莲房化学成分的分离鉴定

宋 静 陈亚南 饶高雄

云南中医药大学中药学院 云南省民族特色养生理论与健康产品工程实验室，云南昆明 650500

莲Nelumbo nuciferaGaertn.的干燥花托即为莲房Nelumbinis receptaculum，又称莲壳、莲蓬壳、莲蓬，于秋季果实成熟时采收，除去莲子后以干燥品入药[1-2]。莲房在古籍中作为化瘀止血药使用已早有记载，《儒门事亲》中载莲壳散（碳制莲壳、棕皮与炒香附研粉）饭前服用可治疗血崩；以干莲房、荆芥均取一两，再加入五钱枳壳、薄荷、朴硝，研粉后使用的莲房枳壳汤可治疗痔疮[2-3]。此外，《本经逢原》中也表明莲房的主要作用是止血，可治疗血崩、下血、溺血等症。《本草拾遗》中记载莲房酒煮服之可用于治疗血胀腹痛及产后胎衣不下；水煮服之则可治疗野菌之毒[4-5]。而在2020版《中华人民共和国药典》中载“莲房味苦涩、性温，归肝经，具有化瘀止血的功效，主治崩漏、尿血、痔疮出血、产后瘀阻、恶露不尽等症”[1]。综上可知，无论是古籍记载还是现代应用，莲房的主要功效都是止血，主要用于治疗各种出血症。

但查阅现有文献发现，目前人们对与莲房药理作用主要集中在原花青素的抗氧化活性上[6]，关于其止血化瘀的药理作用研究几乎没有；其化学成分研究也较为缺乏，只有对莲房总黄酮的提取工艺及HPLC（high performance liquid chromatography）法进行含量测定的研究[7-10]。另外，在《中华人民共和国药典》中对于莲房的记载则比较简单，只有基本的性味归经、功效主治及灰分、水分检查等，鉴别上也仅仅只有性状及粉末鉴别，并无明确的指标性成分用于其含量测定及质量控制[1]。本研究主要对莲房的化学成分进行了研究，以期进一步了解莲房化瘀止血的物质基础，并为完善其质量标准提供一定的指标性成分。

1 器材

Bruker AvanceⅢ400 MHz型核磁共振仪[德国Bruker公司，四甲基硅烷（TMS）为内标]；柱色谱硅胶（200～300目，青岛海洋化工厂）；GF 254薄色谱硅胶（青岛海洋化工厂）；LH-20羟丙基葡聚糖凝胶（Sephadex LH-20，美国Pharmacia公司）；CHP20P小孔树脂凝胶（MCI Gel CHP-20/P120，日本三菱化成公司）；反相柱色谱材料ODS（Merck公司）；薄层色谱显色剂（10%硫酸乙醇）；甲醇、乙醇、丙酮、三氯甲烷等试剂为工业（重蒸后使用）或化学纯溶剂。

药材购于云南省文山市，经云南中医药大学中药学院陈绍田研究员鉴定为植物莲Nelumbo nuciferaGaertn.的干燥花托，植物标本现存于云南中医药大学。

2 提取与分离

莲房干品29kg，用锤敲击莲房底部至裂开，加12倍量的纯化水，加热回流提取2次，2h/次，合并滤液后减压浓缩得到浸膏10.2kg（干膏：3.12kg），滤渣舍弃。向10.2kg浸膏中加入30L 95%乙醇，用手反复搓揉浸膏，静置0.5h，过滤并浓缩得醇不溶部分（2.1kg）、醇溶部分（1kg）。醇不溶部分（2.1kg）经TLC检测后发现此部分主要为葡萄糖、蔗糖等成分，故丢弃；醇溶部分（1kg）用10L工业甲醇进行溶解后再冷却，过滤后得到醇溶液，浓缩醇溶液得干膏415g，其沉淀部分含有杂质较多，且经TLC检测后发现该部分与醇溶液中成分基本一致，故丢弃。

415g莲房样品用MCI进行初步处理，分别用纯化水、甲醇、丙酮做洗脱剂冲柱。纯化水洗脱部分TLC薄层对照主要为大极性盐糖，故舍弃；甲醇洗脱部分TLC薄层对照为主要部分，则保留（命名为Fr.A）；丙酮洗脱部分TLC薄层对照主要为小极性油脂等，故舍弃。Fr.A（98.07g）经Sephadex LH-20凝胶柱色谱甲醇洗脱后得到四个流份：A1、A2、A3、A4。Fr.A.1是以紫点为主的样品；Fr.A.2点较杂且含有部分背景为主；Fr.A.3主要为三个黄点；Fr.A.4主要为黄点。

Fr.A.1经硅胶柱色谱，用氯仿-甲醇系统按不同配比进行梯度洗脱后，再结合Sephadex LH-20凝胶柱色谱、反相柱Rp-18洗脱纯化，得到化合物7（118mg）、8（232mg）、9（187mg）。

Fr.A.2经MCI柱层析后，舍弃水、丙酮洗脱部分，回收甲醇部分浸膏后，再结合MCI柱、反相柱C18、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、硅胶反复洗脱纯化，得到化合物5（78mg）、6（57mg）。

Fr.A.3经MCI柱层析后，舍弃水、丙酮洗脱部分，回收甲醇部分浸膏，再经硅胶柱色谱，用氯仿-甲醇系统按不同配比进行梯度洗脱纯化，得到化合物1（8.7g）、3（236mg）。

Fr.A.4经硅胶柱色谱，用氯仿-甲醇系统按不同配比进行梯度洗脱后，再经Sephadex LH-20凝胶柱色谱洗脱纯化，得到化合物2（263.4mg）、4（23mg）。

3 结构鉴定

化合物1：黄色粉末，溶于甲醇。1H-NMR（400MHz，CD3COCD3）：δ：7.81（1H，d，J=2.1Hz，H-2"）、7.68（1H，dd，J=2.2，8.5Hz，H-6"）、6.98（1H，d，J=8.5Hz，H-5"）、6.50（1H，d，J=2.1Hz，H-8）、6.25（1H，d，J=2.1Hz，H-6）；13C-NMR（100MHz，CD3COCD3）：δ：175.7（C-4）、164.1（C-7）、161.4（C-5）、156.9（C-9）、147.5（C-2）、146.1（C-3"）、145.0（C-4"）、135.8（C-3）、122.8（C-1"）、120.6（C-6"）、115.3（C-2"）、114.8（C-5"）、103.2（C-10）、98.3（C-6）、93.5（C-8）。以 上 数 据 与 文 献[11]报道对照基本一致，故鉴定化合物1为槲皮素（Quercetin）。

化合物2：黄色粉末，溶于甲醇。1H-NMR（400MHz，DMSO-d6）δ：7.52（1H，s，J=2.2Hz，H-2"）、7.68（1H，d，J=2.2Hz、8.5Hz，H-6"）、6.80（1H，d，J=8.5Hz，H-5"）、6.40（1H，d，J=2.1Hz，H-8）、6.20（1H，d，J=2.1Hz，H-6），5.38（1H，d，J=7.6Hz，H-1"）；13C-NMR（100MHz，DMSO-d6）δ：178.0（C-4）、164.6（C-7）、161.7（C-5）、156.8（C-9）、156.7（C-2）、149.0（C-3"）、145.3（C-4"）、134.0（C-3）、122.5（C-6"）、121.6（C-1"）、116.4（C-5"）、115.6（C-2"）、102.3（C-1"）、104.4（C-10）、99.1（C-6）、93.9（C-8）、76.3（C-5"）、73.7（C-3"）、71.7（C-2"）、68.4（C-4"）、60.6（C-6"）。以 上 数据与文献[12]报道对照基本一致，故鉴定化合物2为异槲皮苷（Isoquercitrin）。

化合物3：黄色粉末，溶于甲醇。1H-NMR（400MHz，DMSO-d6）δ：7.59（1H，dd，J=8.4，2.2Hz，H-6"）、7.54（1H，d，J=1.9Hz，H-2"）、6.83（1H，d，J=8.4Hz，H-5"）、6.41（1H，d，J=2.0Hz，H-8）、6.21（1H，d，J=2.0Hz，H-6）、5.49（1H，d，J=7.4Hz，H-1"）、3.57～3.33（4H，m，H-2"～5"）。13CNMR（100MHz，DMSO-d6）δ：177.6（s，C-4）、170.2（s，C-6"）、164.8（s，C-7）、161.6（s，C-5）、156.7（s，C-9）、156.6（s，C-2）、149.1（s，C-4"）、145.4（s，C-3"）、133.6（s，C-3）、122.1（s，C-1"）、121.3（d，C-6"）、116.5（d，C-5"）、115.7（d，C-2"）、104.3（s，C-10）、101.6（d，C-1"）、99.2（d，C-6）、94.0（d，C-8）、76.4（d，C-3"）、76.3（d，C-5"）、74.3（d，C-2"）、71.8（d，C-4"）。以 上 数 据 与 文献[13]报道对照基本一致，故鉴定化合物3为槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷（quercetin-3-O-β-D-glucuronide）。

化 合 物4：1H-NMR（400MHz，CD3COCD3）δ：7.99（1H，d，J=9.8Hz，H-4）、6.34（1H，d，J=2.1Hz，H-8）、6.26（1H，d，J=2.1Hz，H-6）、6.02（1H，d，J=9.8Hz，H-3）；13C-NMR（100MHz，CD3COCD3）δ：161.9 （s，C-7）、160.5（s，C-2）、157.1（s，C-5）、155.7（s，C-9）、138.8（d，C-4）、109.5（d，C-3）、102.2（s，C-10）、98.2（d，C-6）、94.6（d，C-8）。以上数据与文献[14]报道对照基本一致，故鉴定化合物4为5，7-二羟基香豆素（5，7-Dihydroxycoumarin）。

化合物5：白色粉末，溶于甲醇。1H-NMR（400MHz，DMSO-d6）δ：7.32（1H，s，H-8）、6.92（1H，s，H-5）、3.57～3.33（m，H-2"～5"）、2.22（3H，s，H-11"）、2.19（3H，s，H-12"）；13CNMR（100MHz，DMSO-d6）δ：156.2（s，C-2）、154.3（s，C-3）、131.7（s，C-6）、131.4（s，C-7）、125.4（s，C-9）、123.8（s，C-10）、117.1（d，C-8）、116.5（d，C-5）、74.1（d，C-3"）、73.2（d，C-4"）、68.7（d，C-2"）、63.9（t，C-5"）、45.1（t，C-1"）、19.8（q，C-11"）、19.2（q，C-12"）。以上数据与文献[15]报道对照基本一致，故鉴定化合物5为1-核糖醇基-2，3-二酮-1，2，3，4-四氢-6，7-二甲基-喹喔啉（1-ribityl-2，3-dike to-1，2，3，4-tetrahydro-6，7-dimethyl- quinoxaline）。

化合物6：白色粉末，溶于甲醇。1H-NMR（400MHz，MeOD）δ：6.75～6.78（2H，m，H-4，5）、6.65～6.68（2H，m，H-3，6）；13C-NMR（100MHz，MeOD）δ：146.3（s，C-1，2）、120.9（d，C-4，6）、116.4（d，C-3，5）。以上数据与文献[16]报道对照基本一致，故鉴定化合物6为儿茶酚（catechol）。

化合物7：白色粉末，溶于氯仿。1H-NMR（CDCl3，400MHz）δ：2.35（2H，t，J=7.4Hz，H-2）、1.63（2H，m，H-3）、1.30（24H，m，H-4～15）、0.88（3H，t，J=6.5Hz，H-16）；13C-NMR（CDCl3，400MHz）δ：179.7（C-1）、34.0（C-2）、24.7（C-3）、29.7～29.1（C-4～13）、31.9（C-14）、22.7（C-15）、14.1（C-16）。以上数据与文献[17]报道对照基本一致，故鉴定化合物7为棕榈酸（palmitic acid）。

化合物8：白色粉末，溶于氯仿。10%硫酸-乙醇溶液显紫红色。通过与胡萝卜苷对照品的TLC对照，用多种溶剂系统展开后其Rf值及显色行为均相同，故鉴定化合物17为胡萝卜苷（daucosterol）。

化合物9：白色粉末，溶于氯仿。10%硫酸-乙醇溶液显紫色。通过与β-谷甾醇对照品的TLC对照，用多种溶剂系统展开后其Rf值及显色行为均相同，故鉴定化合物16为β-谷甾醇（β-sitosterol）。

4 讨论

本课题从莲房中分离鉴定出9个化合物，化合物1～9是初次从莲房中分离得到，化合物4、5则为莲中首分。

从实验结果可知，莲房醇提物中主要成分为黄酮类成分，根据《本草拾遗》中记载的莲房酒煮服之可用于治疗血胀腹痛，可知莲房醇提物可用于止血，但目前其具体活性成分不明。而现代研究表明，槲皮素可通过增加毛细血管抵抗力和降低血管渗透性，从而缩短凝血时间，起到止血作用[18]；故槲皮素有很大可能是止血作用的活性成分。此次实验分离到的成分中槲皮素的含量较高，纯品量有8.7g；为后期莲房化瘀止血活性成分的筛选提供了物质基础，同时也为完善《中华人民共和国药典》中莲房的质量标准及含量测定的研究提供了一定的依据。