柯拉斯那沉香的化学成分研究

吴亚丽，李 薇，王 昊，梅文莉，盖翠娟，董文化，陈志宝*，戴好富*

1黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院，大庆163319；2中国热带农业科学院热带生物技术研究所，海南省沉香工程技术研究中心；3海南省黎药资源天然产物研究与利用重点实验室，海口 571101

沉香为瑞香科(Thymelaeaceae)沉香属(Aquilaria)或拟沉香属(Gyrinops)植物中含有树脂的芯材[1]，是中国、日本、印度以及其他一些东南亚国家的传统名贵药材和天然香料，被誉为“药中黄金”和“香中之王”[2]。沉香在两千多年前的传统中医学、传统印度医学里就有将其入药使用的记载。其味辛、苦，性微温，具有行气止痛、温中止呕、纳气平喘、呕吐呃逆、肾虚气逆喘急等功效，用于治疗胸腹胀闷疼痛、胃寒呕吐呃逆、肾虚气逆喘急有显著功效[3]。并且沉香是世界五大宗教(佛教、道教、基督教、伊斯兰教和天主教)共同认可的圣物，以其唯一能通三界的香气而闻名[4]。沉香由于在药用、香料及文化等各个方面都具有很大的市场价值。而野生沉香形成缓慢，产量低，市场需求量又大，其次由于人为的滥砍滥伐，其野生沉香资源面临枯竭[5]。所有沉香属植物均被列入了《濒危野生动植物种国际贸易公约》[6]。

迄今为止，全世界共报道23种沉香属植物，从南亚次大陆的东北部，到印度尼西亚群岛及巴布亚新几内亚群岛均有分布，其中柯拉斯那沉香树(A.crassna)主要分布于老挝、泰国、越南和柬埔寨[7]。据报道，目前已从马来西亚、老挝、国产等沉香中分离鉴定出了400多个化学成分，其主要成分是2-(2-苯乙基)色酮类化合物和具有多种骨架类型的倍半萜类化合物[4,8-10]。而柯拉斯那沉香作为国际市场上交易的沉香的重要组成之一，到目前为止，关于柯拉斯那沉香的化学成分和生物活性研究报道较少，因此本课题组对野生柯拉斯那沉香进行系统性研究。课题组前期对野生柯拉斯那沉香进行化学成分研究，发现并报道了一系列的2-(2-苯乙基)色酮类单体化合物和聚合物，以及少量的倍半萜类单体化合物[9,10]。本次研究选用柬埔寨野生柯拉斯那沉香为材料，对柯拉斯那沉香进行化学成分研究，以期丰富柯拉斯那沉香的化合物结构类型，并为柯拉斯那沉香的开发和利用提供科学依据，也为柯拉斯那沉香的质量评价提供参考。本次实验从柬埔寨柯拉斯那沉香中分离得到了8个倍半萜类化合物，3个2-(2-苯乙基)色酮类化合物和1个2-(2-苯乙烯基)色酮类化合物。化合物2～11均是首次从柯拉斯那沉香分离。化合物结构见图1。

图1 化合物1～12的结构Fig.1 Chemical structures of compounds 1-12

1 仪器与材料

Bruker AV-500型超导核磁仪购于德国Bruker公司；质谱仪(Bruker amazon SL公司)；紫外光谱仪(UV-2550 Shimadzu)；红外光谱仪(Nicolet 380美国赛默飞世尔Thermo公司)；旋光仪MCP 5100(奥地利Anton Paar有限公司)；CA-1111冷却水循环装置(上海爱朗仪器有限公司)；BSA-100A自动部分收集器(上海青浦沪西仪器厂)；旋转蒸发仪(德国 HeidolphLaborota)；METTLER TOLEDO ME204精密和分析天平[万分之一，梅特勒-托力多仪器(上海)公司]；超净工作台(上海博讯实业有限公司医疗设备厂)；ELX-800酶标仪(美国宝特公司)；TMS为内标层色谱硅胶板G，柱层析硅胶G(H，200～300目，60～80目)(青岛海洋化工厂)；凝胶Sephadex LH-20(德国Merck公司)；乙酰胆碱酯酶；碘化硫代乙酰胆碱；二硫代二硝基苯甲酸(DNTB)；他克林(美国Sigma公司)。

沉香样品于2017年11月购于柬埔寨金边，经中国热带农业科学院热带生物技术研究所王军博士鉴定其基源植物为柯拉斯那(A.crassna)，标本编号为(JPZ20171101)，保存于中国热带农业科学院热带生物技术研究所。

2 提取与分离

将干燥的柬埔寨野生柯拉斯那沉香芯材样品(928.0 g)，机械粉碎后用95%乙醇通过加热回流提取3次(每次3 h，每次加入乙醇5 L)，经减压浓缩得乙醇浸膏375.2 g。用水将乙醇浸膏分散形成悬浊液，再用石油醚进行萃取，得到浸膏440.0 mg，剩余部分经减压柱色谱，以氯仿-甲醇(1∶0→0∶1)梯度洗脱，得到20个流份(Fr.1～Fr.20)。

Fr.6(3.0 g)经ODS柱色谱，以甲醇-水(3∶10→1∶0)梯度洗脱，得到25个亚组分(Fr.6-1～Fr.6-25)。Fr.6-8(43.6 mg)经硅胶柱色谱，以石油醚-丙酮(120∶1)为洗脱剂，得到化合物1(0.9 mg)。Fr.6-17(210.6 mg)经硅胶柱色谱，以石油醚-二氯甲烷-丙酮(500∶1∶1)得到3个流份(Fr.6-17-1～Fr.6-17-3)。Fr.6-17-1(7.1 mg)经硅胶柱色谱，以石油醚-氯仿-丙酮(50∶1∶1)为洗脱剂，得到化合物2(1.7 mg)。Fr.6-17-2(54.5 mg)经硅胶柱色谱，以石油醚-丙酮(400∶1)为洗脱剂，得到化合物3(11.3 mg)。Fr.6-24(170.4 mg)经硅胶柱色谱，以石油醚-乙酸乙酯(250∶1)为洗脱剂，得到化合物4(1.2 mg)。Fr.6-16(71.3 mg)经硅胶柱色谱，以石油醚-氯仿-乙酸乙酯(150∶1∶1)为洗脱剂，得到化合物5(3.9 mg)。Fr.6-18(41.8 mg)经硅胶柱色谱，以石油醚-乙酸乙酯(300∶1)为洗脱剂，得到化合物6(1.8 mg)。Fr.6-13(62.4 mg)经硅胶柱色谱，以石油醚-氯仿-丙酮(150∶1∶1)为洗脱剂，得到化合物7(1.7 mg)。Fr.6-22(110.8 mg)经硅胶柱色谱，以石油醚-丙酮(500∶1)为洗脱剂，得到化合物9(1.5 mg)。

Fr.7(1.9 g)经ODS柱色谱，以甲醇-水(4∶10→1∶0)梯度洗脱，得到22个亚组分(Fr.7-1～Fr.7-22)。Fr.7-8(41.3 mg)经硅胶柱色谱，以石油醚-二氯甲烷-丙酮(120∶1∶1)为洗脱剂，得到化合物8(3.6 mg)。Fr.7-16(210.0 mg)，经硅胶柱色谱，以石油醚-二氯甲烷-丙酮(300∶1∶1)得到化合物10(3.3 mg)和化合物11(12.0 mg)。Fr.7-16-2(23.6 mg)，经硅胶柱色谱，以石油醚-二氯甲烷-乙酸乙酯(150∶1∶1)得到化合物12(3.3 mg)。

3 结构鉴定

化合物1无色油状物质(CHCl3)；ESI-MS：m/z235.4[M + H]+；分子式C15H22O2；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δH:5.74(1H，s，H-9)，2.82(1H，d，J=4.5 Hz，H-12)，2.70(1H，d，J=4.5 Hz，H-12)，2.45(1H，td，J=12.6，4.9 Hz，H-1)，2.27(1H，dd，J=13.7 Hz，4.4 Hz，H-6)，2.12～2.16(1H，m，H-1)，2.09(1H，dd，J=14.7，4.4 Hz，H-7)，1.96～2.01(1H，m，H-3)，1.82～1.87(1H，m，H-4)，1.72(1H，dd，J=14.7，13.6 Hz，H-6)，1.56～1.59(1H，m，H-2)，1.51(1H，dq，J=12.9，4.1 Hz，H-3)，1.32～1.38(1H，m，H-2)，1.25(3H，s，H-13)，1.10(3H，s，H-14)，0.95(3H，d，J=6.7 Hz，H-15)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δC:33.1(C-1)，29.8(C-2)，30.3(C-3)，37.9(C-4)，40.5(C-5)，34.2(C-6)，49.6(C-7)，198.3(C-8)，122.4(C-9)，173.3(C-10)，56.2(C-11)，56.1(C-12)，17.3(C-13)，21.2(C-14)，16.2(C-15)。以上数据与文献[11]报道一致，故鉴定化合物1为7α-H-9(10)-ene-11,12-epoxy-8-oxoeremophilane。

化合物2无色油状物质(CHCl3)；ESI-MS：m/z235.1[M + H]+；分子式C15H22O2；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δH:5.74(1H，s，H-9)，2.61(1H，d，J=4.3 Hz，H-12)，2.55(1H，d，J=4.3 Hz，H-12)，2.45(1H，dd，J=13.7 ，4.8 Hz，H-7)，2.43(1H，t，J=5.2 Hz，H-1)，2.08(1H，dd，J=14.0，4.6 Hz，H-6)，2.08～2.10(1H，m，H-1)，1.95～1.98(1H，m，H-2)，1.81～1.86(1H，m，H-4)，1.58～1.64(1H，m，H-3)，1.50～1.53(1H，m，H-3)，1.51(1H，dd，J=13.9，13.6 Hz，H-6)，1.44(3H，s，H-13)，1.23～1.26(1H，m，H-2)，1.08(3H，s，H-14)，0.94(3H，d，J=6.7 Hz，H-15)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δC:33.0(C-1)，29.5(C-2)，30.4(C-3)，38.5(C-4)，40.3(C-5)，34.2(C-6)，47.4(C-7)，198.5(C-8)，122.8(C-9)，172.3(C-10)，56.2(C-11)，51.2(C-12)，21.1(C-13)，20.8(C-14)，16.2(C-15)。以上数据与文献[11]报道一致，故鉴定化合物2为7β-H-9(10)-ene-11,12-epoxy-8-oxoeremophilane。

化合物3无色油状物质(CHCl3)；ESI-MS：m/z219.3[M + H]+；分子式C15H22O；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δH:5.79(1H，s，H-9)，4.95(1H，d，J=1.1 Hz，H-12)，4.74(1H，br s，H-12)，3.06(1H，dd，J=12.0，5.1 Hz，H-7)，2.42(1H，td，J=12.7，5.1 Hz，H-1)，2.16(1H，m，H-1)，1.97(3H，m，H-6，H-3)，1.85(1H，m，H-4)，1.77(3H，s，H-13)，1.58(1H，dd，J=8.7，6.9 Hz，H-2)，1.50(1H，m，H-3)，1.41(1H，m，H-2)，1.07(3H，s，H-14)，0.94(3H，s，H-15)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δC:33.2(C-1)，29.3(C-2)，30.4(C-3)，39.4(C-4)，40.5(C-5)，37.6(C-6)，50.5(C-7)，199.7(C-8)，122.9(C-9)，172.0(C-10)，143.9(C-11)，113.8(C-12)，20.7(C-13)，20.2(C-14)，16.1(C-15)。以上数据与文献[12]报道一致，故鉴定化合物3为neopetasane(eremophila-9,11-dien-8-one)。

化合物4无色油状物质(CHCl3)；ESI-MS：m/z223.2[M + H]+；分子式C15H26O；1H-NMR(500 MHz，CDCl3)δH:5.30(1H，ddd，J=5.7，2.2，2.2 Hz，H-9)，2.13(1H，br t，J=12.1 Hz，H-1)，2.04(1H，m，H-8)，1.99(1H，br d，H-1)，1.83(1H，ddd，J=12.3，2.2，2.2 Hz，H-6)，1.77(1H，dddd，J=17.0，12.1，2.2，2.2 Hz，H-8)，1.73(1H，m，H-2)，1.61(1H，dddd，J=12.3，12.1，4.9，2.2 Hz，H-7)，1.41(1H，m，H-2)，1.32(1H，m，H-3)，1.26(1H，m，H-4)，1.25(1H，m，H-3)，1.21(3H，br s，H-12 or H-13)，1.17(3H，br s，H-13 or H-12)，0.98(1H，dd，J=12.3，12.3 Hz，H-6)，0.95(3H，s，H-14)，0.85(3H，d，J=6.7 Hz，H-15)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δC:32.4(C-1)，27.7(C-2)，31.0(C-3)，41.2(C-4)，38.5(C-5)，38.7(C-6)，44.1(C-7)，27.3(C-8)，118.4(C-9)，144.5(C-10)，72.5(C-11)，27.4(C-12)，26.3(C-13)，17.8(C-14)，15.6(C-15)。以上数据与文献[12]报道一致，故鉴定化合物4为jinkoh-eremol。

化合物5无色油状物质(CHCl3)；ESI-MS：m/z235.3[M + H]+；分子式C15H22O2；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δH:5.56(1H，d，J=5.4 Hz，H-9)，4.57(1H，dd，J=5.4，4.5 Hz，H-8)，2.87(1H，qt，J=7.1 Hz，H-11)，2.39(1H，m，H-7)，2.30(1H，dd，J=12.7，4.6 Hz，H-7)，1.90(2H，m，H-2)，1.76(1H，dd，J=14.0，4.1 Hz，H-6)，1.52(1H，ddd，J=11.0，6.3，4.0 Hz，H-4)，1.48(1H，ddd，J=11.3，7.6，4.0 Hz，H-3)，1.40(1H，m，H-3)，1.19(3H，d，J=7.2 Hz，H-13)，0.93(3H，s，H-14)，0.91(1H，dd，J=14.0，9.2 Hz，H-6)，0.83(3H，d，J=6.5 Hz，H-15)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δC:32.4(C-1)，29.7(C-2)，30.8(C-3)，38.5(C-4)，38.6(C-5)，30.0(C-6)，34.4(C-7)，74.9(C-8)，113.0(C-9)，157.7(C-10)，40.5(C-11)，179.3(C-12)，9.4(C-13)，20.2(C-14)，15.7(C-15)。以上数据与文献[13]报道一致，故鉴定化合物5为(rel)-4β, 5β,7β-eremophil-9-en-12,8β-olide。

化合物6无色油状物质(CHCl3)；ESI-MS：m/z219.3[M + H]+；分子式C15H22O；H NMR(500 MHz，CDCl3)δH:5.65(1H，s，H-1)，4.65(1H，s，H-12)，4.61(1H，s，H-12)，2.52(1H，m，H-9)，2.32(1H，tt，J=12.8，2.8 Hz，H-7)，2.30(1H，m，H-9)，2.25(1H，d，J=16.4 Hz，H-3)，2.08(1H，d，J=16.4，3.2 Hz，H-3)，1.94(1H，dd，J=12.8，2.8 Hz，H-6)，1.91(1H，m，H-4)，1.85(1H，d，J=1.4 Hz，H-8)，1.65(3H，s，H-13)，1.27(1H，dd，J=12.8，2.8 Hz，H-8)，1.09(1H，d，J=12.8 Hz，H-6)，1.07(3H，s，H-15)，0.90(3H，d，J=6.8 Hz，H-14)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δC:124.8(C-1)，202.1(C-2)，42.5(C-3)，41.4(C-4)，40.5(C-5)，34.1(C-6)，41.7(C-7)，32.8( C-8)，45.1(C-9)，174.3(C-10)，150.1(C-11)，109.4(C-12)，20.9(C-13)，15.1(C-14)，17.1(C-15)。以上数据与文献[14]报道一致，故鉴定化合物6为诺卡酮。

化合物7无色油状物质(CHCl3)；ESI-MS：m/z237.3[M + H]+；分子式C15H24O2；H NMR(500 MHz，CHCl3)δH:5.75(1H，s，H-1)，2.55(1H，m，H-9)，2.41(1H，m，H-9)，2.35(1H，d，J=17.0 Hz，H-3)，2.16(1H，dd，J=17.0，3.2 Hz，H-3)，2.12(1H，dd，J=12.6，3.2 Hz，H-6)，2.00(1H，dd，J=12.6，3.2 Hz，H-8)，1.99(1H，m，H-4)，1.78(1H，tt，J=12.6，3.1 Hz，H-7)，1.20(1H，d，J=1.5 Hz，H-8)，1.17(3H，s，H-12)，1.16(3H，s，H-15)，1.13(3H，s，H-13)，1.02(1H，d，J=12.5 Hz，H-6)，1.00(3H，s，J=6.8 Hz，H-14)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δC:124.7(C-1)，202.5(C-2)，42.8(C-3)，42.0(C-4)，40.6(C-5)，41.0(C-6)，45.0(C-7)，29.0(C-8)，34.1(C-9)，175.0(C-10)，72.9(C-11)，27.2(C-12)，26.5(C-13)，15.2(C-14)，17.2(C-5)。以上数据与文献[14]报道一致，故鉴定化合物7为11-hydroxy-valenc-1(10)-en-2-one。

化合物8无色油状物质(CHCl3)；ESI-MS：m/z235.3[M + H]+；分子式C15H22O2；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δH:10.17(1H，s，H-14)，4.80(1H，s，H-12)，4.79(1H，s，H-12)3.53(1H，dd，J=11.5，4.4 Hz，H-9)，3.34(1H，d，J=10.8 Hz，H-6)，2.37(1H，d，J=17.4Hz，H-3)，2.08(2H，m，H-6，H-7)，1.94(1H，m，H-8)，1.81(1H，m，H-1)，1.78(3H，s，H-13)，1.71(1H，m，H-2)，1.68(1H，m，H-8)，1.51(2H，m，H-1，H-2)，1.15(3H，s，H-15)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δC:35.4(C-1)，17.6(C-2)，23.8(C-3)，134.7(C-4)，161.3(C-5)，28.6(C-6)，43.2(C-7)，35.4(C-8)，77.5(C-9)，42.5(C-10)，147.6(C-11)，110.1(C-12)，20.7(C-13)，191.0(C-14)，18.7(C-15)。以上数据与文献[15]报道一致，故鉴定化合物8为(7S，9S，10S)-(+)-9-hydroxy-selina-4,11-dien-14-al。

化合物9黄色针状结晶(CHCl3)；ESI-MS：m/z295.3[M + H]+；分子式C18H14O4；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δH:7.60(1H，d，J=16.0 Hz，H-7′)，7.54(2H，d，J=8.1 Hz，H-6′)，7.51(1H，t，J=8.3 Hz，H-7)，6.96(1H，d，J=8.3 Hz，H-8)，6.95(2H，d，J=8.1 Hz，H-3′，H-5′)，6.79(1H，t，J=8.3 Hz，H-6)，6.60(1H，d，J=16.0 Hz，H-8′)，6.21(1H，s，H-3)，3.86(3H，OMe-4′)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δC:163.8(C-2)，108.4(C-3)，183.3(C-4)，161.7(C-5)，111.6(C-6)，135.6(C-7)，107.0(C-8)，156.4(C-9)，111.4(C-10)，127.9(C-1′)，129.7(C-2′)，114.6(C-3′)，161.1(C-4′)，114.9(C-5′)，129.7(C-6′)，138.1(C-7′)，117.5(C-8′)，55.8(OMe-4′)。以上数据与文献[16]报道一致，故鉴定化合物9为5-羟基-2-[2-(4-甲氧基苯)乙烯基]色酮。

化合物10黄色针状结晶(CHCl3)；ESI-MS：m/z297.3[M + H]+；分子式C18H16O4；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δH:12.77(1H，s，OH-5)，7.38(1H，d，J=8.9 Hz，H-7)，7.28(4H，m，H-2′，H-3′，H-5′，H-6′)，7.18(1H，m，H-4′)，6.94(1H，d，J=8.9，Hz，H-8)，6.10(1H，s，H-3)，3.87(3H，s，OMe-6)，3.06(2H，t，J=7.1 Hz，H-7′)，3.00(2H，t，J=7.1 Hz，H-8′)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δC:171.4(C-2)，108.0(C-3)，184.3(C-4)，150.5(C-5)，144.1(C-6)，121.0(C-7)，106.1(C-8)，149.9(C-9)，110.9(C-10)，140.6(C-1′)，129.0(C-2′，C-6′)，129.2(C-3′，C-5′)，126.8(C-4′)，33.2(C-7′)，36.3(C-8′)，57.1(OMe-6)。以上数据与文献[17]报道一致，故鉴定化合物10为5-羟基-6甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮。

化合物11淡黄色油状物质(CHCl3)；ESI-MS：m/z281.1[M + H]+；分子式C18H16O3；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δH:7.76(1H，d，J=3.1 Hz，H-5)，7.38(1H，m，J=9.5 Hz，H-8)，7.23(4H，m，H-7，H-3′，H-4′，H-5′)，7.20(2H，d，J=8.0 Hz，H-2′，H-6′)，6.16(1H，s，H-3)，3.90(3H，s，OMe-6)，3.06(2H，t，J=7.7 Hz，H-7′)，2.94(2H，t，J=7.7 Hz，H-8′)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δC:168.2(C-2)，109.6(C-3)，178.3(C-4)，104.9(C-5)，156.9(C-6)，123.6(C-7)，119.3(C-8)，151.4(C-9)，124.6(C-10)，139.8(C-1′)，128.7(C-2′)，128.3(C-3′)，126.6(C-4′)，128.3(C-5′)，128.7(C-6′)，33.1(C-7′)，36.1(C-8′)，56.0(OMe-6)。以上数据与文献[18]报道一致，故鉴定化合物11为6-甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮。

化合物12黄色不规则针状结晶(CHCl3)；ESI-MS：m/z327.1[M + H]+；分子式C19H18O5；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δH:12.71(1H，s，OH-5)，7.21(1H，d，J=9.0 Hz，H-7)，7.10(2H，d，J=8.4 Hz，H-2′，H-6′)，6.87(1H，d，J=9.0 Hz，H-8)，6.83(2H，d，J=8.4 Hz，H-3′，H-5′)，6.01(1H，s，H-3)，3.93(3H，s，OMe-6)，3.78(3H，s，OMe-4′)，2.98(2H，t，J=7.6 Hz，H-7′)，2.87(2H，t，J=7.6 Hz，H-8′)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δC:170.3(C-2)，107.9(C-3)，184.0(C-4)，149.4(C-5)，143.3(C-6)，118.9(C-7)，105.8(C-8)，150.5(C-9)，110.8(C-10)，131.5(C-1′)，129.3(C-2′)，114.1(C-3′)，158.3(C-4′)，114.1(C-5′)，129.3(C-6′)，32.1(C-7′)，36.5(C-8′)，57.0(OMe-6)，55.3(OMe-4′)。以上数据与文献[19]报道一致，故鉴定化合物12为5-羟基-6甲氧基-2-[2-(4-甲氧基苯)乙基]色酮。

4 活性测试

4.1 乙酰胆碱酯酶抑制活性测定

采用Ellman法[20]测定乙酰胆碱酯酶抑制活性。化合物1～13均溶解于DMSO中，取110 μL磷酸缓冲液(pH值8.0)、10 μL待测样品(50 μg/mL)和40 μL乙酰胆碱酯酶(0.02 U/mL)于96孔板中，在30 ℃条件下孵育20 min后，再加入20 μL DTNB(2.48 mg/mL)和20 μL碘化硫代乙酰胆碱(1.81 mg/mL)等体积混合液40 μL，最终反应体系总共200 μL。再在30 ℃条件下孵育30 min后，将反应体系于405 nm紫外波长下用酶标仪检测吸光度(A)值。阳性对照药物为他克林，反应终质量浓度为0.05 mg/mL，阴性对照为DMSO，终浓度为0.1 %，实验重复3次。选择阴性对照组平均吸光值为1时的样品吸光值，计算化合物吸光值的平均值(化合物测定值-背景值)。按照公式1计算化合物对乙酰胆碱酯酶的抑制率，结果见表1。活性测定结果表明化合物1～3和12具有乙酰胆碱酯酶抑制活性，其他化合物乙酰胆碱酯酶抑制率低于10 %。

抑制率(%)=(E-S)/E×100 % 公式(1)

注：E为阴性对照组的平均吸光值，S为待测化合物的平均吸光值。

表1 化合物1～12的乙酰胆碱酯酶抑制活性

注：他克林为阳性对照。

Note:Tacrine served as positive control.

5 讨论

本实验采用多种柱色谱技术从柬埔寨野生柯拉斯那沉香中共分离纯化了12个化合物，其中8个倍半萜类化合物，3个2-(2-苯乙基)色酮类化合物和1个2-(2-苯乙烯基)色酮类化合物。并且化合物2～11均是首次从柯拉斯那沉香中分离得到。活性测定结果表明化合物1～3和12具有乙酰胆碱酯酶抑制活性。

目前，国内外学者通过对不同品种的沉香进行化学成分研究，发现其主要成分是倍半萜和2-(2-苯乙基)色酮类化合物。分离鉴定的倍半萜类化合物按不同骨架类型分为沉香呋喃型倍半萜、沉香螺旋烷型倍半萜、愈创木烷型倍半萜、桉烷型倍半萜、艾里莫芬烷型倍半萜、杜松烷型倍半萜、前香草烷型倍半萜和菖蒲烷倍半萜8种类型[4]。而本次从柬埔寨野生柯拉斯那沉香中分离的8个倍半萜中，化合物1～7均为艾里莫芬烷型倍半萜，只有1个桉烷型倍半萜(8)。沉香中分离的2-(2-苯乙基)色酮类化合物按色酮母核的结构特点主要可分为4种类型：Fidersia 类型的2-(2-苯乙基)色酮、多羟基取代的5，6，7，8-四氢-2-(2-苯乙基)色酮、单环氧5,6,7,8-四氢-2-(2-苯乙基)色酮、双环氧-5，6，7，8-四氢-2-(2-苯乙基)色酮[4]。而此次从柬埔寨野生柯拉斯那沉香中分离的3个色酮类化合物，均是Fidersia 类型的2-(2-苯乙基)色酮(10～12)。目前，在沉香中仅发现了5个2-(2-苯乙烯基)色酮类化合物，其中3个2-(2-苯乙烯)色酮类化合物均是首次从柬埔寨柯拉斯那沉香中分离得到[10,16]。而此次从柬埔寨野生柯拉斯那沉香中分离得到了一个2-(2-苯乙烯基)色酮(9)，可见柯拉斯那沉香中的2-(2-苯乙烯基)色酮类化合物还有很大的研究价值。综上，柬埔寨柯拉斯那沉香与其他品种沉香的主要化学成分是一致的，均是倍半萜类和2-(2-苯乙基)色酮类化合物，这为后期柯拉斯那沉香的化学成分研究和开发利用提供了一定的研究基础。