EZH2及Fascin蛋白在侵袭性垂体腺瘤组织中的表达及临床意义

周峰，何华

榆林市第一医院神经外科1、眼科2，陕西 榆林 718000

垂体腺瘤作为一种较为常见的神经内分泌肿瘤，绝大部分表现为良性肿瘤特征，但仍有部分呈侵袭性生长，常表现为海绵窦、鞍底骨质等周围结构破坏[1]。通常具有侵袭性的垂体腺瘤难以通过手术进行全切，而且术后易复发，还会伴随分泌功能紊乱等，在临床诊断和治疗方面有着极大的困难。近来研究发现，垂体腺瘤的发生、发展与癌基因的激活、抑癌基因的失活有关[2]。Zeste 基因增加子同源物2 (EZH2) 可以沉默数百种细胞，能够通过影响肿瘤分化、增殖相关基因的表达情况来参与肿瘤的发生发展进程[3]。肌动蛋白结合蛋白 (Fascin) 在细胞迁移、黏膜黏附及信息传递等过程中发挥着重要作用，与肿瘤细胞的侵润密切相关[4]。本研究通过检测侵袭性垂体腺瘤患者中的EZH2 和Fascin蛋白的表达水平，分析其与侵袭性垂体腺瘤预后关系，以期对侵袭性垂体腺瘤在临床医学的诊断及治疗提供更多帮助。

1 资料与方法

1.1 一般资料 回顾性收集2013 年5 月至2016年5月榆林市第一医院收治的102例垂体腺瘤患者的临床资料，将其分为侵袭组50例和非侵袭组52例，两组患者的性别、年龄、激素类型比较差异均无统计学意义 (P＞0.05) ，具有可比性，见表1。

表1 两组患者一般资料比较

1.2 病例选择 (1) 侵袭性垂体腺瘤患者纳入标准：①Hardy-Wilson 分级≥Ⅲ级和C-E 期/Knosp≥Ⅲ级；②术中发现海绵窦内侧壁有瘤组织侵犯，或鞍底破坏，瘤组织突入蝶窦。 (2) 垂体腺瘤患者纳入标准：①经术后病理学证实为垂体腺瘤者；②病历和影像学资料完整者；③均为首诊首治患者。 (3) 排除标准：①围术期有严重并发症者；②伴有家族恶性肿瘤遗传病史。

1.3 方法

1.3.1 免疫组化 所有患者均行免疫组织化学Envision 法检测：取手术中切除的垂体腺瘤组织标本常规固定，切片脱蜡至水化，蛋白酶消化或经微波处理，加入过氧化酶阻断剂后，继续微波辐射2 min，磷酸盐缓冲液 (PBS) 清洗后，加入EZH2、Fascin 一抗 (购自于福州迈新公司) ，微波炉孵育3 min，加二抗EnvisionTM4000，微波3 min，PBS 洗后加入酶底物显色，清水冲洗，复染后封片，显微镜下观察。

1.3.2 结果判定 所有标本经免疫组化处理后，由病理科医师采用双盲法评测。EZH2、Fascin均主要表达在细胞核，结果参照Shimizu半定量积分法，随机选取至少5个清晰高倍视野进行观察，以阳性细胞比例及反应强度进行评分。染色强度评分标准：0分 (阴性) 、1分 (淡黄色) 、2分 (黄色或深黄) 和3分 (褐色或深褐色) 。阳性细胞所占比例：未见阳性细胞为0分、阳性细胞率≤25%为1分、25%～50%为2分、＞50%为3分。对以上2项计分相乘进行综合评分：0分为-，1～2分为+、3～4分为++、5～9分为+++，其中≥3分为染色阳性。

1.4 随访 患者自病理确诊之日起开始门诊复查或电话随访，治疗后1年内每3个月门诊复查1次，2年内半年复查1次，以后至少每年复查一次，所有患者均完成3 年随访。随访记录生存时间及随访时状态 (存活、死亡或其他) 等。

1.5 统计学方法 采用SPSS17.0 软件对实验数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差表示，组间比较采用t 检验；计数资料以构成比 (%) 表示，采用χ2检验；相关性分析采用Pearson 相关系数分析，利用Logistic 回归模型分析影响侵袭性垂体腺瘤患者预后的危险因素；Kaplan-Meier 法分析生存率，采用Log-rank 法检验。均以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者的EZH2及Fascin水平比较 EZH2在侵袭组和非侵袭组中的阳性表达率分别为74.00%、51.92%，Fascin 在侵袭和非侵袭组中的阳性表达率分别为66.00%、30.77%。两组结果比较，侵袭组患者的EZH2、Fascin 阳性率明显高于非侵袭组，差异均有统计学意义 (P＜0.05) ，见表2。

表2 两组患者的EZH2及Fascin水平比较 (例)

2.2 侵袭性垂体腺瘤患者EZH2及Fascin水平的相关性 Pearson 相关性分析结果显示，EZH2 与Fascin阳性表达水平呈正相关 (r=0.672，P＜0.01) 。

2.3 影响侵袭性垂体腺瘤患者预后的单因素和多因素分析 单因素分析显示，肿瘤大小、EZH2、Fascin水平与侵袭性垂体腺瘤有关 (P＜0.05) ；将上述有统计学意义的危险因素作为自变量，以是否确诊侵袭性垂体腺瘤为应变量进行赋值 (肿瘤大小：≥3 cm=1、＜3 cm=0；EZH2：阳性=1、阴性=0；Fascin：阳性=1、阴性=0) ，多因素分析显示，肿瘤≥3 cm、EZH2 阳性及Fascin 阳性水平是影响垂体腺瘤发展的危险因素 (P＜0.05) ，见表3。

表3 影响垂体腺瘤患者预后的单因素和多因素分析

2.4 EZH2、Fascin水平与侵袭性垂体腺瘤患者总生存率的关系 由生存曲线可知，侵袭性垂体腺瘤患者中EZH2、Fascin 阴性表达者的生存率分别为92.31%、88.24%，明显高于EZH2、Fascin 阳性表达者的54.05%、51.52%，差异均有统计学意义 (χ2=3.910，P=0.048；χ2=3.982，P=0.046) ，见图1。

图1 EZH2（A）和Fascin（B）的Kaplan-Meier生存曲线

3 讨论

EZH2作为一种组蛋白，具有甲基转移酶活性，能够通过抑制其下游靶基因转录来调节干细胞自我更新[5]。Fascin 蛋白是一类结构独特且进化保守的细胞骨架蛋白，能够参与细胞膜突起及包胞浆微丝束的形成进而增加细胞运动性[6]。近年来研究表明，EZH2、Fascin 蛋白在许多恶性肿瘤中均呈阳性，正常组织中为阴性表达，可能与肿瘤的侵袭性和预后相关，如食管鳞状细胞癌[7]、胃癌[8]、结肠癌[9]等。KIM等[10]通过回顾EZH2在多种肿瘤中的发生机制，发现EZH2基因可明显抑制肿瘤转移抑制基因表达，促进肿瘤细胞的侵袭转移殖。TSAI 等[11]观察50 例壶腹部胰腺癌中Fascin 蛋白表达水平，结果表明Fascin 免疫染色的强度与患者的肿瘤恶性程度呈正相关，与患者的生存率呈负相关。

本研究中，侵袭性垂体腺瘤组患者EZH2、Fascin阳性率明显高于对照组。可能是细胞中EZH2、Fascin蛋白参与的一系列活动导致细胞膜突起、细胞间连接丧失，促使瘤组织侵袭能力和迁移能力增强。

多因素分析得出，肿瘤大小、EZH2、Fascin蛋白水平是影响侵袭性垂体腺瘤患者预后的独立因素，与既往研究一致[12]。SASAKI 等[13]用免疫组织化方法证实胆管癌患者中EZH2 水平过度表达。ZHIYUAN 等[14]研究表明Fascin水平的增加与垂体腺瘤的侵袭性密切相关，可用于垂体腺瘤的诊断和预测。除此之外，还有研究发现EZH2、Fascin蛋白阳性表达是侵袭性垂体腺瘤发展的独立危险因素[15]，可能是因为侵袭性垂体腺瘤细胞中，EZH2 蛋白的阳性表达导致正常细胞生长失控，垂体腺瘤细胞增殖[16]，而Fascin蛋白的阳性表达则使NF-κB活性上调，导致细胞外基质的降解和基底膜的破坏，增强肿瘤细胞的侵袭性[17]。本研究结果显示，EZH2、Fascin蛋白阴性表达患者的3年生存率显著高于EZH2、Fascin 蛋白阳性表达，进一步说明高EZH2、Fascin蛋白表达水平预示患者预后不良。

综上所述，EZH2、Fascin 蛋白阳性表达变化可作为判断侵袭性垂体腺瘤发生、发展的重要指标，不仅能够影响患者的短期生存率，而且对侵袭性垂体腺瘤患者具有较好的预后预测价值，可作为侵袭性垂体腺瘤患者预后不良的分子标志物。