慢性丙型肝炎患者血清丙型肝炎病毒载量与肝纤维化的相关性研究

邵林楠 张树婷 周世航 王 霓 潘凌子▲ 刘 铭

1.大连市血液中心，辽宁大连 116001；2.大连医科大学细胞生物学教研室，辽宁大连 116044

丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）是单股正链核糖核酸（RNA）病毒，HCV RNA 是HCV 的遗传物质，其载量是表示体内HCV 含量的直接指标，含有9 个基因区，全长约9.6 kb[1]。HCV RNA 载量可提示体内病毒复制的能力，在HCV 感染和致病机制中有重要的地位。一般感染HCV 后发病隐匿，不易引起患者的重视，因而慢性率高，易发展成肝纤维化进而转变为肝硬化或肝细胞癌[2]。肝纤维化是由于构成细胞外基质的各种成分过量沉积导致的正常肝细胞功能丧失[3]。肝活检被公认为肝纤维化诊断的“金标准”，用于纤维化严重程度的评估[4]。但肝活检具有创伤性，而且技术要求较高，导致诸多患者接受度不佳，因此为患者找到一种血清学或影像学检查手段极为关键。非侵入性血清生物标志物：胶原Ⅳ（Collagen Ⅳ，C-Ⅳ），层粘连蛋白（Laminin，LN），Ⅲ型氨基末端前肽胶原蛋白（type-Ⅲ pro-collagen，P ⅢNP）和透明质酸（hyaluronic acid，HA）被作为慢性肝炎肝纤维化程度的4 项指标在临床上应用广泛[5]。同时，一种建立在超声基础上的FibroScan 瞬时弹性诊断技术与肝脏纤维化程度之间有很好的相关性，被认为是诊断肝脏纤维化的可靠手段[6-8]。近年来，多位学者试图阐述血清中HCV RNA载量与肝纤维化的关系，但是得到的结论尚存争议。Shahid 等[9]发现在HCV 患者中HCV RNA 载量与肝纤维化显著相关。而梁勇彪等[10]发现HCV RNA 载量只与肝纤维化4 项指标中的1 项HA 相关，与其他3 项指标无关。而多数学者认为HCV RNA 载量与肝纤维化不相关[11-14]。本研究利用血清肝纤维化4 项指标及瞬时弹性检测指标来探讨HCV RNA 载量与肝纤维化的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2015 年4～12 月就诊于大连市第六人民医院的162 例慢性HCV 感染患者，均符合原卫生部2008 年颁布的丙型病毒性肝炎诊断标准[14]（WS213-2008）：血清HCV-RNA 阳性+慢性临床表现/组织病理检查/影像学检查，且无其他肝脏疾病。男84 例，女78 例；年龄（54±14）岁。为了研究HCV RNA 病毒载量与肝纤维化的相关性，根据HCV RNA 病毒载量结果将HCV 患者分为3 组：lg（HCV RNA）≤5 组（21 例，其中男11 例，女10 例），5＜lg（HCV RNA）≤7 组（66 例，其中男31 例，女35 例）和lg（HCV RNA）＞7 组（75 例，其中男42 例，女33 例）。162 例患者全部收集到肝纤维化4 项指标数据，其中仅有54 例患者进行了FibroScan 瞬时弹性检测。

1.2 主要试剂及仪器

血清HA、PⅢNP、LN、C-Ⅳ试剂盒（批号分别为20080111、20080310、20080213、20080201）由上海 海军医学研究所提供。全自动核酸分离纯化及检测系统COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan 及其配套试剂购自Roche 公司。FibroScan 502 仪器购自法国ECHOSENS 公司。

1.3 血清HA、PⅢNP、LN、C-Ⅳ检测

血清HA、PⅢNP、LN、C-Ⅳ含量均用放射免疫法检测，严格按照厂家使用说明书操作。

1.4 HCV RNA 病毒载量检测

HCV RNA 病毒载量采用全自动核酸分离纯化及检测系统COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan 及其配套试检测，每组检测均有阴性、弱阳性、强阳性对照，具体操作和结果判定严格按照试剂盒说明进行。用以10 为底的对数形式表示。

1.5 FibroScan 瞬时弹性检测

FibroScan 502 仪器按照操作规范严格操作，探头选择右侧腋前线至腋中线7、8 肋间或8、9 肋间，连续有效检测10 次，最终结果取中位数，单位为kPa。检测数据的质控标准要求：四分位间距小于中位数的1/3，成功率>60%结果才可靠。

1.6 统计学方法

采用SPSS 21.0 统计软件进行分析。计量资料不符合正态分布，以中位数（四分位数）[M（P25，P75）]表示，多组间变量差异采用Kruskal-Wallis H 检验方法分析；相关性分析采用Spearman 相关分析。以P ＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HCV RNA 病毒载量与肝纤维化

162 例慢性HCV 患者在不同病毒载量组别间肝纤维化4 项指标分布情况见表1。肝纤维化4 项指标在不同HCV RNA 病毒载量组间差异无统计学意义（P ＞0.05）。

2.2 HCV RNA 病毒载量与FibroScan 瞬时弹性检测

54 例慢性HCV 患者在不同病毒载量组别间Fi-broScan 瞬时弹性检测指标分布情况，瞬时弹性检测结果在不同HCV RNA 病毒载量组间差异无统计学意义（P ＞0.05）。见表2。

表1 162 名慢性HCV 患者在不同病毒载量组别间肝纤维化4 项指标分布情况[μg/L，M（P25，P75）]

表2 54 例慢性HCV 患者在不同病毒载量组别间FibroScan 检测结果[kPa，M（P25，P75）]

2.3 各指标间相关性分析

FibroScan 瞬时弹性检测值与肝纤维化4 项指标C-Ⅳ、LN、PⅢNP 及HA 均呈正相关（r=0.530、0.340、0.289、0.438，P=0.000、0.007、0.023、0.000），HCV RNA病毒载量与肝纤维化4 项指标及FibroScan 瞬时弹性检测值均无相关性（P=0.571、0.067、0.232、0.865、0.327）。

3 讨论

经统计分析得出，中国大陆地区根据地理位置不同，抗HCV 抗体流行率也是不同的，流行率范围为0.32%～6.51%，平均水平为0.91%，而辽宁省抗HCV抗体流行率仅次于最高的省份湖北（6.51%）位居第二（2.88%）[13]，远高出平均水平，形式严峻不容乐观。因此必须提高对HCV 感染患者的临床特征及发病机制的认识，对于在2030 年前消除病毒性肝炎的全球卫生部门战略目标具有十分重要的意义[15]。肝纤维化是慢性肝病演变为肝硬化的中间必经阶段，是疾病演变中一个连续进展的过程[16]。HA、PⅢNP、LN 及C-Ⅳ四项指标均属于细胞外基质，在临床上应用比较广泛，在肝纤维化的形成及发展的不同时期，血清中浓度也不相同[17]。FibroScan 瞬时弹性诊断技术基于肝脏纤维化与肝脏弹性之间的关联性，利用切变弹性探测仪对纤维化程度进行瞬时测定[18]。

根据本研究中各指标间相关性分析发现瞬时弹性检测结果与肝纤维化四项指标均有良好的相关性，说明瞬时弹性检测结果可以作为肝纤维化的预测因子[19]，而且，美国胃肠病学会临床指南建议用瞬时弹性检测结果来评估HCV 患者的纤维化程度[20]。本研究利用血清肝纤维化4 项参数及FibroScan 瞬时弹性检测两种手段来评估HCV 患者肝纤维化程度，进而探讨HCV RNA 载量与肝纤维化的相关性。结果显示，HCV RNA 载量与肝纤维化4 项指标及FibroScan瞬时弹性检测结果均不相关。为了进一步研究HCV RNA 病毒载量与肝纤维化4 项指标及瞬时弹性检测结果之间的关系，本研究对样本进行分组，在不同病毒载量组别间肝纤维化4 项指标及瞬时弹性检测结果差异无统计学意义（P >0.05），由以上结果得出结论，HCV 患者血清中RNA 病毒载量与肝纤维化不相关。本研究的结论与多数学者观点一致[11-13]。原因可以分为以下几点：血清中HCV RNA载量不是一个稳定的参数而是波动的；HCV 也可在肝脏以外部位复制，大量的循环HCV 并不总是意味着在肝脏中病毒复制处于更活跃的状态；肝纤维化是由于构成细胞外基质的各种成分过量沉积所导致，与血清中HCV RNA 载量关系不密切。

本研究既有优点也存在不足之处，优点是学者们多是通过血清学肝纤维化4 项指标结果来判断与HCV RNA 载量的相关性[11-13]，而本研究除了上述4 项指标外还通过超声成像系统分析了肝纤维化与血清中HCV RNA 载量的相关性，使结果更加可靠。不足之处是未对患者进行HCV 分型，但是有研究表明不同基因型与血清中HCV RNA 载量并不相关[21]。

综上所述，本研究通过对慢性HCV 患者血清中HCV RNA 载量与HA、PⅢNP、LN 及C-Ⅳ及瞬时弹性检测结果的相关性进行研究，发现血清中HCV RNA 病毒载量与以上参数均不相关，即血清中HCV RNA 病毒载量不能反映肝脏纤维化程度。