紫朱软膏干预糖尿病足愈合过程中细胞因子表达

李文惠 杨晓 闫少庆 王丽翔 柳国斌

(1上海健康医学院，上海 201318；2上海中医药大学附属曙光医院)

创伤修复是涉及众多细胞、因子的复杂过程，糖尿病足溃疡属于常见难愈性溃疡之一，其愈合过程中伴随多种细胞因子的变化。研究表明糖尿病溃疡愈合早期伴随炎症反应持续状态〔1〕，其中炎性因子白细胞介素(IL)-1β与肿瘤坏死因子(TNF)-α在慢性溃疡愈合中表达异常可能导致创面延迟愈合〔2,3〕。糖尿病过程中累积的毒性物质终末糖基化产物(AGEs)，不仅能引起溃疡发生，也会延迟溃疡愈合〔4,5〕。血管内皮生长因子(VEGF)和表皮细胞生长因子(bFGF)是溃疡愈合必不可少的生长因子。本研究探讨了中药紫朱软膏在治疗糖尿病足溃疡过程中IL-1β、TNF-α、AGEs、bFGF及VEGF相关炎症生长因子的变化，观察“煨脓长肉”中药紫朱软膏治疗糖尿病足溃疡的作用。

1 对象与方法

1.1病例来源 2016年10月至2018年10月于上海中医药大学附属曙光医院外七科病房确诊为糖尿病足溃疡患者72例，随机分为两组。其中36例予常规换药+紫朱软膏外用，为紫朱软膏组；另36例予常规换药+凡士林纱布外用，为凡士林组。另选36例健康体检者作为对照组。患者均知情同意。3组年龄、性别差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。

表1 3组一般资料比较

1.2主要药物 紫朱软膏主要成分为朱砂(3.5 g/100 g)、紫草(1.5 g/100 g)、阿胶(2.5 g/100 g)、冰片(0.5 g/100 g)、龙血竭(3 g/100 g)及黄芪(1.5 g/100 g)六味药，另予凡士林为主要基质制成。人IL-1α酶联免疫吸附试剂盒(ab100562,abcam)、人TNF-β酶联免疫吸附试剂盒(ab46087,abcam)、人AGEs酶联免疫吸附试剂盒(MBS704358,My BioSource)、人bFGF酶联免疫吸附试剂盒(ab99979,abcam)、人VEGF酶联免疫吸附试剂盒(ab100663,abcam)。

1.3样本收集及检测 两溃疡组在治疗前及治疗第5、10天拍摄创面照片，通过计算机利用Image J医学图像分析软件(Image J-ij133-jdk15，美国国立卫生研究院)计算创面愈合率。治疗前及治疗第14天或出院前1 d(治疗时间≥10 d)采集所有患者外周血，离心收集血清。利用酶联免疫吸附法检测血清中IL-1β、TNF-α、AGEs、bFGF、VEGF的含量。

1.4统计方法 采用SPSS19.0软件进行t检验、方差分析、χ2检验及Spearman秩相关分析。

2 结 果

2.1糖尿病足溃疡患者愈合率分析 采用计算机联合软件的方法计算创面愈合率，因纳入病例住院时间不同，观察时间统一采用治疗后第5天及第10天。治疗后第5天，两组愈合率无统计学差异(P>0.05)；而治疗第10天，紫朱软膏组愈合率明显高于凡士林组(P<0.05)。见表2。

表2 两组治疗愈合率

2.23组血清中细胞因子水平比较 治疗前与对照组比较，紫朱软膏组和凡士林组IL-1β、TNF-α、AGEs表达明显偏低，而bFGF、VEGF表达明显偏高(P<0.05)；而紫朱软膏组与凡士林组无统计学差异(P>0.05)；治疗后，紫朱软膏组和凡士林组IL-1β、TNF-α、AGEs明显降低，bFGF-VEGF明显升高(P<0.05)，且两组IL-1β、AGEs、bFGF差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 3组血清中细胞因子水平比较

与对照组比较：1)P<0.05；与凡士林组治疗后比较：2)P<0.05

2.3患者血清中细胞因子与愈合率相关性 患者治疗前后血清中IL-1β表达量差值与溃疡愈合率呈负相关(r=-0.245，P=0.038)；TNF-α表达量差值与溃疡愈合率呈负相关(r=-0.259，P=0.028)；AGEs表达量差值与溃疡愈合率呈显著负相关(r=-0.477，P<0.001)。

3 讨 论

糖尿病足溃疡古亦称“脱疽”，中医学在治疗糖尿病足溃疡方面具有丰富的理论内涵和临床经验。中医学认为糖尿病足溃疡病因病机在全身表现为阴虚为本，在局部表现为瘀血、痰浊、热毒为标的疾病。中医药治疗糖尿病溃疡由来已久，以其“安全、有效、副作用小”等优势受到临床青睐，并产生了“益气化瘀”〔6〕“凉血散瘀”〔7〕及“煨脓长肉”〔8〕等理论，衍生出很多中药外用药物。紫朱软膏是在奚九一先生“煨脓长肉膏”方义上的化裁，方中采用朱砂、紫草、阿胶、冰片、龙血竭及黄芪六味药，朱砂外用有解毒生肌之功，用治疮疡肿毒，适用于溃疡久不收口；紫草具有清热解毒、活血凉血的功效；黄芪、阿胶补益气血，气血充为疮面愈合提供有利条件。六味药针对糖尿病足虚实兼夹病机状态，共奏煨脓长肉、袪腐生肌之效，相关临床应用表明紫朱软膏能促进糖尿病溃疡的恢复〔9,10〕，但其机制尚未明确。

糖尿病足溃疡属于慢性溃疡，相比急性创伤，存在炎症反应持续和生长增殖延迟的问题。溃疡愈合的初始事件是炎症反应，有大量证据表明糖尿病足溃疡愈合过程中伴随炎症反应持续状态〔1〕。在糖尿病足溃疡模型中，促炎性细胞因子如IL-1、TNF-α明显升高〔2〕，本研究也呈现出了相似结果。有研究指出糖尿病足慢性溃疡患者局部IL-1β水平明显高于急性溃疡，这就极大地抑制了成纤维细胞的生长，延缓创面愈合〔3〕；TNF-α同样属于炎性反应介导因子，参与溃疡愈合过程始末。本研究结果表明，炎症指标越低，越有利于愈合。在后期创面组织重塑过程中，EGF、FGF、TGF-β等生长因子可刺激肉芽组织及血管新生，并参与上皮细胞迁移、增殖，促进创面愈合。AGEs是糖尿病代谢重建的直接产物，与糖尿病性溃疡延迟愈合直接相关，其积累不仅能导致溃疡发生，也能通过抑制成纤维细胞增殖、分化等过程延缓溃疡愈合〔4，5〕。另外，AGEs 可以间接诱导超敏C反应蛋白(hs-CRP)的产生，更能导致其合成生长因子的能力下降或生长因子糖基化，使溃疡存在持续炎症及生长因子缺乏或活性不足的状态下，可能是影响糖尿病溃疡愈合的重要因素〔11,12〕，本研究相关结果表明其表达下降可能是促进溃疡愈合的重要因素之一。

本研究结果证明紫朱软膏能缓解糖尿病组溃疡患者炎症状态、提高局部生长因子水平。综上，紫朱软膏能促进糖尿病足溃疡的愈合，能改善糖尿病溃疡愈合过程中炎症反应持续、生长因子不足的状态，可以认为是紫朱软膏治疗糖尿病足溃疡的机制之一。