基于全自动推染片仪和阅片仪的血常规复检规则的建立和验证

陈 霏，王 碧，王一丹，关彬彬，解 圆

陕西省核工业二一五医院检验科，陕西咸阳 712000

血常规是医院最基本的血液检查项目，标本量大，目前，医院实验室普遍采用血细胞分析仪进行白细胞、红细胞、血小板及一些相关参数的分析，很大程度上提高了检测速度，但人血细胞存在着多样性和复杂性，仪器检测只能作为一种过筛手段，遇见可疑情况，仍需有经验的工作人员通过显微镜检查(简称镜检)进行确认。但在现实情况下，做不到每个标本都进行镜检，因此设置合适的复检规则成为提高血常规检测质量和效率的必要手段[1-3]。2005年，国际血液学复检专家组推荐了“41条自动血细胞分析和分类复检规则”(简称国际41条)[4]；2008年国内的XE-2100复检协作组，制订并推荐了“23条复检规则”(简称国内23条)[5]。本研究基于上述两大规则，结合本院临床实际，制订和验证适合于本实验室的复检规则并加以评估。

1 资料与方法

1.1标本来源 随机收集陕西省核工业二一五医院2018年4月16日至4月30日血常规标本1 330份。标本采集使用一次性真空采集管(抗凝剂为乙二胺四乙酸二钾)，采集部位选择肱静脉，采集量为2 mL，剔除疑似凝集、溶血、乳糜、黄疸的标本，必要时重新采集，所选标本覆盖所有临床科室，其中初诊标本为1 060份，复诊标本为270份，标本来源、患者性别、年龄随机分布。

1.2仪器与试剂 血常规检测采用Sysmex XE-5000全自动血细胞分析仪(日本Sysmex公司)；血涂片制备使用Sysmex sp-1000i全自动推染片仪(日本Sysmex公司)；阅片使用全自动血细胞形态分析仪(瑞典Cellavision公司)。除染液为珠海贝索生产的瑞氏-吉姆萨染色液，其他试剂均为原厂配套试剂。显微镜为Olympus光学显微镜(日本Olympus公司)。

1.3方法

1.3.1血细胞分析仪检测 所有标本按照实验室Sysmex XE-5000全自动血细胞分析仪流水线标准作业程序进行操作，在采集后2 h内完成检测。所用仪器每年参加国家卫生健康委员会、陕西省临床检验中心的室间质评活动，且质评成绩合格；每半年进行一次校准；每天开机后、检测标本前均使用2个不同水平的质控品进行质控，质控合格后方可进行患者标本检测。

1.3.2制片 使用Sysmex sp-1000i全自动推染片仪制备标准血片两张，分别进行编号，分装在两套标本盒内。每批涂片，随机抽取3～5张，肉眼和低倍镜观察血片质量。仪器法推片速度快且易于标准化，速度和质量上都优于人工制片。

1.3.3镜检 将两套涂片分别置于DM96进行阅片，仪器自动镜检并分类。由2名有丰富形态学经验的工作人员将分类结果进行校正再分类，记录分类结果，同时进行各类细胞形态学观察。阅片仪分类结束后，再由工作人员在普通光学显微镜下进行白细胞、血小板数量的估计，对白细胞分类异常，增生异常活跃或低下，涂片过长或过短，过厚或过薄的血涂片进行重点镜检，密切关注片尾和边缘的血细胞，对红细胞形态异常和血小板异常要镜下浏览，分别记录镜检结果。整合阅片仪和镜检结果并记录。对于血细胞形态结果，只要有1名人员发现阳性即判断为镜检阳性。镜检包括确认发现形态异常、评估细胞数量异常。

镜检阳性参照专家标准[5-7]进行判断。包括(1)细胞形态学改变：红细胞明显大小不等(大小相差1倍以上)；发现疟原虫；中空淡染扩大(大于1/2淡染区)红细胞>30%；巨大血小板>15%；见到血小板聚集；存在杜勒小体的细胞>10%；中毒颗粒中性粒细胞>10%；空泡变性粒细胞>10%。(2)细胞的数量/比例改变：原始和幼稚细胞≥1%；早幼/中幼粒细胞≥1%；晚幼粒细胞≥2%；异型淋巴细胞>5%；有核红细胞≥1%；浆细胞≥1%。

1.4复检规则制订 参照国际41条[4]和国内23条[5]复检规则，针对本院患者病种特点，结合Sysmex XE-5000五分类血细胞分析仪的性能特点，制订出血涂片复检规则22条。

1.5复检规则评价标准[8-9]标本经XE-5000血细胞分析仪检查后，符合复检规则22条中任意一条规则即为复检规则阳性。以镜检结果为“金标准”，符合上文镜检阳性标准任意一条即为阳性，否则判定为阴性。若仪器检验时触及规则为阳性，血涂片镜检阳性为真阳性，镜检未发现异常则仪器结果为假阳性；若仪器检验时没有触及规则为阴性，镜检阴性为真阴性，镜检发现了异常则仪器结果为假阴性。

1.6统计学处理 根据验证公式计算真阳性率、假阳性率、真阴性率、假阴性率、复检率、阳性预测值、阴性预测值和准确率。

2 结 果

根据镜检结果分析，假阳性标本154份，触发参数主要为血小板计数、异型淋巴细胞、有核红细胞、未成熟粒细胞、核左移；而假阴性标本30份，主要是血小板聚集、未成熟粒细胞、巨大血小板和有核红细胞。计算真阳性率为7.97%(106/1 300)，假阳性率为11.58%(154/1 330)，假阴性率为2.26%(30/1 330)，真阴性率为78.20%(1 040/1 330)。复检率为19.55%，准确率为86.16%，阳性预测值为40.77%，阴性预测值为97.20%。

3 讨 论

Sysmex XE-5000全自动血细胞分析仪是目前临床应用广泛的血细胞分析仪之一，它采用电阻抗法、流式细胞术及染色等方法进行白细胞、红细胞、血小板的计数和分类，同时还可以对原幼细胞及异常情况进行报警，其分析速度快且结果准确率高。但是，血细胞形态复杂多变，仪器检测不能识别特殊形态结构的细胞，因此还不能完全替代人工镜检[10-13]。原则上，每一个血常规标本都应镜检，但由于样本量过大，实际工作不可能达到。因此，一份合适的复检规则尤为重要。复检规则的制订要在保证检验质量的基础上(假阴性率<5%)，尽可能地降低复检率。

制订和验证复检规则需要的样本量大(≥1 000份标本)，人工制片和镜检不仅效率低下，耗时耗力，而且个人制片、染色、阅片的习惯性差异较大，难以标准化。而且复检规则验证最耗时的工作就是白细胞分类，全自动推染片仪配合全自动阅片机，自动推片，流水线操作，阅片仪白细胞预分类，抓取细胞图像显示在计算机的显示屏上，解放双手且再现性好，不光速度快，提高了效率，同时易于标准化，涂片之间差异较小，浏览视野更多，易于发现异常细胞，大大提高了复检规则建立和验证的质量、效率[12]。但是，由于全自动阅片仪扫描的是单细胞层，对于边缘和尾部不能完全浏览，且对于一些特殊标本，如白细胞总数过低或过高、血小板聚集、不典型细胞、红细胞压积过低或过高、血涂片过短或过长等情况，自动化仪器的机动性不足，这时候，仍然需要人工镜检进行弥补，对仪器镜检的结果进行人为校正，二者结合，保证复检规则的可靠性[10-12]。

通过对1 330份标本的分析比对，假阴性率为2.26%，符合国际检验学复审专家组的规定(<5.0%)，且没有漏检原始、幼稚细胞，复检率为19.55%，符合中国血细胞复检协定组规定，略低于其他研究报道[13-14]，工作人员工作量适中。

综上所述，本复检规则的制订合理有效，假阴性率低，复检率适中，符合国家的相关规定，可以应用于临床。复检规则的制订和验证是一项长期的工作，必须大力发展、常年坚持和不断改进。并且需要定期对人员进行形态学的培训，加强临床沟通，结合医院情况，不断改进优化，并且应该向临床宣传，加强临床的配合度和认知度，更好地为临床诊断和患者治疗提供支持。