猪PRRSV肺脏病变程度与病毒含量相关性初探

王文佳，李存法，王瑞宁，连瑞丽，安玉甫

(1.河南牧业经济学院 制药工程学院，河南 郑州450046；2.杭州惠通生物技术有限公司，浙江 杭州 310006)

猪繁殖与呼吸综合征 (porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)，是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的，以妊娠母猪晚期流产、早产、死产和产弱仔数量增加，及新生仔猪与肥育猪严重呼吸障碍为主要特征，发病猪多呼吸困难，或腹式呼吸[1]。PRRSV侵入猪体内后，首先侵袭肺泡巨噬细胞和肺内皮巨噬细胞[2]，在细胞内大量繁殖，最终导致巨噬细胞的崩解，产生炎症，造成肺部组织肉样化病变。目前对PRRS的诊断主要有临床症状检查、血清学诊断、分子生物学诊断及病理学诊断等多种方法[3]。对PRRSV的研究也主要集中在病毒基因组、流行病学调查及病毒遗传变异演化方面[4]。而PRRSV的病毒含量对肺脏组织的损害程度是否呈现一定的相关性，研究较少。本实验采集4头疑似感染PRRSV猪的肺脏组织，利用临床剖检、荧光定量RT-PCR、病理切片等方法，探究肺脏病变、显微病变与PRRSV病毒含量的相关性。

1 材料与方法

1.1 材料

通过猪场巡栏、猪只解剖，采集4只猪的肺脏病料送至杭州惠通猪医院进行检测，猪只信息及肺脏组织临床病变见表1、图1。

1.2 方法

利用荧光定量RT-PCR方法检测猪PRRSV的ORF5(M)基因，同时制作肺脏组织病理切片进行显微观察。

表1 样本基本信息

图1 猪肺部组织剖检情况

2 结果

2.1 剖检结果

剖检猪肺脏，案例一猪只肺脏组织大体无病变，案例二肺脏轻微病变，案例三肺脏中度病变，案例四肺脏严重间质性病变。

2.2 荧光定量RT-PCR结果

案例一、二、三、四荧光定量RT-PCR结果见表2，图2。

表2 ORF5(M)基因的循环数及拷贝数

注：M为阳性对照；1、2、3分别为同一组织不同采样点样品

图2 ORF5(M)基因荧光定量RT-PCR峰图

2.3 病理切片检查

显微镜下观察肺脏组织病理切片，结果见表3、图3。

表3 肺脏病理学切片检查结果

图3 肺脏病理切片

3 讨论

PRRSV入侵猪只后，常会引起猪只肺脏组织病变，临床表现为猪只呼吸困难，伴有腹式呼吸。PRRSV的病毒含量与肺脏病变程度的高低是否呈现一定的相关性，犹未可知。本研究中案例二和案例四PRRSV病毒的Ct值相近，但肉眼与显微镜下观察到后者的肺脏病变程度更为严重，其肺泡内有大量嗜酸性坏死团块，并伴有纤维素性渗出，相较之下，案例二的剖检病变和显微病变都较轻。较之于案例二和案例四，案例一病毒的Ct值较高，其相应的PRRSV的病毒含量较低，肉眼观察未见明显肺脏损伤，显微检查显示肺脏正常。这种PCR阳性但无明显病理学变化的情况，很有可能是猪只还在受母源抗体保护，并未表现症状；或者PCR检测出的是疫苗毒株，猪只并未真正受到PRRSV的侵袭。肺组织切片显示，案例三猪只呈中度间质性肺炎特征，但并未检测到PRRSV的ORF5基因，PCR呈阴性，可能是PRRS的病毒血症已经结束，也不排除有其他病原导致肺脏出现类似病变。

本试验结果表明，PRRSV的病毒含量与肺脏病变程度并无一定相关性，但显微病变与剖检病变的契合度较高。在PRRS及其它疾病的临床诊断中，应配合使用多种诊断方法，以防误诊，给后续的治疗和预防工作带来麻烦。