蒲桃壳乙酸乙酯部位化学成分研究

向丽敏，李洁，刘嘉鑫，李娜，冯晓丹，陈小梅，周慧娴，王淑美

(1.广东药科大学中药学院，广东 广州 510006；2.国家中医药管理局中药数字化质量评价技术重点研究室，广东 广州 510006；3.广东中药质量工程技术研究中心，广东 广州 510006)

蒲桃壳为桃金娘科蒲桃属植物蒲桃(Syzygiumjambos)的干燥果皮，主要分布于广东、广西、海南、贵州、云南、福建以及台湾等地[1]。蒲桃壳具有暖胃健脾、补肺止咳、破血消肿的功效，主治胃寒呃逆、脾虚泄泻、久痢、肺虚寒嗽以及疽瘤等症[2]。有关蒲桃壳的化学成分研究较少，目前报道的主要有挥发油类、多糖类等[3-4]。

为明确蒲桃壳的化学物质基础，本课题组对其化学成分进行研究，从蒲桃壳乙酸乙酯部位中分离鉴定了10个化合物，为蒲桃壳资源的进一步开发利用提供了参考依据。

1 材料与仪器

蒲桃果实于2019年6月采自广东省广州市广州大学城广东药科大学校园，由广东药科大学中药学院向丽敏博士鉴定为蒲桃(Syzygiumjambos)的果实。将上述蒲桃果实去核，烘干得蒲桃壳药材。药材标本(No.201906)保存于广东药科大学中药学院。

薄层层析硅胶GF254和柱层析硅胶(100～200 目、200～300 目)均为青岛海洋化工厂产品；Sephadex LH-20(瑞士GE公司)；石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、甲醇(分析纯，天津市致远化学试剂有限公司)。Avance Ⅲ 500 MHz核磁共振波谱仪(德国Bruker公司，TMS为内标)。

2 提取与分离

取干燥蒲桃壳15 kg，加入70%的乙醇60 L回流提取4次，每次2 h，减压回收乙醇得到浸膏，加入适量水充分混悬，依次用等体积的石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，55 ℃减压回收各溶剂，分别得到石油醚部位(70.9 g)、乙酸乙酯部位(149.1 g)和正丁醇部位(639.0 g)。其中乙酸乙酯部位(149.1 g)经硅胶柱层析(200～300目，2.4 kg，400 mm×150 mm)，以二氯甲烷-甲醇溶剂系统梯度洗脱(体积比100∶0～0∶100)，TLC 检识合并相同流份，共得到18个组分Fr.1～18。其中组分Fr.7(2.6 g)利用二氯甲烷进行结晶得到化合物10(2.0 g)。Fr.10(14.8 g)经硅胶柱层析(200～300目，450 g，340 mm×70 mm)，以石油醚-乙酸乙酯溶剂系统进行梯度洗脱(体积比5∶1～1∶2)，分离得到Fr.10.1～10.12，其中Fr.10.3(22.0 mg)经Sephadex LH-20(二氯甲烷-甲醇，体积比2∶1，1 277 mm×15 mm)凝胶柱层析得到化合物9(13.0 mg)。Fr.10.5(561.1 mg)经Sephadex LH-20(二氯甲烷-甲醇，体积比2∶1，1 277 mm×15 mm)凝胶柱层析得到化合物6(16.3 mg)。Fr.10.6(738.5 mg)经Sephadex LH-20(甲醇，1 277 mm×15 mm)凝胶柱层析得到化合物5(19.4 mg)。Fr.11(10.8 g)经硅胶柱层析(200～300目，350 g，264 mm×70 mm)，以石油醚-乙酸乙酯溶剂系统进行梯度洗脱(体积比2∶1～1∶2)，分离得到Fr.11.1～11.13，其中Fr.11.3(656.9 mg)经Sephadex LH-20(甲醇，1 277 mm×15 mm)凝胶柱层析得到化合物2(17.1 mg)和化合物7(17.6 mg)。Fr.11.5(1.0 g)利用石油醚-乙酸乙酯(体积比2∶1)进行结晶得到化合物1(23.2 mg)。Fr.11.9(835.6 mg)利用石油醚-乙酸乙酯(体积比1∶1)进行结晶得到化合物4(200.0 mg)。Fr.11.10(835.6 mg)经Sephadex LH-20(二氯甲烷-甲醇，体积比2∶1，1 345 mm×15 mm)凝胶柱层析得到化合物3(8.0 mg)。Fr.12(22.7 g)经硅胶柱层析(200～300目，600 g，435 mm×70 mm)，以二氯甲烷-甲醇溶剂系统梯度洗脱(体积比50∶1～0∶100)，分离得到Fr.12.1～12.14。取Fr.12.7(5.9 g)部分(300.0 mg)经Sephadex LH-20(二氯甲烷-甲醇，体积比2∶1，1 345 mm×15 mm)凝胶柱层析得到化合物8(45.0 mg)。

3 结构鉴定

化合物1：白色针状晶体(石油醚-乙酸乙酯，体积比2∶1)。1H-NMR(500 MHz,DMSO-d6)δ:12.14(2H,br s,H-1,4),2.41(4H,s,H-1,4)；13C-NMR(125 MHz,DMSO-d6)δ:173.7(C-1,4),28.9(C-2,3)。以上数据与文献[5]报道对照基本一致，故鉴定化合物1为琥珀酸(succinic acid)。

化合物2：白色针状晶体(甲醇)。1H-NMR(500 MHz,Methanol-d4)δ:6.79(2H,br s,H-2,3),3.79(3H,s,OCH3);13C-NMR(125 MHz,Methanol-d4)δ:167.9(C-1),135.6(C-2),134.2(C-3),167.1(C-4),52.9(1-OCH3)。以上数据与文献[6]报道对照基本一致，故鉴定化合物2为富马酸单甲酯(monomethyl fumarate)。

化合物3：白色针状晶体(二氯甲烷-甲醇，体积比2∶1)。1H-NMR(500 MHz,Methanol-d4)δ:8.01(1H,s,H-2)，6.55(1H,s,H-4),4.46(2H,s,H-7)；13C-NMR(125 MHz,Methanol-d4)δ:141.1(C-2),147.5(C-3),110.9(C-4),170.6(C-5),177.0(C-6),61.3(C-7)。以上数据与文献[7]报道对照基本一致，故鉴定化合物3为flufuran。

化合物4：白色针状晶体(石油醚-乙酸乙酯，体积比1∶1)。1H-NMR(500 MHz,DMSO-d6)δ:6.33(1H,s,H-3),8.02(1H,s,H-6),4.28(2H,d,J=5.8 Hz,H2-7),9.04(1H,s,5-OH),5.66(1H,t,J=6.1 Hz,7-OH)；13C-NMR(125 MHz,DMSO-d6)δ:168.2(C-2),109.9(C-3),174.0(C-4),145.8(C-5),139.3(C-6),59.5(C-7)。以上数据与文献[8]报道对照基本一致，故鉴定化合物4为曲酸(kojic acid)。

化合物5：无色方晶(甲醇)。1H-NMR(500 MHz,DMSO-d6)δ:7.94(1H,s,H-3),8.75(1H,br s,4-OH),8.93(1H,br s,5-OH),2.22(3H,s,6-CH3)；13C-NMR (125 MHz,DMSO-d6)δ:168.4(C-2),138.9(C-3),144.2(C-4),149.2(C-5),141.4(C-6),14.3(6-CH3)。以上数据与文献[9]报道对照基本一致，故鉴定化合物5为epimedokoreanone A。

化合物6：无色方晶(二氯甲烷-甲醇，体积比2∶1)。1H-NMR(500 MHz,DMSO-d6)δ:7.79(2H,d,J=8.6 Hz,H-2,6),6.82(2H,d,J=8.6 Hz,H-3,5);13C-NMR(125 MHz,DMSO-d6)δ:121.4(C-1),131.5(C-2,6),115.1(C-3,5),161.6(C-4),167.2(—COOH)。以上数据与文献[10]报道对照基本一致，故鉴定化合物6为对羟基苯甲酸(p-hydroxybenzoic acid)。

化合物7：白色针状晶体(甲醇)。1H-NMR(500 MHz,DMSO-d6)δ:6.95(2H,s,H -2,6),9.25(2H,s,3,5-OH),8.92(1H,s,4-OH),4.20(2H,q,J=7.1 Hz,—OCH2),1.26(3H,t,J=7.1 Hz,-CH3)；13C-NMR(125 MHz,DMSO-d6)δ:119.6(C-1),108.5(C-2,6),145.6(C-3,5),138.4(C-4),165.9(C=O),60.0(—OCH2),14.3(-CH3)。以上数据与文献[11-12]报道对照基本一致，故鉴定化合物7为没食子酸乙酯(ethylgallate)。

化合物8：白色针状晶体(二氯甲烷-甲醇，体积比2∶1)。1H-NMR(500 MHz,Methanol-d4)δ:7.07(2H,s,H-2,6)；13C-NMR(125 MHz,Methanol-d4)δ:122.1(C-1),110.5(C-2,6),146.5(C-3,5),139.7(C-4),170.5(—COOH)。以上数据与文献[13-4]报道对照基本一致，故鉴定化合物8为没食子酸(gallic acid)。

化合物9：白色针状晶体(二氯甲烷-甲醇，体积比2∶1)。1H-NMR(500 MHz,chloroform-d)δ:5.33(1H,d,J=5.2 Hz,H-6),3.51(1H,m,H-24),2.32(2H,m,H-4),2.24(2H,m,H-2′),0.99(3H,s,H-19),0.90(H,m,H-21),0.86(3H,m,H-16′),0.82(3H,s,H-26),0.80(3H,m,H-29),0.78(3H,s,H-27),0.66(3H,s,H-18);13C-NMR(125 MHz,chloroform-d)δ:37.5(C-1),31.9(C-2),72.1(C-3),42.5(C-4),141(C-5),121.9(C-6),32.1(C-7),32.1(C-8),50.4(C-9),36.7(C-10),21.3(C-11),40.0(C-12),42.5(C-13),57.0(C-14),24.5(C-15),28.5(C-16),56.3(C-17),12.1(C-18),19.6(C-19),36.4(C-20),19.0(C-21),34.0(C-22),26.3(C-23),46.1(C-24),29.3(C-25),20.0(C-26),19.3(C-27),23.3(C-28),12.2(C-29),178.6(C-1′),34.2(C-2′),24.9(C-3′),29.4(C-4′),29.4(C-5′),29.5(C-6′),29.6(C-7′),29.7(C-8′),29.8(C-9′),29.9(C-10′),29.9(C-11′),29.9(C-12′),29.9(C-13′),32.1(C-14′),22.9(C-15′),14.3(C-16′)。以上数据与文献[14]报道对照基本一致，故鉴定化合物9为β-谷甾醇棕榈酸酯(β-sitosterol palmitate)。

化合物10：白色针状结晶(CH2Cl2)。与β-谷甾醇标准品共薄层Rf值相同，因此化合物10鉴定为β-谷甾醇(β-sitosterol)。

化合物1～10的结构见图1。

4 结论

本研究通过现代的分离手段和技术，共从蒲桃壳中分离得到了10个单体化合物：琥珀酸(1)、富马酸单甲酯(2)、flufuran(3)、曲酸(4)、epimedokoreanone A(5)、对羟基苯甲酸(6)、没食子酸乙酯(7)、没食子酸(8)、β-谷甾醇棕榈酸酯(9)、β-谷甾醇(10)，化合物1～7、9为首次从该植物中分离得到。

我国蒲桃资源较为丰富，为岭南地区习用药材。现代药理学研究表明，蒲桃提取物具有降血糖、抗菌、抗氧化、抑制癌细胞增殖及抗感染等作用[15-21]，具有很大的药用价值和开发前景。但目前对其化学成分的研究依然十分有限，发挥这些药理活性的物质基础仍不明确。本文初步探索了蒲桃壳化学成分组成，丰富了蒲桃植物化学成分的多样性。但本研究内容仅限于蒲桃壳乙酸乙酯部位的分离工作，其化学成分、生物活性、作用机制及构效关系等方面仍需进一步深入研究，为蒲桃资源的有效利用提供科学依据。