两种梅毒抗体免疫学检测方法临床应用对比

郑赫

梅毒(Syhillis)是由梅毒螺旋体(Treponema pallidum,TP)引起的传染病,其传染特性明显,一旦患者发生传染,病毒会快速的攻占全身细胞,几乎所有器官都难以避免［1］。而且因为患病个体的体质差异、患病时间等因素的影响,临床特征存在一定的差异性［2］,但是与其他普通疾病的症状相比又有很多相似性,因此导致误诊和漏诊几率都非常高。随着人们性观念的改变等,研究发现现在梅毒的发生率有升高的趋势,梅毒的发生会给患者身心造成很大的伤害,而且因为其特殊的传染途径,会给患者的伴侣以及家人造成恐慌等,大大降低了患者的生活质量及幸福指数［3］。因此及时检测确诊对治疗有着积极的意义。本文研究了TRUST 和TPPA 两种抗体免疫学检测方法在梅毒检测临床中的应用情况,现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取本院2017 年12 月～2018 年12 月收治的150 例梅毒患者为研究对象,其中男80 例,年龄18～72 岁,平均年龄(44.03±10.98)岁；女70 例,年龄20～73 岁,平均年龄(45.88±10.07)岁。

1.2 仪器和试剂 ①TRUST(Syphilis Toluidine Red Untreated Serum Test) 试剂,(北京万泰生物药业有限公司,国药准字S10940068)；②TP-PA(Particle agglutination test of treponema pallidum)试剂,(上海华臣生物试剂有限公司,国药准字S10940058)。

1.3 方法

1.3.1 血液样品的处理 采集患者空腹时静脉血,按照标准要求使用相应量的肝素进行抗凝,随后使用离心机进行分离,取其上层血清约4 ml,注意在整个过程中要进行无菌操作,确保标本无溶血、无脂血而且没有微生物污染,无需加热灭活,直接用于试验检测。

1.3.2 TRUST 方法 严格按照试剂盒说明进行使用,在室内温度适宜的条件下,首先对试剂进行稀释,稀释浓度为1∶32,稀释溶剂为普通生理盐水,稀释后在血液样本当中加入心磷脂应用于抗原,随后将待检测的血液样本放置于振荡器中进行水平振荡,振荡时间为8 min,注意在振荡过程中每间隔1 min,振荡的次数为100 次；振荡过程中要密切关注,如果出现凝集要进行及时记录,确定血液呈现阳性时候的滴度。

1.3.3 TPPA 方法 严格按照试剂盒说明进行使用,在适宜的室内温度条件下,首先使用稀释液将U 型板上的血清样本进行充分的稀释,稀释完成后依次加入未致敏明胶颗粒、致敏明胶颗粒,然后将血液样本孵育至少2 h,在过程中密切关注反应情况,对实验结果及时记录。

1.4 观察指标 比较两组方法对梅毒分期及总检测准确率。

1.5 统计学方法 采用SPSS19.0 统计学软件处理数据。计数资料以率(%)表示,采用χ2检验。P＜0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

病理结果显示：150 例患者均为梅毒感染患者,其中梅毒Ⅰ期90 例,Ⅱ期40 例,Ⅲ期20 例。TPPA 对梅毒Ⅰ期、Ⅲ期的检出准确率分别为95.56%、100.00%,均高于TRUST 的83.33%、80.00%,差异具有统计学意义(P＜0.05)；两种检测方法对梅毒Ⅱ期的检出准确率均为100.00%,比较差异无统计学意义(P＞0.05)。TPPA 对梅毒的检出总准确率为97.33%(146/150),高于TRUST的87.33%(131/150),差异具有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

表1 两种方法检测准确率比较［n(%)］

3 讨论

梅毒作为最常见的临床传染性疾病,其危害性极大。梅毒发病机理是机体感染了梅毒螺旋体,梅毒螺旋体是梅毒的病原体,其具有透明、不易着色的特点,又被称为苍白螺旋体［4］,其抗原分为三种：一是螺旋体表面特异性抗原,可以刺激机体产生特异的凝集抗体及密螺旋体制动或溶解抗体；二是螺旋体内类属抗原,可以产生补体结合抗体,与非病原性螺旋体有交叉反应；三是螺旋体与宿主组织磷脂形成的复合抗原,当螺旋体侵入组织后,组织中的磷脂可粘附在螺旋体上,形成复合抗原可刺激机体产生抗磷脂的自身免疫抗体。梅毒一般会通过直接接触、间接接触以及胎盘传染三种途径进行传播感染。其中直接接触传染又分为性直接接触、非性直接接触传染两种,性直接接触传染在所有传染中所占的比例最多,是最主要的传播途径之一［5］。梅素螺旋体对于温度和干燥具有很高的敏感性,通常离体干燥一到两个小时就会死亡,而且对于对化学消毒剂、一些药品如青霉素、四环素、砷剂等也存在很高的敏感性［6］。

人体是梅毒唯一的自然传染源,也就是唯一宿主,通常分为先天性梅毒和后天性梅毒两种。先天性梅毒是指母体患有梅毒通过妊娠将梅毒螺旋体传染给胎儿,通常会在胎儿体内大量繁殖造成胎儿机体组织发生病变,导致流产或者胎死腹中［7］；大多数的梅毒感染者属于后天传染,按照传染过程分为三期：Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期,Ⅰ期和Ⅱ期又统称为早期梅毒,此期传染性强而破坏性小,Ⅲ期梅毒又称为晚期梅毒,该期传染性小、病程长而破坏性大［8］。Ⅰ期梅毒是指梅毒螺旋体侵入皮肤黏膜约3 周后,再侵入局部出现无痛性硬结及溃疡,称为硬性下疳。局部组织镜检可见淋巴细胞及巨噬细胞浸润。下疳多发生于外生殖器,其溃疡渗出物含有大量梅毒螺旋体,传染性极强。下疳常可自然愈合,约2～3 个月无症状的隐伏期后进入第Ⅱ期。Ⅱ期梅毒：进入Ⅱ期后其主要表现为全身皮肤黏膜出现梅毒疹,全身淋巴结肿大,有时亦累及骨、关节、眼及其他器官。在梅毒疹及淋巴结中有大量螺旋体。不经治疗症状一般可在3 周～3 个月后自然消退而全愈；部分病例经隐伏3～12 个月后可再发作,但是要特别注意Ⅱ期梅毒如果治疗不当,经过5 年或更久的反复发作,而进入Ⅲ期。Ⅲ期梅毒：主要表现为皮肤黏膜的溃疡性损害或内脏器官的肉芽肿样病变(梅毒瘤),严重者在经过10～15 年后引起心血管及中枢神经系统损害,导致动脉瘤、脊髓痨及全身麻痹等,此期的病灶中螺旋体很少,不易检出。

梅毒的强危害性以及传染性通常会给患者造成很大的伤害,及时的诊断治疗可以有效阻断进一步的传播。目前较为常用的方法为梅毒抗体检测是免疫学检测方法,TRUST 和TPPA 是其中使用较高的方法。TRUST 是采用抗原抗体凝集反应中的抗原抗体凝集反应,其原理是：将梅毒(Nichols 株)的精制菌体成分包被在人载体明胶粒子上,这种致敏粒子会和样品中的梅毒螺旋体抗体发生凝集反应从而产生粒子凝集反应抗体,并且可用来测定抗体效价,此方法的优势是反应素滴度动态变化,可以应用于治疗效果的观察,或者复发以及治愈后再次感染后的检测,此方法最大优点是其操作非常简便而且费用低廉,进行广谱性检查时快速有效,但是其主要缺点是无法明确反映出以往是否发生过感染,而且如果患者同时感染了相关性的疾病,就很有可能检测出假阳性结果［9］。TPPA 方法的主要原理是苍白螺旋体致敏明胶颗粒可以与患者血清当中的梅毒螺旋体抗体发生结合反应,从而形成凝集效应,使用TPPA 时其检测阳性率相对较高,作为筛选阳性标本复检以及发生疑似感染时进行确诊实验时十分有效。但是也要看到,只要患者感染梅毒螺旋体,其检测结果就会一直显示阳性,无法判定其梅毒病程,还需要结合其他方法进行分析确认［10］。

本文研究结果可知,病理结果显示：150 例患者均为梅毒感染患者,其中梅毒Ⅰ期90 例,Ⅱ期40 例,Ⅲ期20 例。TPPA 对梅毒Ⅰ期、Ⅲ期的检出准确率均高于TRUST,差异具有统计学意义(P＜0.05)；两种检测方法对梅毒Ⅱ期的检出准确率均为100.00%,比较差异无统计学意义(P＞0.05)。TPPA 对梅毒的检出总准确率高于TRUST,差异具有统计学意义(P＜0.05)。因此说明TPPA 方法在临床中使用价值相对更高。张林丽等［11］对比了四种梅毒抗体检测方法,同样发现TPPA 方法检测结果敏感度更高,与本文研究结果一致。

综上所述,采用TPPA 方法检测梅毒优于TRUST方法,可以为临床诊断提供重要依据,具有很高的临床推广使用价值。