超高效液相色谱-串联质谱法检测鸡蛋中8种喹诺酮类药物残留研究

曹骞 代立勤 张晓伟 于宏杰 郭辉

摘要    本文建立了鸡蛋中8种喹诺酮类药物残留检测方法。样品经过1%乙酸乙腈提取、C18柱净化，经超高效液相色譜-串联质谱检测分析，优化了质谱的分离参数。结果表明，8种喹诺酮类药物在1.0～100.0 μg/L范围内线性满足要求，相关系数r均大于0.995，定量限为1.0 μg/kg。该方法简单、灵敏度高、稳定性好，能够满足鸡蛋中喹诺酮类药物残留检测要求。

关键词    喹诺酮类药物;鸡蛋;超高效液相色谱-串联质谱法

中图分类号    S859.84        文献标识码    A

文章编号   1007-5739（2019）22-0183-02                                                                                     开放科学（资源服务）标识码（OSID）

喹诺酮类药物是一类人工合成的抗菌药，因具有高效谱广、价格低廉和无交叉耐药性等优点而被广泛用于动物疾病治疗、预防及促生长方面[1]。此类药物在体内消除缓慢，在家禽饲养过程中该类药物不合理使用会导致其残留在动物源食品中，从而危害人类健康[2]。

2002年，我国农业部第235公告中对动物性食品中兽药最高残留限量进行了要求，其中对喹诺酮药物在动物性食品中残留限量进行了明确，2015年农业部第2292号公告决定在食品动物中停止使用洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星和诺氟沙星等4种兽药。虽然我国对家禽养殖环节喹诺酮药物的使用和禁用有明确规定，但从历年监测数据可以看出，鸡蛋及鸡肉中喹诺酮类药物残留问题仍然比较突出，同时随着对喹诺酮类药物禁用药物范围的扩大，新型喹诺酮药物用于动物生产的风险也越来越大。目前鸡蛋喹诺酮类药物残留检测文献较多[1-4]，本文旨在建立用高效液相色谱-串联质谱法同时检测鸡蛋中8种喹诺酮类药物的多残留检测方法，以期为在鸡蛋中开展喹诺酮类药物的多残留检测提供参考。

1    材料与方法

1.1    试验材料

供试仪器有Waters ACQUITY UPLC H-Class Xevo TQD超高效液相色谱-三重四级杆质谱联用仪（美国Waters公司）、高速冷冻离心机（湖南湘仪公司）、涡旋混合器（德国IKA公司）、氮吹仪（上海安谱公司）、百分之一电子天平（德国赛多利斯公司）。

供试试剂有乙腈、甲醇、正己烷、甲酸，均为HPLC级，由上海安谱公司生产;实验用水为屈臣氏蒸馏水;C18固相萃取柱（60 mg/3 mL），购自上海安谱公司;恩诺沙星、诺氟沙星、培氟沙星、环丙沙星、氧氟沙星、沙拉沙星、洛美沙星、达氟沙星8种氟喹诺酮类药物，均购自农业部环境保护科研监测所，浓度为100 μg/mL。

1.2    标准溶液配制

1.2.1    单独标准品储备液。分别吸取8种喹诺酮类药物标准物质（100 μg/mL）0.1 mL于10 mL容量瓶，以甲醇定容至10 mL，得1 μg/mL单独准品储备液，置于0～5 ℃冰箱中保存[5]。

1.2.2    混合标准品储备液。分别吸取8种喹诺酮类药物标准物质（100 μg/mL）0.1 mL于同一10 mL容量瓶，以甲醇定容至10 mL，得1 μg/mL混合标准品储备液，置于0～5 ℃冰箱中保存。

1.2.3    混合标准品工作液。准确移取适量混合标准品储备液用0.1%甲酸乙腈/水（3/7，体积比）溶液配置成目标药物浓度为1、2、5、10、20、50、100、200 μg/L，同位素内标浓度均为20 μg/L的混合标准系列溶液。

1.3    试剂配制

1.3.1    5.0 mol/L氢氧化钠溶液。称取10 g氢氧化钠，溶解于50 mL水中。

1.3.2    1%乙酸乙腈溶液。取5 mL乙酸，用乙腈稀释至500 mL。

1.3.3    0.1 mol/L磷酸盐缓冲溶液。称取6.8 g磷酸二氢钾，用水溶解，定容至500 mL，用5.0 mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至7.0±0.05。

1.3.4    0.1%甲酸乙腈/水溶液。取0.5 mL甲酸，用乙腈/水（3/7，体积比）稀释至500 mL。

1.4    试验方法

1.4.1    提取。准确称取2.0 g（精确至0.01 g）均质的鸡蛋样品于50 mL离心管中，加入5 mL 1%乙酸乙腈，涡旋提取2 min，10 000 r/min离心5 min（建议温度设为4 ℃），上清液转入另一50 mL离心管中。重复提取1次，离心后合并上清液，加入10 mL正己烷，涡旋混合1 min，10 000 r/min离心1 min（建议温度设为4 ℃），移去正己烷，将乙腈层转入于氮吹管中，40 ℃水浴氮吹至近干，用3 mL磷酸盐缓冲液溶解残渣，待净化。

1.4.2    净化。C18固相萃取柱（100 mg/3 mL），分别用2 mL乙腈、2 mL磷酸盐缓冲液活化和平衡，将待净化的溶液以自然滴液速度过柱，用2 mL水淋洗，真空抽干。用1 mL 0.1%甲酸乙腈/水（3/7，体积比）溶液洗脱，真空抽干，收集洗脱液，过0.22 μm滤膜后上机测定[6]。

1.5    LC-MS/MS条件

1.5.1    色谱条件。色谱柱：Waters ACQURRY UPLC BEHC18（2.1 mm×50 mm，1.7 μm），柱温：40 ℃;样品室温度：20 ℃;进样量：5 μL;流速：0.4 mL/min;流动相A：0.1%甲酸水溶液;B：乙腈溶液。梯度洗脱条件：0～0.5 min，维持95% A、5% B;0.5～4.0 min，95% A线性变化至5%，5% B线性变化至95%;4.1 min线性变化至95% A、5% B，4.1～6.0 min维持95% A、5% B。

1.5.2    质谱条件。电喷雾电压为3.00 kV，离子源温度为120 ℃，色谱柱温度为40 ℃，洗脱溶剂温度为450 ℃，气体流量（N2）为1 000 L/h，锥孔气流量（N2）为50 L/h。

2    结果与分析

2.1    质谱条件优化

分别将8种喹诺酮类化合物的单独标准品儲备液配制成0.5 μg/mL浓度的标准溶液，以5 μL/min的流速注入质谱仪，在正离子模式下进行扫描，确定目标化合物的分子离子、定性及定量离子并优化质谱的各项参数。8种化合物质谱参数优化结果见表1。

2.2    线性范围和检出限

分别将8种喹诺酮类化合物配制成1、2、5、10、20、50、100 μg/L溶液，各类化合物的检出限为0.3 μg/kg，定量限为1.0 μg/kg，线性范围为1～100 μg/L，对应化合物的线性方程、相关系数见表2。

2.3    加标回收率

在空白鸡蛋样品中添加20 ng/mL 8种喹诺酮类药物进行回收试验，结果见表3，从中可以看出8种药物的平均回收率范围为83.0%～108.5%。

3    结论与讨论

本文建立了鸡蛋中恩诺沙星、诺氟沙星、培氟沙星、环丙沙星、氧氟沙星、沙拉沙星、洛美沙星、丹诺沙星8种氟喹诺酮类药物同时检测分析的LC-MS/MS分析方法。该方法简单、灵敏度高、稳定性好，能够满足鸡蛋中喹诺酮类药物残留检测要求，可为鸡蛋中多种喹诺酮类药物的同时检测提供参考。

4    参考文献

[1] 杨盛茹，张恒业，张煌，等.UPLC-MS/MS 检测鸡蛋中22中喹诺酮类药物残留方法的研究[J].现代食品科技，2017，133（8）：262-268.

[2] 杨朝琳，黄方取，洪华嫦，等.液相色谱-质谱联用法检测鸡蛋中8种氟喹诺酮类药物残留[J].浙江师范大学学报（自然科学版），2016，39（1）：53-59.

[3] 刘媛，谢孟峡，丁岚，等.高效液相色谱同时测定鸡蛋中 4 种氟喹诺酮类药物残留[J].分析化学，2004，35（3）：352-355.

[4] 彭涛，雍炜，安娟，等.反相高效液相色谱/质谱法同时测定鸡肉中5种喹诺酮药物残留[J].分析化学，2006，34（9）：10-14.

[5] 廖艳华，周劭桓，林文斯，等.超高效液相色谱-串联质谱法测定鸡蛋中11种喹诺酮类抗生素残留的样品前处理方法优化[J].中国卫生检验杂志，2018，28（8）：910-914.

[6] 秦丽娟.离子对-HPLC测定牛奶和鸡肉中氟喹诺酮药物残留[D].保定：河北大学，2011.