血清外泌体miR-92a在弥漫大B细胞淋巴瘤康艾注射液联合化疗治疗监测中的临床意义

王妃菲 张宇 吴筱莲

[摘要] 目的 探讨血清外泌体miR-92a在弥漫大B细胞淋巴瘤康艾注射液联合化疗治疗监测中的临床意义。 方法 选取42例弥漫大B细胞淋巴瘤患者为观察对象，按照治疗方法不同平均分为对照组和研究组。对照组患者采用CHOP方案化疗，研究组患者在对照组基础上联合康艾注射液治疗。采用realtime PCR法检测所有患者在治疗前后血清中外泌体miR-92a的表达水平;收集不同时间点血清评估miR-92a与治疗效果的关系。 结果 与对照组相比，研究组患者总有效率明显升高，组间比较差异具有统计学意义（P<0.05）;研究组患者降低血清外泌体miR-92a的程度更为明显，组间比较差异具有显著性（P<0.05）。与化疗前相比，对照组和研究组均能明显降低患者血清外泌体miR-92a的表达水平，差异具有统计学意义（P<0.05）。弥漫大B细胞淋巴瘤患者miR-92a与c-MYC呈负相关关系（r=-0.451，P<0.001）。血清外泌体miR-92a区分缓解与非缓解患者的效能较强。 结论 血清外泌体miR-92a在弥漫大B细胞淋巴瘤患者中表达升高，其检测可用于监测康艾注射液联合化疗治疗的临床疗效。

[关键词] miR-92a;弥漫大B细胞淋巴瘤;臨床意义;康艾注射液

[中图分类号] R733.1          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-9701（2019）30-0042-04

Clinical significance of serum exosome miR-92a in the monitoring of Kangai injection combined with chemotherapy for diffuse large B-cell lymphoma

WANG Feifei   ZHANG Yu   WU Xiaolian

Department of Hematology， the First Affiliated Hospital of Zhejiang University of Traditional Chinese Medicine， Hangzhou   310000， China

[Abstract] Objective To investigate the clinical significance of serum exosome miR-92a in the monitoring of Kangai injection combined with chemotherapy for diffuse large B-cell lymphoma. Methods 42 patients with diffuse large B-cell lymphoma were enrolled in the study. They were divided into control group and study group according to different treatment methods. The control group was treated with CHOP chemotherapy， and the patients in the study group were treated with Kangai injection on the basis of treatment in the control group. The expression levels of exosome miR-92a in serum of all patients before and after treatment were detected by realtime PCR. The relationship between serum miR-92a and therapeutic effect was evaluated at different time points. Results Compared with that of the control group， the total effective rate of the study group was significantly higher， and the difference between the groups was statistically significant（P<0.05）. Patients in the study group were more likely to reduce serum exosome miR-92a， and the difference between the two groups was significant（P<0.05）. Compared with that before chemotherapy， both the control group and the study group significantly reduced the expression level of serum exosome miR-92a in patients after chemotherapy， and the difference was statistically significant（P<0.05）. There was a negative correlation between miR-92a and c-MYC in patients with diffuse large B-cell lymphoma（r=-0.451， P<0.001）. Serum exosome miR-92a had strong performance in distinguishing between patients with remission and non-remission. Conclusion The expression of serum exosome miR-92a is high in patients with diffuse large B-cell lymphoma. The detection can be used to monitor the clinical efficacy of Kangai injection combined with chemotherapy.

[Key words] miR-92a; Diffuse large B-cell lymphoma; Clinical significance; Kangai injection

细胞淋巴瘤是非霍奇金淋巴瘤最常见的一种病理类型，病理形态学主要表现为B淋巴细胞呈弥漫性生长，细胞的大小为正常淋巴细胞的2倍，被称为弥漫性大B细胞淋巴瘤[1-2]。目前，临床主要通过制定合适的化疗方案来治疗此疾病，加以康艾注射液对化疗患者进行辅助治疗，具有清热解毒、消瘀散结之功效，临床上常用于肺癌、恶性淋巴瘤及恶性肿瘤等疾病[3-4]。弥漫大B淋巴瘤的治疗药物价格较为昂贵，也存在一定的潜在风险，给患者带来了极大的经济压力和心理负担，大部分患者难以接受，进一步探寻有检测意义的分子标记物对于化疗过程而言十分重要[5-6]。有文献调查显示：血清外泌体miR-92a与癌症的发展及检测存在一定的意义[7]。国内对于血清外泌体miR-92a在弥漫大B细胞淋巴瘤治疗检测中的作用的相关研究较少，本研究对血清外泌体miR-92a在弥漫大B细胞淋巴瘤康艾注射液联合化疗治疗监测中的临床意义进行探讨，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018年1月～2019年2月我院就诊并经临床检查确诊为弥漫大B细胞淋巴瘤[9]患者42例作为研究对象，按照治疗方案不同平均分为两组，即研究组和对照组。两组一般资料比较无明显差异（P>0.05），具有可比性。见表1。男23例，女19例，平均年龄（55.09±10.21）岁;AnnArbor分期Ⅰ～Ⅱ期19例，Ⅲ～Ⅳ期23例;有B症状者18例，伴随大包块者9例，乳酸脱氢酶（LDH）升高16例，正常26例;无肝肾功能障碍、无身体其他脏器疾病、既往无化疗治疗史。

表1   两组患者基本情况比较

1.2方法

对照组患者接受标准CHOP方案[环磷酰胺600 mg/m2（第1天），长春新碱1.4 mg/m2（第1天），阿霉素25 mg/m2（第1天），和强的松60 mg/d持续5 d（第1～5天）]。化疗每3周重复1次，6个疗程。研究组患者在对照组治疗基础上联合康艾注射液（长白山制药股份有限公司生产，国药准字Z20026868，50 mL溶于250 mL 10%葡萄糖溶液，静脉滴注，1次/d，3周为1个疗程，共6个疗程治疗。

1.3 观察指标

对于纳入研究的患者分别在化疗前、化疗中及化疗后收集患者静脉血5.5 mL，健康体检人群与体检时收集静脉血5.5 mL，置于4℃左右保存，离心15 min，吸出上层血清，然后再离心15 min，吸取上层无细胞血清，分装至无酶EP管中，放置在-80℃下备用。按试剂盒（购自美国SBI公司）说明书操作步骤提取外泌体miR-92a。使用纳米粒径分析鉴定miR-92a大小，实时荧光定量检测血清中miR-92a mRNA（引物均购自美国Qiagen公司），采用2-ΔΔCt表示miR-92a相对表达量，重复3次。采用免疫组化法检测c-MYC蛋白。

1.4 疗效评价

根据临床医师及《恶性淋巴瘤疗效评价标准》[8]对其疗效进行评估，分为完全缓解（CR），病灶彻底消失，且持续时间至少1个月;部分缓解（PR），肿瘤最大直径×最大垂直直径减少超过50%，其余病变并无明显扩大，且持续1个月以上;疾病稳定（SD），肿瘤最大直径×最大垂直直径减少或提高在50%及以下，且持续1个月时间;疾病进展（PD），肿瘤最大直径×最大垂直直径扩大25%及以上，或发现新病灶。总有效率=[（CR+PR）/总例数]×100%。

1.5 统计学方法

应用SPSS24.0软件进行分析，计数资料用[n（%）]表示，采用χ2检验;计量资料用（x±s）表示，采用t检验;相关性分析采用Pearson相关。以各组患者近期疗效的状态作为治疗后疗效分类指标，以血清外泌体miR-92a表达水平作为疗效评估敏感度指标进行ROC曲线绘制。P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1 两组患者近期疗效评价

与对照组相比，研究组患者总有效率明显升高，组间比较差异具有统计学意义（P<0.05）。见表2。

2.2 血清外泌体miR-92a与c-MYC相关性分析

弥漫大B细胞淋巴瘤患者miR-92a与c-MYC呈负相关关系（r=-0.451，P<0.001）。

2.3 弥漫大B细胞淋巴瘤患者化疗后血清外泌体miR-92a水平变化

与化疗前相比，对照组和研究组均能明显降低患者血清外泌体miR-92a的表达水平，组间比较差异具有统计学意义（P<0.05）。与对照组相比，研究组患者降低血清外泌体miR-92a的程度更为明显，组间比较差异具有显著性（P<0.05）。见表3。

2.4 血清外泌体miR-92a治疗效果评估

以化疗疗效为状态变量，血清外泌体miR-92a水平为测试变量绘制ROC曲线，结果显示AUC为0.856（95%CI：0.726～0.948）（P<0.05），表明血清外泌体miR-92a区分缓解与非缓解患者的效能较强。见封三图8。

3 讨论

弥漫大B细胞淋巴瘤是成人常见的非霍奇金淋巴瘤亚型，具有高度异质性和侵袭性，临床治疗通常以联合化疗方案为主[9，10]，但仍有约35%患者会出现复发转移，虽然目前有中西药的聯合化疗，如联合康艾注射液辅助治疗，康艾注射液主要由人参、黄芪等中药材组成，具有增加机体免疫力及抑制实体瘤生长等作用，增强机体特异性和非特异性免疫功能，与化疗联合作用，可以降低毒副反应，提高治疗效果[11-12];虽然近期疗效对提高患者机体免疫能力有益，但远期效果仍不容乐观。弥漫大B细胞淋巴瘤具有极大的病程异质性，生存期短则1年，多则数十年，加强对疾病病程的监测，对于判断患者的疗效状态、改进治疗方案、延长患者生命而言是至关重要的[13-14]。目前，对于此疾病临床疗效的判断，多见于影像学检查，费用较高且不良影响较大[15]。近年来，外泌体等液体活检成为临床研究的热门[16-17]，而对于血清外泌体miR-92a用于肿瘤诊断及疗效检测的临床作用研究较少，近些年的研究证实miR-92a在多种肿瘤细胞株中表达异常，推测检测miR-92a的表达量可能与肿瘤细胞的发生、发展有密切联系，但目前对miR-92a的研究靶点、靶基因作用机制、其表达量在不同肿瘤发展阶段的关联等机制尚未阐明，本研究主要对血清外泌体miR-92a在弥漫大B细胞淋巴瘤康艾注射液联合化疗治疗监测中的临床意义进行探讨。

本研究显示：血清外泌体miR-92a在癌症患者的体内水平表达升高，而治疗后水平有降低的趋势[18]，推断血清外泌体miR-92a可能是潜在的弥漫大B细胞淋巴瘤诊断标志物。然后，本研究分析显示miR-92a和c-MYC存在负相关关系，有研究报道，miR-92a的基因族簇与c-MYC相近，而c-MYC则与EF2家族二者具有一个负反馈调节系统，在正常生理状态时各因子的含量保持平衡状况，在病理状态时，平衡状态被破坏，所以当机体产生弥漫大B细胞淋巴瘤时，miR-92a水平上调，参与疾病的发展[19-20]。本研究对化疗前、化疗后的miR-92a水平变化进行检测，以评估其治疗效果，对于完全缓解组和部分缓解组，其化疗后的miR-92a水平已明显恢复，提示血清外泌体miR-92a水平可在一定水平反映化疗效果，相较于传统的影像学检查而言，该监测手段简便快捷且相对价廉，并可避免相关的放射损伤。

综上所述，血清外泌体miR-92a水平变化在弥漫大B细胞淋巴瘤患者的临床检测中具有一定意义，其水平变化与治疗效果相关。治疗效果较好患者中血清外泌体miR-92a水平逐渐降低至正常水平，而治疗效果较差患者血清外泌体miR-92a水平变化不明显，可作为治疗效果评估的检查标志物。但本研究所纳入的研究样本量较少，且随访时间短，应当进一步扩大样本量并延长随访时间加以验证。

[参考文献]

[1] Dlouhy I，Torrente MA，Lens S，et al. Clinico-biological characteristics and outcome of hepatitis C virus-positive patients with diffuse large B-cell lymphoma treated with immunochemotherapy[J]. Annals of Hematology，2017，96（3）：405-410.

[2] Yazbeck V，Shafer D，Perkins EB，et al. A Phase 2 Trial of Bortezomib and Vorinostat in Mantle Cell Lymphoma and Diffuse Large B-Cell Lymphoma[J]. Clinical Lymphoma Myeloma & Leukemia，2018，118（21）：353-354.

[3] 王学谦，龚宏霞，林洪生，等. 康艾注射液在肿瘤姑息治疗中的临床研究现状[J]. 世界中医药，2015，10（8）：1264-1269.

[4] 王建正， 赵宏波. 联合化疗对弥漫性大B细胞淋巴瘤患者的治疗效果及炎性因子的影响[J]. 肿瘤学杂志，2016， 22（5）：436-438.

[5] 王清云，岑溪南，任汉云. 弥漫性大B细胞淋巴瘤的治疗最新进展[J]. 国际输血及血液学杂志，2017，40（1）：51-55.

[6] 李江涛，刘辉，范芸，等. 老年初诊弥漫性大B细胞淋巴瘤患者临床特点回顾性分析[J]. 中华老年医学杂志，2016，35（2）：201-204.

[7] 黄晓艳，唐爱华. 宫颈癌患者血清miR-29a、miR-92a水平检测及临床意义[J]. 中国妇幼保健，2018，33（24）：305-307.

[8] Cheson BD，Pfistner B，Juweid ME，et al. Revised Response Criteria for Malignant Lymphoma[J]. J Clin Oncol，2007，25（5）：579-586.

[9] 宫子木，杨威. 2015年美国国家综合癌症网弥漫大B细胞淋巴瘤诊疗指南解读[J]. 中国实用内科杂志，2015， 35（5）：406-410.

[10] 佟丹江. 弥漫大B细胞淋巴瘤的流行病学分析[J]. 中国现代药物应用，2016，10（8）：46-47.

[11] 樊慧婷，丁世兰，裴迎霞，等. 康艾注射液调节荷瘤机体免疫功能的研究[J]. 中国新药杂志，2016，25（18）：2154-2160.

[12] 袁一凡，陈晓月，刘保霞，等. UPLC-MS/MS法同时测定康艾注射液中11种成分[J]. 中草药，2017，48（13）：2660-2665.

[13] 杨帆，钱申贤，赵亦菲，等. MYC/Bcl-2共表达在弥漫大B细胞淋巴瘤预后判断中的意义研究[J]. 中华疾病控制杂志，2016，20（7）：717-720.

[14] 刘宁，丁凯阳，张瑰红，等.弥漫大B细胞淋巴瘤中miR-5585-3p的表达及其意义[J].临床与实验病理学杂志，2016，32（2）：152-156.

[15] 姜宇，周仁华，李晶，等. 原发性中枢神经系统非霍奇金淋巴瘤的影像学特征[J]. 临床神经病学杂志，2018， 31（1）：26-28.

[16] 邹江，郭晓兰. 液体活检在肿瘤診治中的研究进展[J]. 国际肿瘤学杂志， 2018， 45（2）：107-111.

[17] 王宁舫，杨逸，陈实富，等. 液体活检技术对肺癌临床应用研究进展[J]. 中华结核和呼吸杂志，2018，41（11）：881-883.

[18] 史金虎，王刚，郭留雄，等.MIR-92a、MIR-100及MIR-143在膀胱癌患者血清的表达及临床意义[J].现代泌尿外科杂志，2018，23（5）：336-339.

[19] 张成银，高志强，孙晶晶，等. miR-92a在糖尿病肾脏疾病患者血清中表达变化及与病程进展的相关性研究[J]. 中国糖尿病杂志，2018，26（9）：46-50.

[20] 邓嘉秋，冯德魁，吕生辉，等.结直肠癌患者血清、粪便和癌组织中miR-21、miR-217、miR-29b和miR-92a-1的检测及其临床意义[J].中国肿瘤生物治疗杂志，2018， 25（1）：85-88.

（收稿日期：2019-06-21）