固元酒增强免疫力功能的实验研究

孙泽兵

河北省清河县中心医院药剂科，河北 邢台 054800

1 材料与方法

1.1 受试物 固元酒以人参10 g、枸杞子25 g、淫羊藿25 g、覆盆子20 g，加8倍量50%vol的白酒浸泡30天，每周搅拌2次，加白酒调配至36%vol，制成1,000 mL。每日服用100 mL。按100 mL浓缩至6 mL的比例浓缩，取分别取6 mL、2 mL、1 mL浓缩液加入6 mL 50%vol的白酒配置成20 mL的灌胃液，灌胃剂量为10 mL/kg，即高、中、低剂量组（3、1、0.5 mL/kg），为人体推荐剂量的30、10和5倍。同时用50%vol的白酒配置15%vol酒精液作为酒精对照。

1.2 仪器 电子秤、电子天平、酶标仪、紫外分光光度计

1.3 试剂 小牛血清、1640培养液；LDH基质液。

1.4 实验动物 SPF级昆明种小鼠50只随机分为5组，每组10只，即对照组、酒精对照组、高、中、低剂量组。灌胃1次/d，连续30 d。给药结束后，颈椎脱臼处死小鼠，取脾脏称重，后制成脾细胞混悬液。

1.5 方法[1]

1.5.1 脾淋巴细胞转化试验（MTT法） 将脾细胞混悬液调整为3×106个/mL，分两孔加入24孔培养板中，一孔加ConA液，另一孔做对照。置5%CO2，37 ℃培养箱中培养72 h。培养结束前4 h，每孔吸去上清液0.7 mL，加入0.7 mL不含小牛血清的1640培养液，同时加入MTT 50 μl/孔，继续培养4 h。结束后，每孔加入1 mL酸性异丙醇，使紫色结晶完全溶解。测定OD值。

1.5.2 NK细胞活性测定（LDH法） 将脾细胞混悬液调整为2×107个/mL（效应细胞），传代后的YAC-1细胞调整为4×105个/mL（靶细胞），效靶比50:1，加入U型96孔培养板；最大释放孔加靶细胞和1%NP40各100 μL，另设靶细胞，各设3个重复孔，于37 ℃、5%CO2条件下培养4 h，离心，每孔吸取上清液置平底96孔培养板中，加入LDH基质液，反应3 min，每孔加入1 mol/L的HC1终止反应。测定OD值。

1.5.3 数据统计 （1）MTT法：用加ConA孔的OD值减去不加ConA孔的OD值代表淋巴细胞的增殖能力。（2）LDH法：NK细胞活性%=（反应孔OD-自然释放孔OD）/（最大释放孔OD-自然释放孔OD）。P＜0.05有统计学意义。

2 结果

2.1 对小鼠体重的影响 酒精对照组及三个剂量给药组小鼠的实验前后体重与对照组比较均无显著性差异（P＞0.05）。

表1 小鼠实验前后体重的变化（Mean±SD, g）

2.2 对小鼠淋巴细胞增殖能力和NK细胞的影响 中、高剂量组淋巴细胞增殖能力明显高于空白对照组（P＜0.05）；中、高剂量组NK细胞活性率相较于对照组显著增加（P＜0.05）。

表2 对小鼠淋巴细胞增殖能力和NK细胞的影响（Mean±SD）

3 讨论

中医自古有元气论，养本固元，为养生之根本。本品采用人参、枸杞子、淫羊藿、覆盆子制成固元酒，取之大补元气、滋阴添精，补肾固本之效。研究结果表明，固元酒通过Con A诱导脾淋巴细胞的增殖来刺激免疫活性细胞的增殖，并能提高NK细胞的转化率，从而提高机体的细胞免疫能力。