成人血清胃泌素释放肽前体参考区间的建立

张晓红，赵宇晨，郭拥军

(1.首都医科大学附属北京同仁医院检验科，北京100730；2.首都医科大学临床检验诊断学系，北京100070)

参考区间是诠释患者的实验室检测成果，实验室成立参考区间可以为临床提供参考依据[1]。目前我国肺癌按组织病理学特征可分为小细胞肺癌 (SCLC)和非小细胞肺癌 (NSCLC)。SCLC具有恶性化程度高、生长速度迅猛 、容易发生远处转移和对放化疗高度敏感等特点，因此早期快速特异性地诊断SCLC显得十分重要[2-3]。胃泌素释放肽(GRP)是一种胃肠道激素的调节肽，也广泛存在于神经内分泌细胞、肺成纤维细胞和支气管上皮细胞中[4]，在疾病状态下通常由SCLC细胞产生。以往曾将血液中GRP水平作为SCLC的肿瘤标志物，但由于GRP半衰期很短，仅有2 min很难对其进行检测。胃泌素释放肽前体(ProGRP)是GRP较为稳定的前体，目前已成为一种SCLC肿瘤标志物，在SCLC的早期诊断、疗效判断及复发预测中特异性较高。因此，建立成人血清ProGRP的参考区间可以为临床对SCLC的早期诊断和预后提供参考依据。

1 资料与方法

1.1一般资料 严格筛选首都医科大学附属北京同仁医院2016年6月至2019年4月体检健康人群2 051例作为研究对象，其中男性1 110例，女性941例，年龄18～86岁，平均年龄为(45.5±13.3)岁。入选标准：(1)无各类肾脏疾病导致的肾功能侵害；(2)近期无服用会出现肾损伤的肾毒性药物；(3)无肺部疾病病史；(4)排除甲胎蛋白、癌胚抗原、神经元烯醇化酶[5]、鳞状上皮细胞癌相关抗原、细胞角蛋白19片断抗原异常；(5)无其他遗传病史；(6)排除各种肿瘤疾病患者包括良恶性肿瘤。所有数据来自于本院检验科实验室信息系统。

1.2仪器与试剂 采用美国雅培公司生产的化学发光微粒子免疫检测法ProGRP 测定试剂盒在全自动免疫分析仪(i2000SR)上进行检测。使用配套的校准品和质控品，检测期间保证每天的室内质控均在控。

1.3方法 所有研究对象均在空腹条件下取静脉血3～5 mL，静置20 min，3 000 r/min离心10 min。排除标本量不足、严重溶血、黄疸、乳糜等标本，立即进行检测。所有试验严格按照仪器和ProGRP项目检测的标准操作规程(SOP)进行操作。

1.4统计学处理 采用SPSS22.0软件对血清ProGRP检测结果进行数据处理及统计学分析。对所得的数据使用Dixon法剔除离群值后，采用K-S检验判断数据是否处于正态分布。经统计分析后，血清ProGRP检测结果为非正态分布。采用Mann-WhitneyU检验比较各年龄段不同性别之间的差异。通过Spearman非参数相关分析检验血清ProGRP检测结果和年龄之间的相关性。利用非参数Kruskal-Wallis检验比较不同年龄段成人血清ProGRP水平，并采用非参数方法计算实际标本分组血清ProGRP检测结果的2.5百分位数、5百分位数、50百分位数、95百分位数和97.5百分位数，将95百分位数作为参考区间的上限。P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结 果

2.1不同年龄段成人血清ProGRP检测结果比较 通过Spearman非参数相关分析检验血清ProGRP检测结果和年龄之间的相关性。结果显示血清ProGRP检测结果与年龄之间存在明显的正相关(r=0.238，P<0.05)。不同年龄段成人血清ProGRP检测结果比较见表1。

2.2各年龄段成人不同性别间ProGRP检测结果比较 采用Mann-WhitneyU检验比较各年龄段成人不同性别之间ProGRP检测结果，各年龄段成人不同性别之间血清ProGRP检测结果比较，差异无统计学意义(P值分别为0.233、0.683、0.271、0.557、0.588和0.499)。将各年龄段不同性别的数据进行合并，经统计分析后，6个年龄段血清ProGRP检测结果的中位数分别为34.6、34.1、37.2、37.7、39.4和46.7 pg/mL，见图1。

表1 不同年龄段成人血清ProGRP检测结果比较(pg/mL)

续表1 不同年龄段成人血清ProGRP检测结果比较(pg/mL)

图1 6个年龄段成人血清ProGRP检测结果的中位数水平

2.3Kruskal-Wallis检验比较不同年龄段成人血清ProGRP检测结果 利用非参数Kruskal-Wallis检验比较不同年龄段成人ProGRP水平，结果显示，18～<30岁、30～<40岁、40～<50岁、50～<60岁和60～<70岁与70～≤86岁成人ProGRP水平比较，差异有统计学意义(P<0.05)；前5个年龄段成人ProGRP水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。因此，将18～<70岁年龄段血清ProGRP检测结果合并，不同年龄段成人血清ProGRP检测结果比较见表2。18～<70岁成人血清ProGRP参考区间的上限为57.4 pg/mL，而70～≤86岁人群血清ProGRP参考区间的上限是76.2 pg/mL。

表2 合并后不同年龄段成人血清ProGRP检测结果比较(pg/mL)

3 讨 论

ProGRP 对SCLC的诊断具有高灵敏度、特异度，因此建立ProGRP的参考区间有助于临床对SCLC的诊断和规范化治疗。血清ProGRP检测中，肾功能不全可引起ProGRP水平升高，某些肿瘤如结直肠癌、前列腺癌、髓样甲状腺癌等也可引起血清ProGRP水平升高。因此，从实验室信息系统中严格筛选健康体检人群时排除肾功能不全、呼吸系统疾病和各种良恶性肿瘤病史患者。

近年来，越来越多的研究探讨成人血清或血浆中ProGRP的参考区间[6-7]，但标本类型不同，检测方法不同，检测结果略有差异。首先，对于标本类型的选择，研究结果表明ProGRP检测结果不受血清或血浆标本类型的干扰[8]，但血清中ProGRP存在一定程度的降解，受保存条件(温度和时间)的影响较大[9]，而血浆中ProGRP检测结果更稳定，因此临床实验室中推荐采用血浆标本。但患者联合检测肺癌标志物时，常规采集血清标本，如果ProGRP检测采用血浆标本，必定增加患者标本采集量，因此研究者仍采用血清标本进行ProGRP检测，但要求血清标本分离后尽快检测。

另外，检测方法不同，血清或血浆中ProGRP参考区间不同[10]。YANG等[7]通过罗氏电化学方法发现成人21～<70岁血清ProGRP参考区间为≤53.92 ng/L，而70岁以上人群ProGRP参考区间为ProGRP≤75.69 ng/L。ZHANG等[11]通过雅培化学发光法发现18～<50岁人群血浆ProGRP参考区间为ProGRP≤57.26 ng/L或50岁及以上人群ProGRP≤81.42 ng/L。那么，罗氏电化学发光法与雅培化学发光法ProGRP检测结果有没有区别呢？KORSE等[12]通过欧洲和中国多中心研究表明血浆ProGRP检测结果罗氏与雅培之间具有很好的相关性(相关系数为0.96)，罗氏血清ProGRP参考区间为ProGRP≤66 ng/L，血浆(乙二胺四乙酸抗凝)ProGRP参考区间为ProGRP≤60 ng/L，而雅培血清ProGRP参考区间为ProGRP≤63 ng/L，血浆(乙二胺四乙酸抗凝)ProGRP参考区间为ProGRP≤65 ng/L。本研究采用雅培化学发光法检测的研究结果与ZHANG等[11]和 YANG等[7]研究结果基本一致。

尽管KORSE等[12]研究发现种族、年龄、性别和吸烟对ProGRP检测结果无影响，但其研究总人数仅1 010例；而其他多项研究表明血清ProGRP检测结果与年龄相关[13]，血清或血浆ProGRP检测结果随着年龄增加而升高。通过非参数相关分析发现血清ProGRP检测结果与年龄之间呈正相关(r=0.238，P<0.05)。通过Kruskal-Wallis检验发现不同年龄段成人血清ProGRP比较，差异有统计学意义(P<0.05)，其中70岁以下5个年龄段成人ProGRP水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)，与YANG等[7]的研究结果一致；ZHANG等[11]研究中以50岁为截点，50岁以上人群共计231例，这可能与不同年龄段人群例数有关，而本研究中50岁以上共计729例。

目前关于血清ProGRP用于诊断SCLC的临界参考值建立及诊断价值评估的研究很多[14-15]。沈迪等[14]研究发现，当截断值为57.8 ng/L时，血清ProGRP在诊断SCLC和健康对照者的曲线下面积为0.959(0.944～0.975)，灵敏度为86.4%，特异度为99.3%，本研究ProGRP参考区间上限与其相符。

4 结 论

本研究结果表明，成人18～<70岁血清ProGRP的参考区间为0～57.4 pg/mL、70～≤86岁人群血清ProGRP的参考区间为0～76.2 pg/mL。本研究中也存在一定的局限性，由于健康体检人群中老年人较少，且各年龄段男女比例不一致，这可能对结果产生影响，因此应加大70岁以上年龄段标本量，另外要注意各年龄段的性别比，这些局限性应在以后的研究中进一步阐明。