甲状腺癌组织CXCR4、Ki-67表达与临床病理特征及预后的关系研究

汤一冰 王万铁

(1.温州医科大学附属第二医院病理科 温州 325000；2.温州医科大学病理生理教研室 温州 325035)

甲状腺癌属于临床常见的内分泌系统恶性肿瘤之一，其发生率与放射线接触史、高碘饮食、遗传等因素密切相关，或由甲状腺腺瘤、结节性甲状腺肿等其他良性结节疾病发展所致[1～2]。多数甲状腺癌患者术后预后较好，但部分患者会出现远处转移或淋巴结转移，术后肿瘤复发，甚至危及生命安全。趋化因子受体4(CXCR4)是一种参与肿瘤细胞生长、转移、侵袭等的趋化因子，而Ki-67与子宫内膜癌等多种肿瘤的预后密切相关，是肿瘤细胞增殖活性标志物之一，两者与甲状腺癌患者的关系是临床研究的热点[3～4]。本研究旨在分析甲状腺癌组织Ki-67、CXCR4表达与临床病理特征及预后的关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017年7月～2019年10月在我院行手术治疗的90例甲状腺癌患者癌组织标本，将其设为研究组，收集癌旁组织标本作为良性组。90例患者中，女52例，男38例；年龄24～73岁，平均年龄(45.24±4.96)岁；病理类型：分化型癌80例(滤泡状腺癌27例，乳头状腺癌37例，髓样癌16例)，未分化型癌10例；无淋巴结转移58例，淋巴结转移32例；癌灶特点：多结节48例，单结节42例；无包膜侵犯47例，有包膜侵犯43例；病理分期：Ⅰ～Ⅱ期46例，Ⅲ～Ⅳ期44例。入组患者均经病理、影像学检查确诊为甲状腺癌且术前未接受放化疗治疗，临床资料完整。另外选择同期在我院行手术治疗的90例甲状腺良性病变患者病理标本设为对照组，其中女49例，男41例；年龄23～75岁，平均年龄(45.18±5.01)岁。3组基本资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，有可比性。

1.2 方法

将获取的标本使用10%甲醛固定，石蜡包埋，连续切片，切片厚度为4μm，以免疫组化S-P三步法染色法对CXCR4、Ki-67实施染色。使用购买自上海长岛生物科技有限公司的试剂盒，操作步骤严格按照试剂盒说明实施。以已知阳性切片作为阳性对照，以磷酸盐缓冲液代替一抗作为阴性对照组。

1.3 结果判定

Ki67以细胞核呈黄色、褐色和棕黄色分布为阳性，CXCR4以细胞核和细胞质呈黄色、褐色和棕黄色分布为阳性。染色强度：0分：无色；1分：淡黄色；2分：棕黄色；3分：褐色。在400倍高倍显微镜下，每张切片随机选择5个视野，计数阳性细胞的百分数，结果取平均值。0分：阳性细胞数≤5%；1分：阳性细胞数6%～25%；2分：阳性细胞数26%～50%；阳性细胞数>50%。按照阳性细胞数和染色强度两者得分乘积对阳性强度进行计算：阴性(-)：≤1分；弱阳性(+)：2～3分；中阳性(++)：4～6分；强阳性(+++)：>6分。

1.4 观察指标

(1)比较3组Ki-67、CXCR4阳性表达率；(2)分析Ki-67、CXCR4阳性表达率与甲状腺癌临床病理特征关系，其包括年龄、性别、病理类型、有无淋巴结转移、癌灶特点、有无包膜侵犯、病理分期等；(3)分析Ki-67、CXCR4表达与甲状腺癌患者疾病进展时间(TTP)的相关性。

1.5 统计学方法

2 结果

2.1 3组Ki-67、CXCR4阳性表达率比较

研究组Ki-67、CXCR4阳性表达率高于良性组、对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；良性组Ki-67、CXCR4阳性表达率与对照组相比，差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。

表1 3组Ki-67、CXCR4阳性表达率比较[n(%)]

组别Ki-67CXCR4研究组(n=90)61(67.78)64(71.11)良性组(n=90)11(12.22)a19(21.11)a对照组(n=90)7(7.78)a16(17.78)aχ297.19969.187P0.0000.000

注：a与研究组相比，P<0.05。

2.2 Ki-67、CXCR4阳性表达率与甲状腺癌临床病理特征关系

甲状腺癌患者病理分期Ⅲ～Ⅳ期Ki-67、CXCR4阳性表达率高于病理分期Ⅰ～Ⅱ期，有淋巴结转移Ki-67、CXCR4阳性表达率高于无淋巴结转移，且有包膜侵犯Ki-67阳性表达率高于无包膜侵犯，差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 Ki-67、CXCR4阳性表达率与甲状腺癌临床病理特征关系[n(%)]

临床病理特征例数(n)Ki-67(n=61)CXCR4(n=64)阳性χ2P阳性χ2P性别女5235(67.31)男3826(68.42)0.0130.91135(67.31)29(76.32)0.8670.352年龄(岁)≤454832(66.67)>454229(69.05)0.0580.81031(64.58)33(78.57)2.1340.144病理分期Ⅰ～Ⅱ期4626(56.52)Ⅲ～Ⅳ期4435(79.55)4.8310.02826(56.52)38(86.36)9.7490.002病理类型分化型8056(70.00)未分化型105(50.00)0.8410.20257(71.25)7(70.00)0.0830.935癌灶特点多结节4829(60.42)单结节4232(76.19)2.552011033(68.75)31(73.81)0.8420.359包膜侵犯有3226(81.25)无5835(60.34)4.1270.04225(78.13)39(67.24)1.1980.276淋巴结转移有4339(90.70)无4722(46.81)19.5060.00037(86.05)27(57.45)8.9410.003

2.3 Ki-67、CXCR4表达与甲状腺癌患者TTP的相关性分析

甲状腺癌患者的中位TTP为37.89个月(95%CI为27.90～43.27)，其中Ki-67阳性者与阴性者中位TTP分别为30.98个月(95%CI为21.89～38.125)、47.78个月(95%CI为36.38～59.17)；其中CXCR4阳性者与阴性者中位TTP分别为30.29个月(95%CI为28.40～32.19)、43.12个月(95%CI为37.19～51.18)。经Log-rank检验显示，Ki-67、CXCR4阳性者TTP较阴性者高，差异有统计学意义(χ2=8.249、11.223，P=0.004、0.001)，见图1～2。

图1 CXCR4表达与甲状腺癌患者TTP关系

图2 Ki-67表达与甲状腺癌患者TTP关系

3 讨论

甲状腺癌发病率约占全身恶性肿瘤的1%～2%，且发病率呈明显上升趋势。手术是临床治疗甲状腺癌的常用手段，但部分患者术后易出现复发转移，预后较差[5]。随着分子生物学深入研究，肿瘤的侵袭性与转移性是由多种因素相互作用的复杂动态过程而逐渐受到临床重视，与抑癌基因、癌基因、细胞运动因子、粘附分子、水解酶类等作用相关。

趋化因子是由多种细胞产生的促炎细胞因子，具有趋化细胞运动作用，参与多种疾病的发生与进展。CXCR4是趋化因子家族成员之一，其与趋化因子基质细胞衍生因子-1生物轴可刺激多种信号通路活化，经聚合肿瘤细胞肌动蛋白丝，促进假伪足形成，进而形成局部血管，提升细胞运动、侵袭、迁移能力，参与肿瘤的生长、浸润和转移[6～7]。Ki-67属于增殖细胞表达的抗原，其水平高低与细胞周期及细胞增殖密切相关，半衰期约为1h，脱离细胞周期后迅速降解，能准确反映肿瘤细胞增殖活性，是一种判断肿瘤恶性程度和预测预后的重要指标[8～10]。本研究中，甲状腺癌患者病理分期Ⅲ～Ⅳ期移Ki-67、CXCR4阳性表达率高于病理分期Ⅰ～Ⅱ期，有淋巴结转Ki-67、CXCR4阳性表达率高于无淋巴结转移，且有包膜侵犯Ki-67阳性表达率高于无包膜侵犯，提示Ki-67、CXCR4与甲状腺癌的发生、进展密切相关，两者高表达提示患者预后可能不良。本研究中，Ki-67、CXCR4阳性者TTP较阴性者高，可能是因Ki-67、CXCR4高表达可经增强肿瘤细胞侵袭力、增殖活性等多种机制，促进患者病情进展，导致患者无病生存期缩短。

综上所述，Ki-67、CXCR4在甲状腺癌中呈高表达，检测两者可评估甲状腺癌恶性程度与术后疾病进展时间，可成为甲状腺潜在的指标靶点和预测预后指标。