘人群，ε4等位基因频率明显高于非健忘人群(P<0.05)，见表3。

2.5不同中医证型老年健忘患者ApoE基因多态性位点基因型比较 不同中医证型老年健忘患者E2/2、E2/3、E3/3、E2/4、E3/4、E4/4基因型频率差异均有统计学意义(P<0.05)。见表4。

2.6不同中医证型老年健忘患者ApoE基因多态性位点等位基因频率比较 气机郁滞型健忘患者ε2等位基因频率明显低于精髓空虚、痰浊阻滞、肾气亏虚型患者(P<0.05)；痰浊阻滞型健忘患者ε3等位基因频率明显高于精髓空虚、气机郁滞、肾气亏虚型患者(P<0.05)；气机郁滞、肾气亏虚型健忘患者ε4基因型频率明显高于精髓空虚及痰浊阻滞型患者(P<0.05)，见表5。

表3 老年健忘与非健忘人群ApoE基因多态性位点等位基因频率比较〔n(%)〕

表4 不同中医证型老年健忘患者ApoE基因多态性位点基因型比较〔n(%)，n=179〕

表5 不同中医证型老年健忘患者ApoE基因多态性位点等位基因频率比较〔n(%)，n=179〕

3 讨 论

据统计，全球老年性痴呆患者超过2 000万，我国约有400万痴呆患者，老年痴呆已成为继心脏病、肿瘤、脑卒中后的人类第四大杀手〔6,7〕。健忘是以脑功能减退为主要临床表现的一种病症，西医的脑动脉硬化症(CAS)与中医健忘相似，是老年痴呆的重要前驱症状。本研究提示应给予老龄人群更多关爱，定期组织家庭或集体活动，促进家庭内部及邻里之间和睦，以此降低老年健忘症的患病风险，避免老年痴呆症的发生〔8,9〕。

对于健忘，《灵枢·本神》有：“肾藏精，精舍志；肾盛怒而不止则伤志，志伤则喜忘前言。”在发病机制上，有学者认为老年健忘虚主要责之于心、脾、肾亏虚，实则主要为瘀血、痰浊、火热、肝郁。在脑动脉硬化(健忘)程度与中医证型关系上，有研究显示轻度脑动脉硬化以气虚血瘀证为主，重度脑动脉硬化以肝肾亏虚证为主〔10〕。但无专门针对60岁以上老年人群的证型研究，并且所选病例均为住院患者，不能代表实际人群的发病率及证型特征，因此需要对社区60岁老年人群进行普遍筛选，才能得出全面的老年健忘发病率及中医证型分布特征，本研究调查结果与同类型调查〔2〕结论较为一致。

西医对老年痴呆的研究从神经病理学、生物化学、基因学、病毒学等方面进行了广泛的研究，取得了可喜的进展，目前国内外学者一致认为ApoE基因与老年痴呆症的发生发展密切相关〔11～13〕。ApoE是一种重要的载脂蛋白组成成分，该基因在血脂代谢过程中扮演重要角色，而血脂异常是脑动脉硬化症主要的危险因素〔14～16〕，故推断ApoE基因与健忘症的发病相关。本研究提示ε4等位基因可作为老年健忘症患病的遗传标记。此外，本文研究发现，发现气机郁滞、肾气亏虚型老年健忘患者E4/4基因型频率及ε4基因型频率明显高于精髓空虚、痰浊阻滞型患者，进一步证实E4/E4基因型与肾虚血瘀证型相关，有学者提出ApoE基因多态性位点的不同基因型的心脑血管疾病患者其临床血脂改变谱及临床症状均存在明显差异，且从中医角度对高脂血症研究表明，不同中医证型患者间在血液流变学指标以及血脂指标均存在较大差异〔17～20〕，与本文研究结论类似。