E钙黏蛋白和骨桥蛋白在侵入性胎盘组织中水平的表达和意义

赵明阳,刘亚梅,宋学薇,孙 佳,保秀翠,胡 鑫,纪江海,闫 芳

侵入性胎盘是由于胎盘种植部位的子宫内膜缺损或发育不良，导致胎盘绒毛直接种植在子宫肌层甚至深入肌层的病理现象[1-2]。根据侵入的深度可分为粘连性胎盘(侵及浅肌层)、植入性胎盘(侵及深肌层)和穿透性胎盘(穿透子宫壁达子宫浆膜层甚至侵入邻近器官)[3-4]。侵入性胎盘是产后出血发生的重要原因之一[5]。

近年来，随着社会经济的发展、人们生育观念的变化，剖宫产、人工流产等子宫操作越来越多，侵入性胎盘的发生率也越来越高，该病对产妇及其胎儿十分不利。因此，本研究探讨了E钙黏蛋白和骨桥蛋白在侵入性胎盘组织中水平的表达和意义，旨在为临床诊治提供依据。现报告如下。

1 资料和方法

1.1纳入排除标准

1.1.1纳入标准：①侵入性胎盘患者根据病史、临床表现、实验室检查、影像学检查等，符合其诊断标准[6]。正常晚期妊娠妇女无自然流产、死胎死产等不良妊娠史，本次妊娠经B超证实为宫内晚期妊娠。②纳入者平素月经规律，月经量、质、色正常。对胎盘组织取材知情同意并签署同意书，本研究经医院伦理委员会批准。

1.1.2排除标准：合并妊娠高血压综合征、妊娠期糖尿病、心脏病、子痫、胎盘前置、胎膜早破等妊娠期并发症者。患严重心脑血管疾病、肝肾功能异常、内分泌系统、血液系统、恶性肿瘤等疾病者。妊娠期吸烟、饮酒史者及口服药物史者。

1.2一般资料 选取2017年4月—2019年4月于本院妇产科住院待产的48例侵入性胎盘患者为观察组，同时期待产的41例健康晚期妊娠孕妇为对照组，将89例纳入者娩出的胎盘组织行免疫组化检测E钙黏蛋白和骨桥蛋白表达水平。对照组年龄22～30(26.54±2.81)岁；孕周36～41(37.96±1.83)周；妊娠次数0～3(1.16±0.88)次。观察组年龄23～32(27.17±2.59)岁；孕周34～40(37.15±2.46)周；妊娠次数1～3(1.31±0.75)次。观察组根据其侵入的深度可分为粘连性胎盘组和植入性胎盘组。粘连性胎盘组31例，年龄(28.31±2.97)岁，孕周(37.39±2.94)周；妊娠次数(1.24±0.62)次。植入性胎盘组17例，年龄为(26.90±2.77)岁，孕周(36.95±2.52)周；妊娠次数(1.49±0.92)次。观察组和对照组，粘连性胎盘组和植入性胎盘组在年龄、孕周、孕次方面比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。见表1和表2。

表1 观察组和对照组孕妇一般状况比较

注：观察组为侵入性胎盘患者，对照组为正常晚期妊娠的孕妇

表2 植入性胎盘和粘连性胎盘孕妇一般情况比较

1.3方法

1.3.1主要试剂：①骨桥蛋白测定：一抗为兔抗骨桥蛋白单克隆抗体，1∶150，由北京中杉金桥生物技术有限公司提供；二抗、染色液二氨基联苯胺溶液，均由DAKO公司提供。②E钙黏蛋白测定：一抗为鼠抗人E钙黏蛋白单克隆抗体，1∶60，由北京中杉金桥生物技术有限公司提供。

1.3.2测定方法：①骨桥蛋白测定采用En Vision二步法进行，分别取对照组胎盘母面中间带部分胎盘组织和观察组胎盘母面侵入母体子宫内膜肌层部分的胎盘组织各2块，每块约1 cm×1 cm×1 cm大小，避开出血、坏死、钙化部分，冲洗、脱水，石蜡包埋，取5 μm厚度切片。常规脱蜡、水化，于pH 6.0乙二胺四乙酸液中高温抗原修复2 min，PBS液冲洗，滴加一抗，37℃孵育60 min，滴加二抗，孵育30 min，二氨基联苯胺溶液显色。阴性参考为以一抗稀释液代替一抗的结果。②E钙黏蛋白测定采用En Vision二步法检测，取石蜡切片常规脱蜡、水化，高温抗原修复，滴加一抗，孵育60 min。阴性参考为以一抗稀释液代替一抗的结果。

1.3.3阳性结果标准：①骨桥蛋白在光学显微镜下观察，细胞质被染成黄色、棕色或棕褐色的细胞为阳性[7-8]。每张切片随机选取5个视野，计算每个视野的阳性细胞数目。阳性标准按阳性细胞数目及染色浓度比较：阳性细胞<25%或细胞无显色为0分；阳性细胞数目26%～50%或黄色为1分；阳性细胞数目50%～75%或棕色为2分；阳性细胞数目>75%或棕褐色为3分。从0～6分计算每例综合评分，0分为阴性，1～2分为弱阳性，3～4分为阳性，5～6分为强阳性。②E钙黏蛋白在光学显微镜下观察，细胞质被染成淡黄色、棕黄色或棕褐色的细胞为阳性[9]。每张切片随机选取5个视野，计算每个视野的阳性细胞数目。阳性标准按阳性细胞数目及染色浓度比较：阳性细胞<5%或细胞无显色为0分；阳性细胞数目6%～25%或淡黄色为1分；阳性细胞数目26%～50%或棕黄色为2分；阳性细胞数目51%～75%或棕褐色为3分；阳性细胞数目>76%为4分。从0～7分计算每例综合评分，0～1分为阴性，2～3分为弱阳性，4～5分为阳性，6～7分为强阳性。阳性率=(弱阳性+阳性+强阳性)例数/总例数×100%

2 结果

2.1观察组与对照组胎盘组织中骨桥蛋白和E钙黏蛋白的表达情况比较 观察组骨桥蛋白阳性表达率显著高于对照组，差异有统计学意义(P<0.01)。见表3。观察组E钙黏蛋白阳性表达率显著低于对照组，差异有统计学意义(P<0.01)。见表4。

注：观察组为侵入性胎盘患者，对照组为正常晚期妊娠的孕妇；与对照组比较，bP<0.01

表4 观察组与对照组孕妇胎盘组织中E钙黏蛋白的表达情况比较[例(%)]

注：观察组为侵入性胎盘患者，对照组为正常晚期妊娠的孕妇；与对照组比较，bP<0.01

2.2不同类型侵入性胎盘E钙黏蛋白和骨桥蛋白的表达情况比较 粘连性胎盘组骨桥蛋白阳性表达率低于植入性胎盘组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表5。粘连性胎盘组E钙黏蛋白阳性表达率高于植入性胎盘组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表6。

表5 不同类型侵入性胎盘骨桥蛋白的表达情况比较[例(%)]

注：与植入性胎盘组比较，aP<0.05

表6 不同类型侵入性胎盘E钙黏蛋白的表达情况比较[例(%)]

注：与植入性胎盘组比较，aP<0.05

2.3E钙黏蛋白和骨桥蛋白在侵入性胎盘组织中表达的相关性 在48例侵入性胎盘组织中，E钙黏蛋白和骨桥蛋白的表达水平呈负相关(r=-0.569,P<0.05)。

3 讨论

胚胎发育及胎儿生长过程中，正常妊娠维持的重要环节是胎盘的形成与母胎循环的建立[10]。胎盘绒毛滋养细胞对母体组织的侵袭是有节制的，其通过对排异反应的抵御,从母体吸收营养供给胚胎，帮助完成受精卵着床、植入和生长的过程。妊娠期的子宫内膜发生蜕膜化反应形成蜕膜层，既可作为通道供给胎儿发育所需的营养物质，亦可抵御绒毛滋养细胞对母体的过度侵袭行为。当子宫内膜损伤或发育不良时，缺乏蜕膜层的屏障，绒毛滋养细胞增生和侵袭行为不受控制，胎盘侵入种植于子宫肌层深部，甚至穿透子宫表面浆膜层，形成穿透性胎盘。

骨桥蛋白介导细胞间黏附、细胞迁移及细胞外基质的相互作用，具有促使肿瘤发生发展、抗炎、损伤修复的作用[11-12]。骨桥蛋白在子宫内膜和胎盘组织中表达，参与受精、胚胎着床、胎盘形成、母胎界面黏附、信号转导以及母胎免疫调节等生殖的全过程[13]。细胞因子、细胞外基质、黏附分子共同调控着绒毛滋养细胞的侵袭行为，形成动态平衡。平衡一旦被打破，则可出现滋养细胞侵袭行为异常，发生病理妊娠[14]。本研究结果显示，骨桥蛋白在正常妊娠胎盘组织的阳性表达率为21.95%，在侵入性胎盘组织的阳性表达率为77.08%，表明侵入性胎盘组织中骨桥蛋白高表达，滋养细胞侵袭能力上调，侵袭过度。骨桥蛋白在粘连性胎盘组织的阳性表达率为67.74%，在植入性胎盘组织的阳性表达率为94.12%，表明骨桥蛋白表达越高，滋养细胞侵袭能力越强，侵入子宫内膜肌层越深。

E钙黏蛋白是钙依赖性跨膜糖蛋白，属于黏附分子家族，具有介导黏附同种细胞、使上皮层细胞的完整性和极性得到维持[15-16]，E钙黏蛋白的表达水平升高，细胞间黏附能力增强，可降低细胞的迁移及浸润能力[17]，表达水平下降则加强了细胞迁移和浸润能力。文献报道，E钙黏蛋白的表达水平升高与胚胎停育、自然流产等病理妊娠的发生有密切的关联[18]。本研究结果显示，E钙黏蛋白在正常妊娠胎盘组织的阳性表达率为100.00%，在侵入性胎盘组织的阳性表达率为85.42%；在粘连性胎盘组织的阳性表达率为93.55%，在植入性胎盘组织的阳性表达率为70.59%。说明E钙黏蛋白的表达水平降低促使了侵入性胎盘的发生。这可能与细胞间黏附能力减弱，滋养细胞浸润能力增强有关[19]。本研究结果显示，48例侵入性胎盘组织中，E钙黏蛋白和骨桥蛋白的表达呈负相关。表明E钙黏蛋白表达越低，骨桥蛋白表达越高，则滋养细胞侵袭能力越高，促使侵入性胎盘的发生。

综上所述，侵入性胎盘患者胎盘组织中骨桥蛋白阳性率高于正常妊娠者、E钙黏蛋白低于正常妊娠者，两者呈负相关，可影响侵入性胎盘的发生。