兰州地区献血员Rh血型抗原及RhCE基因分布

丁佳栋 张晓萍王媛 杨楠张丽娟 王艺媛 张晓晶 黄晓燕 赵小丽

1.甘肃省人民医院，甘肃 兰州730000；2.兰州大学，甘肃 兰州730000

Rh血型系统是所有血型系统中已知的最复杂的［1］，最初发现的Rh血型只有D抗原，后来发现有55种抗原。在最初的输血中，只提到ABO、RhD血型相合，后来发现的血型抗体中，除抗D外，最多的是抗Rh其他抗原的抗体，如抗E、抗C等，说明在RhD相合的血液中必定有很多Rh其他抗原不相合的血液输注到患者体内。不同地区而言，因为不同的民族性和地域性，导致了各个地区的Rh血型分布均有差异。所以，对于本地区的Rh血型的分布情况有必要进行调查分析。

1 材料与方法

1.1 研究对象 2019年1月1日至2019年6月30日，血液中心发往本院的RhD阳性血液标本总共4034份。

1.2 试剂设备 抗人球蛋白卡由中山生科公司生产（批号20181101）；抗-A、抗B（批号20180717）、ABO细胞（批号20185348）、抗体筛选细胞（批号20197004）均由上海血液生物技术有限公司生产，Rh分型卡（批号201812003）由江苏力博医药生物技术股份有限公司生产，抗体鉴定细胞红细胞（16细胞系，批号201904 25）由江苏中济万泰生物医药有限公司生产。

1.3 Rh血型分型 采用微柱凝胶技术，将献血员的血样进行Rh分型。将血液标本离心分离，生理盐水稀释至试剂卡指定浓度（0.5%～1%），每孔加50μL稀释，离心5分钟观察反应结果。双群血样进行二次离心，离心力为200g，离心5min，取白膜层进行Rh抗原检测，Rh基因型采用赵桐茂估算法公式［2］计算。

1.4 统计分析 所有数据利用SPSS2.0进行统计分析，并对结果进行χ2分析检验。

2 结果

2.1 Rh表现型的频率 在4034份血液样本中，出现了所有9种表现型，见表1。经过统计分析，A型、B型、O型的ccEE、ccEe、CcEE、CCee、Ccee、CCEe、ccee、CCEE这8种抗原的概率分布无统计学差异（P＞0.05），A型和B型在CcEe的概率分布有统计学差异（P＜0.05），B型和O型在CcEe的概率分布有统计学差异（P＜0.05），A型和O型在CcEe的概率分布无统计学意义（P＞0.05）。见图1。

2.2 C、c、E、e抗原频率 总体上，C、c、E、e抗原比例分别为87.43%、58.03%、46.13%、91.84%，各个血型之间略有不同。A型献血员中C抗原和c抗原均与B型差异有统计学意义（P＜0.05），E抗原与B型差异有统计学意义（P＜0.05），与O型有统计学差异（P＜0.01）。其中CC的比例为41.32%，cc的比例为12.74%，Cc的比例为45.94%，与B型差异有统计学意义（P＜0.05）；E为纯合子的比例为8.54%，e为纯合子的比例为50.69%，与B型差异有统计学意义（P＜0.05），E、e为杂合子的比例为40.77%，与B型差异有统计学意义（P＜0.01）。B型献血员中E抗原与O型差异有统计学意义（P＜0.01）。其中CC的比例为43.68%，cc的比例为13.39%，Cc的比例为42.93%；EE的比例为8.60%，ee的比例为54.27%，Ee的比例为37.17%。O型献血员中CC的比例为41.32%，cc的比例为12.74%，Cc的比例为45.93%；EE的比例为8.54%，ee的比例为50.69%，Ee的比例为40.77%。见表2。

2.3 RhCE基因频率 总体上，RhC、Rhc、RhE、Rhe基因频率为64.69%、35.31%、28.26%、71.74%，各型之间略有不同。A型献血员、B型献血员、O型献血员中RhC、Rhc、RhE、Rhe基因频率分别为：64.67%、35.32%、28.61%、71.39%；65.19%、34.88%、27.21%；72.87%、64.29%、35.71%、28.93%、71.38%并且ABO型之间差异无统计学意义（P＞0.05）。见图2。

表1 Rh表型分布规律

图1 Rh血型分布规律

2.4 RhCE基因在染色体上分布规律的推测 A型献血员中，C、e在一条染色体，c、E在另一条染色体的概率最低为54.70%，最高为92.66%；反之，C、E在一条染色体，c、e在另一条染色体的概率最低为7.34%，最高为45.30%。A型与O型之间差异无统计学意义（P＞0.05）。

B型献血员中，C、e在一条染色体，c、E在另一条染色体的概率最低为59.12%，最高为91.44%；反之，C、E在一条染色体，c、e在另一条染色体的概率最低为8.56%，最高为40.88%。B型与A型之间差异有统计学意义（P＜0.01）、B型与O型之间差异有统计学意义（P＜0.05）。

表2 C、c、E、e抗原分布［例（%）］

图2 RhCE基因频率

O型献血员中，C、e在一条染色体，c、E在另一条染色体的概率最低为55.96%，最高为92.11%；反之，C、E在一条染色体，c、e在另一条染色体的概率最低为7.89%，最高为44.04%。见图3。

图3 RhCE基因在染色体上的分布

3 讨论

Rh血型是人类已知血型系统中最复杂的血型系统，现在发现的抗原已经有55个，其中，最重要的是D抗原，其次为E、C、c、e抗原。Rh抗原是由位于1号染色体短臂上的两个紧密连锁的基因所编码 。C抗原、c抗原、E抗原、e抗原阳性率分别为：87.43%、58.03%、46.13%、91.84%，这与江晓明［3］等类似，与莫秋红［4-6］不符。与本研究不同的是，杜肖刚［5］、黄燕雪［6］的研究仅对C、E抗原进行检测，而未对c、e抗原进行检测。

对本地区RhCcEe抗原分布情况分析，可以为患者寻找Rh血型相合的血液，估计患者输注难易程度，为疑难配血提供临床依据，减少不规则抗体的产生［7-9］。陈婉璐等［10］对云南傣族和汉族的Rh血型进行分析，但是样本量过小（200例），有很多表现型未检出。

本研究包含的4034份样本中出现了9种Rh血型组合，即ccEE、ccEe、CcEe、CcEE、CCee、Ccee、CCEe、ccee、CCEE。但是，CCEE这种表现性出现的概率很低，总共有2份标本，但是在不同的研究中表现出的概率不同，李育等［11］的研究中，3499份献血者中没有发现CCEE表型的献血者，而在4210例受血者中却发现了6例CCEE表型的患者。出现概率最多的是CCee、其次是CcEe，这与莫秋红等研究类似［4-6，10-11，14］。其中，B型CcEe表现型的个体与A型和O型之间有显著性差异，提示在临床配血工作中不同血型之间的分布规律可能有差异，而莫秋红等［4-6，10］均未对ABO不同血型之间的Rh血型进行分析，李育等［5］虽然体现了不同血型之间的Rh血型的概率，但未进行统计分析。

莫秋红［4］、陈婉璐［10］、李育［11］、陈荣仓［12］、唐舞［13］、王剑锋［14］，孙蕊娟［15］，马婷［16］RhD阳性者分别有2050、200、7709、765、1728、3419、5052、51 283例，所以，之间作对比会有不同。杜肖刚等［6］和黄燕雪等［6］的研究对象分别有14 549例、27 049例，但是，两者均只检测C、E抗原，未检测c、e抗原。

Rh抗原中C抗原出现的概率远大于c抗原（87%/58%），e抗原出现的概率远大于E抗原（92%/48%），与莫秋红等［4］相似。但是，A型、B型、O型3个血型中还是存在差异性，可能的原因是RhCE基因是连锁在一条染色体上的，RhCE基因在人群中的分布是均衡的，而在遗传时会因为连锁的原因导致分布不均。因此，在从事临床输血工作时，应当注意不同血型之间的差异，寻找Rh血型相合的血液。

本研究发现，4034个标本中，RhC、Rhc、RhE、Rhe基因的概率分别为：64.69%、35.31%、28.26%、71.74%，且A型、B型、O型3个血型之间没有显著性差异。与莫秋红等［4］研究不同，可能的原因为其研究对象为壮族，有民族差异性。

由于本研究实验条件不允许，所以未做RhCE基因的分析，无法确定其单倍体的基因型。因此，做“基因偏好性”推测，根据本实验数据得知，除CcEe基因型的个体外，单倍体RhCe/RhcE的概率为87.65%，单倍体RhCE/Rhce的概率为12.25%。另外，排除了CcEe基因型的情况，由于CcEe基因型的个体未做基因分型，不能区分RhCE基因的排布，可以假设两种极端情况，即第一种情况：全部CcEe的个体中单倍体全为RhCe和RhcE；第二种情况：全部CcEe的个体单倍体全为RhCE和Rhce；分别算出概率即为最低和最高的概率。根据计算单倍体RhCe/RhcE的概率最低为55.96%，最高为92.11%；而反之，单倍体RhCE/Rhce的概率最低为7.89%，最高为44.04%。由此可以得出，即使在最极端的情况下，单倍体RhCe/RhcE的概率仍然大于50%，最高可达92.11%，说明C、e可能存在“偏好性”，容易出现在同一条染色体上，这有待下一步的试验证明。莫秋红［4］报道RhCe概率为81.34%，但是CcDEe表型的患者未见其进行基因分析以确定单倍体概率，其他研究［12、15-16］也是同样的情况，所以其单倍体概率不准确，必须经过基因分型才能确定CcDEe表型样本的基因型。本研究日后的一个目标就是将RhCE基因的单倍体型进行分析，从而准确地得到各个单倍体的概率。

另外，本研究所选取的标本均来自血液中心发放的血液标本，仅代表健康献血员的表型，对于临床中需要输血的患者，我们正在统计Rh血型并进行分析。本实验中排除了AB型血液是由于例数太少，今后的研究中会进行补充。

本研究发现，Rh抗原分布，其中CCDee血型为最常见的，其次是CcDEe，Rh抗原中C＞c、e＞E，且不同血型之间存在差异性。RhCE基因分布，RHCE基因中RhC＞Rhc、Rhe＞RhE，且不同血型之间存在差异性。RhCE基因单倍体分布推测，RHCE基因中单倍体RhCe/RhcE占大多数，单倍体RhCE/Rhce较稀有。

（本文编辑：马佰菁）