老年口腔鳞状细胞癌组织细胞凋亡相关基因蛋白表达与病理特征关系

魏巍 曲熙乔 张国梁

(1佳木斯大学附属第一医院口腔科，黑龙江 佳木斯 154003;2大兴安岭职业学院口腔系；3佳木斯大学附属第二医院颌面外科)

头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)主要出现在口腔、口咽、喉部等部位，是常见癌症之一，占所有头部和颈部癌症的90%以上，主要病因是吸烟、饮酒、吃槟榔和人乳头状瘤病毒等相关的感染〔1〕。全世界每年确诊为HNSCC的病例约65万例，由于该病会发生淋巴结转移，甚至侵犯周围组织器官，其侵袭性强，因此，只有40%～50% 的患者幸存，且存活率仅为5年〔2〕。常规疗法是手术切除及术后的放、化疗，免疫新疗法在提高生存率方面已经备受关注〔3〕。本研究探讨老年口腔鳞状细胞癌病理特征与组织细胞凋亡相关基因蛋白表达的相关性。

1 材料与方法

1.1一般资料 回顾性选取2018年11月至2019年7月佳木斯大学附属第一医院老年口腔鳞状细胞癌患者124例的手术切除标本为病例组，其中男64例，女60例；年龄61～79岁，平均(69.2±10.4)岁。在病理类型方面，牙龈癌78例，口底癌22例，舌癌12例，口唇癌8例，软腭癌4例；在病理分级方面，Ⅰ级56例，Ⅱ级50例，Ⅲ级18例；有淋巴结转移26例，无98例。另回顾性选取同期正常口腔黏膜健康人群12例作为健康组，其中男7例，女5例，年龄62～79岁，平均(70.0±10.6)岁。两组一般资料比较差异均不显著(P>0.05)。

1.2纳入和排除标准 纳入标准：(1)年龄≥60岁；(2)均经术后病理检查确诊为口腔鳞状细胞癌；(3)均符合口腔鳞状细胞癌的诊断标准〔4〕。排除标准：(1)合并其他恶性肿瘤；(2)具有较差的依从性；(3)缺乏清晰的意识。

1.3试剂 购买Santa Cruz Biotechnology公司生产的Bax、Bcl-2单克隆抗体，DAKO公司生产的P53(DO-1)，Vector生产的免疫组织化学染色(LSAB)试剂盒。

1.4LSAB法免疫组化 切片厚4 μm，Bax、Bcl-2、P53单抗工作浓度均为1∶40，阳性对照分别为口腔鳞状细胞癌组织、涎腺腺样囊性癌组织、口腔鳞状细胞癌组织，阴性对照均为磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗。

1.5结果判定 Bax、Bcl-2阳性标准为有棕黄色颗粒出现在胞质中，散在分布或呈巢状、片状。依据阳性细胞数、显色情况分为2个等级，如果阳性细胞数在3%及以上，则评定为阳性；如果阳性细胞数在3%以下或无阳性细胞，则评定为阴性。P53阳性标准为有棕黄色颗粒出现在细胞核中，阴性标准为无棕黄色颗粒出现在细胞核中〔5〕。

1.6统计学分析 采用SPSS21.0统计学软件进行t检验和χ2检验。

2 结 果

健康组口腔黏膜中有散在阳性细胞出现在基底层细胞8例(66.7%)。病例组Bax阳性60例(48.4%)，Ⅰ级、Ⅲ级患者的Bax阳性率均显著低于Ⅱ级患者(P<0.05)，但Ⅰ级、Ⅲ级患者的Bax阳性率之间的差异不显著(P>0.05)；有淋巴结转移患者的Bax阳性率显著低于无淋巴结转移患者(P<0.05)。病例组Bcl-2阳性60例(48.4%)，Ⅰ级、Ⅱ级患者的Bcl-2阳性率均显著高于Ⅲ级患者(P<0.05)，但Ⅰ级、Ⅱ级患者的Bcl-2阳性率之间的差异不显著(P>0.05)；有淋巴结转移患者的Bcl-2阳性率显著低于无淋巴结转移患者(P<0.05)。病例组P53阳性40例(32.3%)，Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级患者的P53阳性率逐渐升高(P<0.05)；有淋巴结转移患者的P53阳性率显著高于无淋巴结转移患者(P<0.05)。见表1。

表1 老年口腔鳞状细胞癌患者病理特征与Bax、Bcl-2、p53阳性表达〔n(%)〕

与Ⅱ级比较：1)P<0.05；与Ⅲ级比较：2)P<0.05；与无转移比较：3)P<0.05

3 讨 论

细胞增殖速率、细胞凋亡相对比率均决定着肿瘤的发生发展。Bax、Bcl-2、P53参与细胞凋亡的基因调控。Bax归属于Bcl-2家族，在细胞中能够和Bcl-2促进异二聚体的形成。在信号刺激细胞后存活情况的影响因素中，Bax/Bcl-2比值发挥着关键的决定性作用，细胞在Bax过度表达的情况下死亡，在Bcl-2过度表达的情况下存活，因此临床普遍认为，Bax属于一种细胞凋亡促进因子。研究表明〔6〕，和异常增生组织相比，口腔鳞癌组织中具有较弱的Bax蛋白表达。研究表明〔7〕，老年口腔鳞癌组织中Bax阳性率为53.2%，和Bcl-2无相关性。本研究结果和上述相关研究结果一致，需要临床进一步研究其确切价值。

Bcl-2属于一种原癌基因，其基因产物能够将细胞程序性死亡阻断，而不对细胞增殖造成影响。正常细胞会携带Bcl-2，增强其表达的途径为基因移位或变更。研究表明〔8〕，正常口腔黏膜上皮基底细胞中Bcl-2呈散在阳性，口腔鳞癌分化程度和Bcl-2表达呈显著的正相关关系，无淋巴结转移患者具有较高的Bcl-2表达。本研究结果表明在肿瘤发生中，Bcl-2基因过度表达可能是早期事件，Bcl-2表达对早期口腔鳞癌细胞凋亡过程进行了抑制。

在对细胞凋亡进行调控的基因中，P53基因占有重要地位。野生型P53能够为细胞凋亡提供良好的前提条件，突变型P53则对细胞凋亡进行抑制。突变型P53会将Bcl-2表达下调，对Bcl-2来说是一个调控因子。P53过度表达一方面能够在蛋白上将Bcl-2表达下调，另一方面还能够在mRNA上将Bcl-2表达下调，说明野生型P53能够在转录水平上对Bcl-2进行抑制。研究表明〔9〕，正常口腔黏膜中P53呈阴性，有淋巴结转移、中低分化患者较为常见，P53表达和Bcl-2表达呈显著的负相关关系。研究表明〔10〕，老年口腔鳞癌的发生、生物学行为和细胞凋亡相关基因Bax、Bcl-2、P53相关。本研究结果表明，肿瘤生物学行为、恶性表型和P53水平呈显著的正相关关系，在老年口腔鳞癌患者预后的判定中，P53过度表达可作为预后不良的肿瘤标志物。

综上，老年口腔鳞状细胞癌病理分级、淋巴结转移与组织细胞凋亡相关基因蛋白表达密切相关。