羊水过少对妊娠结局及胎盘组织中Cx43、Caspase7蛋白表达的影响

姚瑾，滕颖

(沈阳市第五人民医院妇产科，沈阳 110000)

羊水是孕妇子宫羊膜腔内的液体，是胎儿在整个生长发育过程中的重要环境和成分，对维持胎儿在子宫内环境的新陈代谢和水的平衡及健康生长发育具有重要作用。妊娠晚期羊水少于300 ml，被称为羊水过少，是围产期常见并发症，对妊娠维持、分娩母婴及临床结局影响较大[1]。羊水量过少的影响因素较多，目前其发病机制尚不清楚。

缝隙连接蛋白43(Cx43)是细胞通道蛋白家族成员之一，在水、离子及电解质的转运、循环中发挥重要作用[2]。Caspases是近年来发现的一组存在于胞质溶胶中的结构上相关的半胱氨酸蛋白酶，其中半胱氨酸肽酶7(Caspase7)是细胞凋亡因子家族成员[3]。目前临床对于Cx43、Caspase7与羊水过少的研究较少，本研究旨在研究羊水过少对母婴妊娠结局的影响，并检测胎盘组织中Cx43、Caspase7蛋白的表达，分析羊水过少与Cx43、Caspase7蛋白之间的关系和作用机制，为羊水过少的围生期并发症的防控及发生机制提供依据。

资料与方法

一、一般资料

1.研究对象：选取本院2016年1月至2018年12月诊断为羊水过少的孕产妇110例为研究对象(研究组)。入选标准：均经B超检查羊水指数(AFI)≤5，或者最大羊水暗区的垂直径(AFV)≤2 cm，单胎，孕周37～41周。排除标准：合并有妇科肿瘤、妊娠期高血压、妊娠糖尿病、严重贫血、吸烟及滥用药物史者。选取同期羊水正常产妇110例作为对照组。本研究经本院伦理委员会审批通过，所有患者知情同意并均签署知情同意书。

二、研究方法

1.材料和仪器：兔Cx43多克隆抗体(购自武汉博士德公司)，重组Caspase7兔单克隆抗体(购自丹麦Dako公司)，DAB显色试剂盒(购自北京中山公司)，Cx43、Caspase7一抗工作浓度均为1∶50。显微镜与照相机为日本OLIMPUS公司产品。

2.免疫组化：取两组产妇产后的胎盘组织，用4%多聚甲醛固定，石蜡包埋切片，常规S-P免疫组化二步法，DAB显色，脱水，透明和封片[4]。

3.结果判断：显微镜下观察Cx43、Caspase7蛋白的表达水平，每个样本选择5个细胞清晰的高倍视野(×400)观察。免疫组化判断标准：Caspase7、Cx43蛋白的阳性着色表达于细胞膜和细胞质，呈黄色、棕黄色、褐色表达。根据着色强度(无色、淡黄色、棕黄色、褐色)分别赋分0分、1分、2分、3分；根据阳性细胞所占比例(≤10%、11%～50%、51%～75%、>75%)分别赋分1分、2分、3分、4分。两种积分相乘评估阳性表达率，分为阴性(总分<3分)和阳性(≥3分)，并按照阳性程度分为“+”(3～5分)、“++”(6～9分)、“+++”(>9分)[5]。

4.研究指标：记录两组孕产妇围生期结局，观察新生儿不良反应。

三、统计学分析

结 果

1、两组一般资料比较

研究组共纳入110例患者，平均年龄(26.5±7.6)岁，孕周(39.5±3.1)周，产前体重(74.32±8.09)kg。同期选取的110例对照组，平均年龄(26.6±7.9)岁，孕周(39.4±3.2)周，产前体重(74.47±8.36)kg。两组产妇的临床基线资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)。

二、两组母婴围生期结局比较

研究组的剖宫产率及引产率均显著高于对照组，同时其产程异常发生率也显著高于对照组，差异均具有统计学意义(P<0.05)(表1)。此外，研究组新生儿不良结局总发生率显著高于对照组，差异具有统计学意义(P<0.05)(表2)。

三、两组产妇胎盘Cx43、Caspase7蛋白表达结果比较

研究组产妇胎盘Cx43蛋白阳性率、阳性程度及阳性评分均显著低于对照组，差异具有统计学意义(P<0.05)(表3、图1A)；研究组产妇胎盘Caspase7蛋白阳性率、阳性程度及阳性评分均显著高于对照组，差异具有统计学意义(P<0.05)(表4、图1B)。

表1 两组产妇生产方式和产程情况比较 (%)

注：与对照组比较，*P<0.05

表2 两组新生儿不良结局比较[n(%)]

注：与对照组比较，*P<0.05

表3 胎盘Cx43蛋白表达结果比较[(±s)，n(%)]

注：与对照组比较，*P<0.05

表4 胎盘Caspase7蛋白表达结果比较[(±s)，n(%)]

注：与对照组比较，*P<0.05

图1 胎盘组织中Cx43、Caspase7蛋白免疫组化分析(×400)

讨 论

羊水是维系胎儿生存的要素之一，对于稳定子宫温度环境、缓冲腹部外来压力及提供胎儿内环境均具有重要作用。孕产妇正常妊娠，随着孕周的增加羊水量逐渐增多，孕38周时可达1 000 ml，足月时一般约为800 ml左右。在妊娠期间，孕妇羊水过多或过少都属于异常情况，其中以羊水过少居多，影响孕产妇母婴结局。

怀孕过程中，胎儿肺泡吸入适量羊水有助于其膨胀和肺的发育，使胎儿发生宫内窘迫的几率减少，而羊水过少增加了胎儿宫内窘迫的发生几率。在孕妇待、临产过程中出现宫缩时，羊水过少胎儿及脐带容易受压引起胎儿宫内窘迫、新生儿窒息等，影响分娩方式。羊水过少导致阴道试产过程中胎儿对宫缩变化的耐受力下降，增加孕妇的剖宫产率[6]。胎儿可以通过羊水获取营养物质，羊水量会随着妊娠时间而改变，而羊水过少可对胎儿生长、发育产生严重危害，导致胎儿生长发育受到限制，低体重儿增加[7]，这也可能就是本研究中足月羊水过少新生儿不良结局中新生儿低体重儿发生率高的原因。此外，本研究中研究组羊水粪染和绒毛膜羊膜炎均显著高于对照组，这可能是羊水过少会降低分娩时羊水的冲洗能力，造成胎粪或细菌感染引起的[8]。本次研究结果显示，研究组产妇剖宫产、产程异常、新生儿不良结局总发生率均显著高于对照组(P<0.05)。

本次研究结果显示，研究组产妇胎盘Cx43蛋白阳性表达显著降低，而Caspase7蛋白阳性表达显著上调(P<0.05)，可能在影响羊水过少的发生过程中发挥了重要的作用。Cx是构成连接子的基本结构单位，广泛地存在于哺乳动物的器官、组织中。Cx43不仅有细胞通讯功能，还在上皮细胞和基质细胞之间存在广泛的缝隙连接，在细胞生长、分化、凋亡等过程中发挥着重要作用，其异常表达与多种妇产科疾病也存在密切关系[9]。Cx43蛋白的增加能够有效促进水或者离子及电解质的转运，提高液体的循环速度。Cx43蛋白低表达时，细胞间缝隙连接的数量下降，影响水通道蛋白的数量及生理活性。妇女孕期，Cx43蛋白的下调影响胎盘的血流灌注量，影响到水、电解质及离子等的代谢及转运，使羊水形成减少；也影响胎儿尿量的形成等，使羊膜层上皮细胞吸收水钠等电解质的作用加强，进而减少羊水总量，导致羊水过少的发生[10-11]。郭丹凤等[12]在研究中将产妇分为羊水过少组、羊水正常组，结果显示，胎膜、胎盘组织的Cx43蛋白表达呈现下降趋势，均与妊娠晚期的羊水量呈负相关(P<0.05)，与本次研究结果相吻合。

Caspase7是细胞凋亡因子家族成员，是细胞凋亡进程的重要执行分子，参与细胞的氧化应激或程序性凋亡等病理过程。Caspase7的过表达可导致胎盘血管内皮细胞的氧化应激损伤，进而影响通过胎盘的血流灌注量、胎盘的滤过功能及水、电解质代谢功能，降低羊水形成的速度，导致羊水形成障碍。Caspase7的过表达也增加了上皮细胞萎缩、坏死或者程序性凋亡的风险，导致胎盘绒毛膜滋养细胞或者合体滋养细胞功能的退化，可影响叶状绒毛膜或者胎膜上皮细胞的生理作用，导致羊水循环功能的下降，羊水的形成及羊水量受到一定影响[13-14]。李小琴等[15]分别检测羊水过少、羊水过多、羊水量正常产妇脐带血Caspase7蛋白水平，结果显示，产妇羊水过少或过多者脐带血Caspase7蛋白水平均呈现高表达，认为与羊水量的异常有关，与本次研究结果相一致。Caspase7蛋白高表达可造成胎盘血管的氧化应激反应，Cx43蛋白低表达会影响缝隙连接蛋白的活性，二者均导致羊水的减少，但Caspase7蛋白与Cx43蛋白之间的相互作用分子机制仍待后续研究。

综上所述，羊水过少产妇阴道顺产率降低，产妇产程异常、新生儿不良结局总发生率上升；产妇胎盘Cx43蛋白阳性表达下降、Caspase7蛋白阳性表达上升的趋势，可能与羊水过少有关。