高效液相色谱法测定健胃消食片中橙皮苷的含量

马文学

（甘肃省临夏州药品检验检测中心 甘肃临夏 731100）

1 前言

健胃消食片中的中药成分为麦芽、山药、山楂、陈皮、太子参，可对消化不良、脾胃虚弱等疾病进行治疗[1]。其中，橙皮苷为陈皮的活性成分，对其含量进行准确测定可明确健胃消食片的质量，而常用的测定方法为高效液相色谱法，优势明显，本次研究主要对其检测价值进行分析。

2 仪器与试剂

仪器：1100 高效液相色谱仪（安捷伦科技有限公司）；紫外检测器（可变波长可见）；色谱工作站。

试剂：甲醇（色谱纯）；纯化水，冰醋酸（分析纯）。

色谱条件：C18 柱色谱柱；流动相为水-冰醋酸-甲醇，比例：61∶4∶35；流速：1.0 mL/min；测定波长：283 nm；理论塔板数：大于2 000；柱温：30℃；进样量：20 μL。

3 结果

3.1 选择样品溶剂

样品溶剂主要为标准品流动相溶液、流动相、标准品甲醇溶液、重蒸甲醇，进样量均为10 μL，保留时间分别为10.33、5、9.27、9.23 min，峰面积分别为1 175 269、无、2 901 118、55 320，证明甲醇存在溶剂峰，会影响标准品，而对流动相却不会产生影响，因此溶剂选择流动相。

3.2 提取样品方法

提取样品的方法主要有3 种，包括索氏提取法、加热回流法、超声法，进样量均为20 μL，峰面积分别为10 986、50 639、47 756，最佳提取方法为加热回流法，进而本次研究提取方法选择加热回流法。

3.3 考察线性关系

制备对照品溶液，精密称量12.5 mg 橙皮苷对照品，在100 mL 量瓶中加入甲醇稀释溶解至刻度，摇晃均匀；精密量取3 mL 放置于25 mL 量瓶中，用50%甲醇将其稀释至刻度，摇晃均匀，对照品每1 mL 橙皮苷含量为15 μg，精密吸取对照品溶液18、14、10、6、2 μL，分别注入液相色谱仪，以色谱条件为依据实施测定（n=3），计算测定结果，得出橙皮苷峰面积积分值和含量的回归方程，Y=5919.4X-674.78，线性相关系数r=0.999 8，分析线性回归曲线，发现峰面积和含量线性关系良好的范围为2～18 μL。

3.4 精密度测定

精密称定1.5 g 样本，在100 mL 圆底烧瓶中加入50 mL 甲醇，采用加热回流法提取2 h，加入50 mL甲醇，加热回流1 h，对滤液进行合并、过滤、蒸干处理，应用流动相对残渣进行溶解，在溶解过程中，要先加甲醇再加冰醋酸，转移至100 mL 容量瓶中，加水定容制得15 mg/mL 的样品溶液，连续进样5 次，每次进样20 μL，对峰面积进行测定，并计算橙皮苷含量。 结果显示，橙皮苷的峰面积分别为560 100、559 961、569 229、566 550、567 354，相对标准偏差（RSD）为0.76%，检测方法精密度良好。

3.5 回收率测定

对样品进行加样回收试验，精密量取570 mg 健胃消食片片剂，制得样本7 份，其中空白组1 份，其余共分为3 组，每组2 份，分别精密加入橙皮苷对照品溶液进行测定，对回收率进行计算，结果显示回收率为98.5%，RSD 为0.35%，详见表1。

表1 回收率测定结果

3.6 稳定性测定

精密吸取同一批供试品10μg，每隔2h 测定1 次，共测定6 次，峰面积变化并不明显，峰值面积结果为：611 214、608 168、618 554、621 112、605 799、603 288，RSD 为1.20%，10 h 之内样品溶液稳定。

3.7 重复性试验

精密称定1.5 g 样品5 份，利用高效液相色谱法对橙皮苷含量进行测定，结果显示橙皮苷含量分别为0.258、0.272、0.270、0.256、0.262 mg/g，RSD 为2.7%，该测定方法重复性较好。

3.8 测定样本

选取3 批样本，利用高效液相色谱法对供试品进行测定，并以上述方法实施操作，选择3 次进样，对峰面积平均值进行计算，结果详见表2。

表2 峰面积试验

4 讨论

在临床上，健胃消食片作为一种常用的中成药物，主要治疗食欲不振、脾胃虚弱、积食、消化不良等，其中药成分主要有山药、太子参、麦芽、陈皮、山楂等[3-5]。 健胃消食片包含较多中药成分，且中药成分也较为复杂，因此对色谱分离条件要求较高，需要较强的专属性，较好的重现性和稳定性，以及较高的准确度等[6]。 本文使用高效液相色谱法对健胃消食片中橙皮苷含量进行测定，结果显示，处理样品方法较为简单，精密度和重复性较好[7]。 高效液相色谱法结合原标准，可有效控制健胃消食片质量，实用性较强。 流动相为水-冰醋酸-甲醇，橙皮苷分离较好，而且冰醋酸对色谱柱腐蚀较轻，可为检测奠定基础[8]。在现有相关标准中，鉴别健胃消食片中陈皮的方法为薄层色谱法（TLC），因为橙皮苷含量较低，呈现较弱的斑点荧光，无法获得满意效果[9，10]。 市场上销售的健胃消食片中橙皮苷含量差异性较大，质量也无法得以保证，而使用高效液相色谱法对橙皮苷含量进行测定，其优势较为明显，准确、简便、较易定量，可对健胃消食片质量进行有效控制。

综上所述，在健胃消食片中应用高效液相色谱法对橙皮苷含量进行测定较为有效，可对其质量进行有效控制，此检测方法优势明显，建议广泛推广于临床检验中。