如何做好微生物实验前准备工作<br/>——浅谈微生物实验前准备工作的重要性

如何做好微生物实验前准备工作
——浅谈微生物实验前准备工作的重要性

2020-01-06刘家麒上海德诺产品检测有限公司

食品安全导刊 2019年30期

□ 罗妍刘家麒上海德诺产品检测有限公司

食品是人类摄入营养物质的主要来源，并且与人类健康有着密切的联系。随着人们生活水平的不断提高，对食品的质量与安全的要求也随之越来越高。食品微生物检验的目的就是生产出安全、卫生、符合标准的食品。然而，作为食品微生物检测的前道工序，如何做好食品微生物实验前的准备工作至关重要。本文将从微生物实验前试剂的配制、实验器材的灭菌、实验室的环境要求、实验所用器材的维护与保养以及最后样品接收时的核对工作展开论述，浅谈食品微生物实验前准备工作的重要性，以便做好实验前的准备工作，为实验的后续开展及有效性提供有效保障。

本文将从5个部分开展论述：实验试剂的配制；实验器材的灭菌；实验室的清洁；实验室器材的检查与维护与接收样品时的核对工作。

实验试剂的配制

实验试剂的配制数量是根据每天样品检测量多少而决定的，也是检测的一道重要前序工作。

严格按照使用说明配制

每种试剂的瓶身都会有使用说明，其中包含配制方法。配制试剂、培养基时必须严格按照配制说明进行配制，不能凭经验一概而论。有时生产厂家、培养基种类不同，配制方法及使用说明也会有所不同。在配制结束后应及时记录，绝不允许隔天补记。培养基需要每隔一段时间要进行检查，防止使用已经过期的培养基从而导致实验的准确性受到影响。

配制过程中的误差避免

无论微生物实验还是理化实验，很多时候都需要确保实验的精准性。培养基配制误差是直接导致实验结果偏离的一大主要因素。所以在微生物实验中培养基配制过程中应避免人为误差。尤其称取培养基时应拿药勺少量多次精确称取，称过量的试剂应废弃，不应往回倒，防止整瓶试剂或培养基污染或受潮。

实验器材的灭菌

微生物实验主要就是讲究无菌操作，灭菌效果也是微生物实验的一大重要组成因素。如果空白对照有菌落生长，说明配制的试剂灭菌不彻底，或是培养皿灭菌不彻底致，那么实验将会失效。

灭菌时间

不同物品的灭菌时间不同，具体参考表1。

表1 常见物品的灭菌时间

灭菌方法

常见的灭菌方法有物理灭菌法和化学灭菌法两种。微生物室最常用的灭菌方法就是物理灭菌法中的干热灭菌法和湿热灭菌法。

使用干热空气杀灭微生物的方法叫做干热灭菌法。即：161 ℃持续加热2 h。干热灭菌法常用于空玻璃仪器、金属器具的灭菌。凡带有塑料橡胶的物品、液体培养基及试剂均不适用于干热灭菌法。

常用的湿热灭菌法有巴氏灭菌法、煮沸灭菌法、流动蒸汽消毒法及高压蒸汽灭菌法。其中，高压蒸汽灭菌法用途广、效率高，是微生物实验室最常用的灭菌方法。当蒸汽压力达到103.1 KPa时，水蒸气的温度升高到121 ℃，经过15～20 min，可全部杀死锅内物品上的各种微生物和它们的孢子或芽孢。此法适用于耐高温而又不怕蒸汽的物品灭菌。

检查是否灭菌彻底

检查湿热灭菌的效果需要使用湿热灭菌指示胶带，灭菌后胶带上有黑色条纹状出现。检查干热灭菌的效果需要使用干热灭菌指示卡，灭菌后指示卡呈深棕色。此外，灭菌指示计应合理保存，不应敞露在空气中。每天实验前所准备的需要灭菌的物品都需要贴上相应的指示条，检查灭菌是否彻底。如果培养皿、试剂、试管等微生物实验器材灭菌不彻底将会导致整个实验失效。

实验室的清洁

实验室是进行科学实验的地方，不仅要保证实验室的安全，还要保持实验室的清洁与卫生，为科学实验创造良好的环境。同时，好的检测环境也保证了检验质量，提升数据可靠性。

实验室清洁

实验技术人员需要负责实验室的卫生工作，并定期记录。养成良好的卫生习惯非常重要。每次微生物实验后都需要打扫清洁，并填写记录。无菌室内需放置75%浓度的酒精棉球，多用于实验前消毒。实验结束后可以用消毒水浸泡过的抹布擦拭桌面，以达到良好的清洁效果，消毒清洁后的无菌室应用紫外灯照射1 h。此外，观察室、待灭菌器材桌面也需要经常用干净抹布擦拭。特别需要注意的是，无菌室内的消毒抹布不能与无菌室外的其他抹布混用，防止交叉污染。

紫外灯的使用

紫外灯一般是在实验前1 h开启,开启后人员不得进入无菌室。做完实验，人员打扫完实验室后再次开启1 h。与此同时，每天的无菌室紫外灯灭菌记录应同步填写，保证实验室灭菌效果的同时，也要保证记录的按时、准确填写，以及记录的真实性。无菌室紫外灯刚关闭后不能立即进行实验，更不能在紫外线菌灯开启的状态下进行微生物实验，这样会对人体造成伤害。紫外线菌灯需要定期维护更换，以确保灭菌效果。

实验室器材的检查与维护

实验室的各种仪器是单位的固有资产，使用或维护不当就会造成机器损坏，给单位带来不必要的经济损失。

移液管的准备工作

目前，1 mL和10 mL玻璃移液管是中小型食品企业微生物实验用的较多的玻璃仪器。那么，移液管在实验的准备前夕，一旦操作不当就会造成头端破损，从而导致定量实验的精准性受到影响。每天用完的移液管需要轻拿轻放，洗净后烘干，最后需要在尾部塞少量棉花后（做实验起阻隔细菌的作用）方可灭菌。灭菌前需要让移液管呈75°方向角缓慢倾斜放入灭菌桶，如果垂直放置会较为容易导致移液管头端破损。玻璃仪器中，之所以强调移液管，是因为相比试管和培养皿，移液管是用于微生物检验定量的实验器材，它决定了实验的准确性。经过长期一段时间的不当操作，将会导致玻璃移液管由于实验前准备工作操作不当而损坏报废。此外，检验机构由于样品检测量较大，一般会选用移液枪进行微生物检测。

实验室设备的维护

微生物实验室的恒温培养箱是相对比较昂贵的仪器，也是微生物检验的必备仪器。根据检测样品的培养温度需要，每个培养箱都会设定不同的温度值。每天进入实验室后首先就需要检查每个培养箱是否正常运行，温湿度是否正常，加湿器剩余水量情况，并做好相关记录，确保实验培养物能得到及时、有效培养。培养箱的维护至关重要，由于维护不当造成损坏，将会对单位造成不必要的损失。

高压灭菌锅和烘箱的使用具有一定的危险性，相关人员需要经过专业的培训后方可操作，操作不当可能造成人身伤害。这两种设备都需要年检合格才能继续使用，高压灭菌锅需要使用人员定期排水和注水、规范操作，延长使用寿命。

样品接收工作

核对样品

检验机构中的采样人员每天都会把当天采集的样品带回，由发样人员在抽样单上贴上检测编号后，由微生物相关检测专员根据检测指标进行检测。检测前的最后一步就是核对样品是否存在发样问题，防止进入无菌室进行检测时才发现样品数量缺少等问题导致无法检测。

不接收任何与抽样、检测要求不符的样品

在接收样品时首先需要核对每个样品的编号，如分级采样的样品一般1个编号为5件同种样品，当发现检测数量不符或检测量不够时，要及时和发样人员联系，不检测任何不符合要求的样品。如果发样编号贴错，应与发样人员确认后开始检测，确保检测的有效性。此外，遇见疑似不做微生物指标检测的样品，应及时确认，如果确实是样品发错，立即退还发样人员。

食品企业样品微生物检测样品数量是根据不同生产情况而定的，检测前也需要核对样品种类与数量。