我国部分地区牧场产气荚膜梭菌感染状况的调查分析

文/黄广明 宝立群 牟和鑫 姚 臻 黄俊恒 李德鹏

〔建明（中国）科技有限公司〕

产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens）又称魏氏梭菌，是一种人畜共患病原菌，广泛分布于自然界，能产生多种外毒素，是引起各种动物坏死性肠炎、肠毒血症及动物猝死症的主要病原菌之一[1]。该菌导致的动物猝死症发病急、病程短、死亡率高，各类家畜均可发病，尤以牛的发病率最高[2]。在我国，产d气荚膜梭菌病在20世纪80年代有零星发生，以犊牛发病为主；90年代以来，该病日趋严重，发病地区也不断扩大，给养牛业造成了巨大的经济损失[3]。

A、B、C、D、E型产气荚膜梭菌均能感染牛（肉牛、奶牛等），但是以A、C、D型居多，C型产气荚膜梭菌是奶牛犊牛肠毒血症的主要病原[4]。B型菌主要引发羔羊痢疾，而E型菌感染仅见于野生牦牛[5]。体格强壮、膘情较好的黄牛、犊牛和高产奶牛是该菌侵害的主要目标；病畜发病时间差别较大，从数小时到数个月不等，病死率可达80%。由产气荚膜梭菌外毒素引起的犊牛梭菌性肠炎是可致幼犊急性死亡的一种疾病[6]。另外，犊牛10 日龄左右出现真胃炎也是该菌发病的典型症状之一。

本研究在2019年2—7月，采用生化快速检测方法，对华北、西北和西南3 个地区6 个省（市、区）的10个牧场进行了产气荚膜梭菌感染状况的调查，为牧场管理者防控梭菌类疾病，避免造成重大损失提供参考。

1 材料与方法

（1）仪器与试剂

高压灭菌锅、试管加热器、生物安全柜、分析天平、离心管、EP管、无菌医用棉签、SFP琼脂培养基、PBS缓冲液。产气荚膜梭菌快速检测试剂盒，由建明（中国）科技有限公司研制。

（2）菌株与益生菌制剂

产气荚膜梭菌ATCC13124，购自中国兽药监察所；益生菌制剂克洛生TM-R，由建明（中国）科技有限公司生产。

（3）取样地点

对华北地区5 个牧场205 头，西北地区3 个牧场86 头，以及西南地区3 个牧场60 头各阶段牛的粪便进行采样。合计犊牛154 头，育成牛23头，泌乳牛131 头，干奶牛43 头。

（4）检测方法

原理。产气荚膜梭菌可分解培养基中的含硫化合物，产生硫化氢气体，硫化氢遇到亚铁离子可生成不溶性硫化亚铁黑色沉淀。SFP琼脂培养基是一种选择性培养基，常用于产气荚膜梭菌的筛选和计数。

表1 产气荚膜梭菌感染程度评判标准

表2 华北地区5 个牧场产气荚膜梭菌检测结果

表3 西北地区3 个牧场产气荚膜梭菌检测结果

采样。用棉拭子挑取牛粪便样品约1 g于PBS缓冲液中，搅拌均匀。

检测。按产气荚膜梭菌快速检测试剂盒说明书操作。（5）结果判定

通过实验室检验，由产气荚膜梭菌标准菌株ATCC13124作为阳性对照，制定产气荚膜梭菌活菌数（以CFU/g表示）的评判标准。感染程度的评判标准参考国标对食品中产气荚膜梭菌检验的标准以及其他文献[7]（表1）。

2 结果与分析

（1）各地区牧场产气荚膜梭菌感染情况

华北地区。从华北地区5 个牧场的检测结果来看，犊牛和泌乳牛产气荚膜梭菌重度感染率较高，分别为56.82%和50.00%；干奶牛和育成牛中度感染率较高，分别为62.50%和38.10%；各阶段轻度感染率均较低。因此，犊牛、泌乳牛这2 个阶段产气荚膜梭菌感染均较严重，而干奶牛和育成牛次之（表2）。

西北地区。在西北地区3 个牧场中，犊牛重度感染率较高，为44.44%；在中度感染率上，泌乳牛最高，为38.46%；而轻度感染率则是干奶牛最高，为39.29%。从产气荚膜梭菌正常比例来看，犊牛污染程度最重，其次是泌乳牛，干奶牛污染程度最轻（表3）。

西南地区。西南地区3 个牧场产气荚膜梭菌的重度感染比例相对较低，只有犊牛稍高为28.57%。各阶段中度感染比例较高，育成牛、泌乳牛、犊牛和干奶牛中度感染的比例分别为50.00%、46.67%、42.86%和28.57%。干奶牛轻度感染比例最高为42.86%。综合来看，犊牛阶段产气荚膜梭菌感染最严重，重度感染和中度感染相加后占比为71.43%（表4）。

3 个地区综合感染情况。从3 个地区11 个牧场的综合情况来看，重度感染率最高的是犊牛，为49.53%；其次是泌乳牛，为36.64%，因此，此3 个地区是产气荚膜梭菌疾病的重灾区。中度感染率最高的是育成牛，为39.13%；其次是干奶牛，为25.58%。干奶牛轻度感染比例最高，为34.88%。从综合感染情况来看，犊牛感染率最高，为79.22%；泌乳牛其次，为64.12%；育成牛和干奶牛分别为60.87%和60.47%（表5）。

（2） 克洛生TM-R对产气荚膜梭菌感染的治疗效果

对西北某牧场11 头产气荚膜梭菌感染并有不同程度腹泻症状的犊牛，进行了克洛生TM-R使用效果的跟踪监测。使用克洛生TM-R前，该菌重度感染率为45.45%，中度感染率为36.36%，轻度感染率为18.18%。使用克洛生TM-R 12 天后重度感染率和中度感染率分别下降至0和9.09%，梭菌正常的比率达到72.73%，说明使用克洛生TM-R对梭菌感染的控制效果显著（表6）。

表4 西南地区3 个牧场产气荚膜梭菌检测结果

表5 3 个地区11 个牧场产气荚膜梭菌感染情况汇总

表6 西北某牧场11 头犊牛使用克洛生TM-R前后感染产气荚膜梭菌情况对比

3 讨论

轻度感染样品中产气荚膜梭菌的数量为1.0×104～1.0×106CFU/g，属于亚临床感染状态，随时可能因为天气、转群、其他疾病等应激因素而导致梭菌类疾病的发生；中度感染样品中产气荚膜梭菌的数量为1.0×106～1.0×107CFU/g；而重度感染样品中产气荚膜梭菌的数量为1.0×107CFU/g以上，后两者均已处于感染甚至发病的状态[7，8]。

华北、西北和西南3 个地区的调查结果表明，产气荚膜梭菌在牧场的感染非常普遍，尤其是犊牛重度感染比例最高，其次是泌乳牛，给养牛业带来重大威胁。牛产气荚膜梭菌病的发病率低，但死亡率高，一旦发生，往往来不及治疗即造成死亡[2]，因此，采取综合防制措施尤为重要。一方面要加强畜舍卫生管理，定期使用0.1%高锰酸钾溶液、10.0%氢氧化钠溶液轮换交替消毒[6]；另一方面，可通过饲喂微生态制剂来调节肠道菌群平衡，尤其是选择对产气荚膜梭菌有抑制作用的益生菌，可预防该病的发生[2]。

克洛生TM-R是一种以枯草芽孢杆菌PB6为主要活性成分的益生菌类饲料添加剂，PB6所分泌的细菌素可特异性杀死产气荚膜梭菌。从使用克洛生TM-R以后的检测结果来看，产气荚膜梭菌的感染情况有明显的好转，重度感染情况完全消失，梭菌正常的比例显著提高，说明克洛生TM-R在控制产气荚膜梭菌感染方面具有显著的效果。