孕妇及婴幼儿多种体液样本中巨细胞病毒感染情况的回顾性分析

夏 勇 熊礼宽 麦光兴 沈 楷 罗茗月 严泽浩

深圳市宝安区妇幼保健院中心实验室 （深圳出生缺陷重点实验室），广东深圳 518102

人巨细胞病毒（human cytomegalovirus，HCMV）亦称涎病毒，因其能够导致被感染细胞肿大且形成核内包涵体故而得名。其感染广泛，据报道我国的孕妇抗体阳性率可高达95%[1]。HCMV 通过垂直传播、围产期接触等方式可引起胎儿的宫内感染和婴幼儿的围生期和产后感染。尽管HCMV 多引起无症状感染，但对免疫力低下人群如婴幼儿、艾滋病患者、免疫抑制患者却可能引发严重疾病，如听力缺陷、神经系统发育延迟等[2-3]。目前HCMV 的实验室诊断最常使用的直接证据主要是HCMV DNA的检出[4-5]。因HCMV DNA 可以在人体的多种体液样本中检出且有各自的一些特点，因此本研究通过对孕妇乳汁、羊水及婴幼儿痰液、尿液和血液中HCMV DNA 的检测情况进行回顾性分析和总结，以便为临床选择、组合各种体液样本行HCMV 检测工作提出改进的建议。

表1 不同样本HCMV DNA检出率比较

1 资料与方法

1.1 一般资料

选 取2017 年1 月～2018 年6 月 在 深 圳 市宝安区妇幼保健院行HCMV DNA 检测的病例共4524 例，其中孕妇1089 例，年龄18 ～47 岁，平均（28.6±9.7）岁；男患儿2169 例，女患儿1227 例，年龄0 ～12 个月，平均（2.48±1.59）个月。

1.2 样本收集

乳汁、尿液样本由患儿家长采集2mL 以上于带盖无菌杯；住院患儿痰液由医护人员使用吸痰器采集痰液于带盖无菌杯；外周血样本采集2mL 于EDTA-K2 抗凝管或干燥管；羊水样本采集于15mL无菌离心管。所有样本立即送检或置于4℃保存。血清样本需3000r/min 离心10min 分离血清备用。

1.3 试剂与仪器

HCMV 检测采用广州中山大学达安基因股份有限公司人巨细胞病毒核酸定量检测试剂盒（PCR-荧光法）及美国ThermoFisher 公司ABI 7500 型实时荧光定量PCR 系统进行检测。操作均按照厂家说明书进行操作，HCMV DNA 按照厂家试剂盒说明书中规定以载量≥500 拷贝数/mL 为阳性。

1.4 统计学方法

采用SPSS17.0 软件进行统计分析。计数资料的检出率以百分率表示。按照不同特征分组间的HCMV DNA 检出率比较采用χ2检验。

2 结果

2.1 不同人群特征HCMV DNA检测结果比较

将孕妇分为18 ～34 岁组及35 岁以上组，其HCMV DNA 检出率分别为7.65%（75/980）及5.17%（6/116），两者差异无统计学意义（χ2=0.933，P=0.452）；男性及女性新生儿的检出率分别为47.58%（315/662）及47.13%（205/435），差 异 无统计学意义（χ2=0.022，P=0.902）；1 岁以内男性及女性的婴幼儿的检出率分别为42.69%（616/1443）及44.98%（345/767），差异无统计学意义（χ2=1.07，P=0.321）。

2.2 不同样本类型HCMV DNA检测结果比较

痰液、尿液、乳汁、血清及羊水的HCMV DNA 检 出 率 分 别 为48.77%（398/816），33.48%（627/1873），77.36%（492/636），12.06%（116/962），0.42%（1/237）。而各种样本的检出率比较，差异有统计学意义。见表1。

2.3 同一病例不同样本间HCMV DNA检测结果比较

选取20 例同时抽取了痰液、尿液、母亲乳汁及血清样本行HCMV DNA 检测的病例，对检出率进行比较，见图1。可见同一病例的血清的DNA 载量比其他体液更低，而痰液和尿液的载量更高。另外母亲乳汁是否检出HCMV DNA 并不决定婴幼儿的体液样本是否能检出。

图1 20例样本的痰液、尿液、母亲乳汁、血清的HCMV DNA结果直方图

2.4 不同感染时间及症状HCMV DNA检测结果比较

按照感染时间将HCMV 感染分为宫内感染（羊水检测HCMV DNA 阳性）、先天感染（出生后14 天及以内）、出生围生期感染（出生后3 ～ 12 周）、生后感染（出生后12 周）进行HCMV DNA，其检出率不断升高，分别为0.4%（1/237），13.5%（7/52），35.1%（692/1972），49.0%（385/786）[1]。且不同时期的检出率差异有统计学意义。见表2。

有症状成年患者的HCMV DNA 检出率为9.5%（2/21），无症状成年患者为10.1%（86/855），两者差异无统计学意义（χ2=0.006，P=1.000）。有症状儿童患者检出率为43.2%（1032/2388），无症状儿童患者为48.5%（175/361），差异无统计学意义（χ2=3.523，P=0.069）。但儿童的HCMV DNA 检出率明显高于成人（χ2=331.716，P ＜0.001）。

表2 不同感染时间HCMV DNA检出率比较

2.5 血清样本对HCMV DNA的治疗监测情况

选取了12 例诊断为HCMV 感染且进行抗病毒治疗的患者的血清样本进行治疗效果进行监测。其中1 例抗病毒治疗1 月后转阴1 月后再次检出HCMV DNA，继续治疗1 月后再次转阴；其余11 例样本转阴时间为0.4 ～4 个月不等，平均为（1.35±0.76）个月。

3 讨论

巨细胞在我国的感染及其广泛，且HCMV 的原发感染多发生于婴幼儿时期[6]。本文中HCMV DNA 在孕妇的总体检出率为7.39%，且与孕妇是否高龄无关（参照产前诊断35 岁）。而新生儿及1 岁以内婴幼儿的检出率分别为47.40%及43.48%，且并无性别差异。婴幼儿的检出率较高，可能与其自身生理性免疫力较为低下及母源性的感染有关。

乳汁的检出率高达77.36%，但孕妇其他体液样本的检出率仅为6.58%，且大多数为无症状感染者。从本文20 例同步测定了多种体液的病例来看，母亲乳汁是否检出HCMV DNA 并不决定婴幼儿的体液样本是否能检出，国外的研究报道的经母亲乳汁传播的HCMV 比率不到20%[7]。目前经处理的目前乳汁可消除病毒感染性，降低母乳喂养儿的先天感染率[8]。

唾液腺和肾脏是HCMV 感染者常见的排毒部位，本文中痰液和尿液的检出率分别高达48.77%及33.48%，但这类受检者往往并无临床症状，因此这些样本中的病毒学证据在作为HCMV 感染的临床诊断依据时应当更谨慎[1]。两者之中痰液的检出率更高，可能与本文中很多病例都是因肺炎行HCMV DNA 及其他呼吸道易感病原体检查有关，这部分病例的痰液中如果混入唾液可能会造成检出率偏高[9]。因此对怀疑肺炎患者应尽可能采用吸痰器采集痰液，以保证结果检测准确性。但值得注意的是，痰液和尿液的DNA 载量也相对其他体液更高，有研究显示持续性的高CMV DNA 拷贝数与婴幼儿的听力缺陷和神经系统损伤有关[10]。

血液并非HCMV 感染者的常规排毒部位，血清中HCMV 出现最晚，且其DNA 载量往往也与疾病的播散性和严重度有关[1]。本文中血清的检出率最低，且对于同一病例而言，其DNA 载量也比其他体液更低。将血清或者血浆作为HCMV 治疗监测的一项指标较为敏感，且可以定量，亦不容易出现血清特异性抗体的假性结果问题，参考意义较大[5，11]。本文中DNA 载量最快由阳性转阴病例仅12d，慢的可长达4 月，因此治疗效果因人而异[12]。且有病例的HCMV 感染出现了反复，这可能与HCMV 本身具有的生物学特性有关，即易持续性感染，经治疗后也仅是潜伏，却不能根除[1]。

羊水的HCMV DNA 检出率非常低，仅为0.42%，因此宫内感染可能并非婴幼儿原发感染的主要途径。这与婴幼儿的高检出率不相符合，因此无论羊水中是否检出HCMV DNA，在出生后都应当采集婴幼儿的直接样本进行复查以证实[1]。

本研究还发现随着出生时间增加，HCMV DNA的检出率是不断增加的。从先天感染期间的13.5%增加到了生后感染期间的49.0%。这可能与HCMV的感染途径增加有关，因此做好HCMV 的感染的一般预防、HCMV 感染性母乳的处理，以及有必要时的药物性预防很重要[13-14]。

总之，多体液样本的同步检测、合理化选择和组合对于HCMV 的防治有重要的意义。同时，本文还试就回顾性分析的结果提出几条样本采集和送检建议，以便为临床的HCMV 检测提供更好的服务。