组蛋白乙酰转移酶hMOF和p53蛋白在非小细胞肺癌患者中的表达及临床意义

韩丽丽，韩性运

1周口市中心医院呼吸内科，河南 周口 466000

2周口职业技术学院附属医院内科，河南 周口 466000

非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）是临床常见的一种恶性肿瘤，严重威胁着患者的生命健康，导致患者的生活质量明显下降[1-2]。在揭示NSCLC发病机制的过程中可以发现，肿瘤调控相关因子的改变能够通过影响肺上皮细胞的生物学特征，导致细胞增殖、分化及浸润过程异常，进而促进恶性肿瘤的发生[3]。组蛋白乙酰转移酶hMOF能够通过参与上皮细胞的分化、DNA损伤性修复或癌基因的突变诱导过程，增加上皮细胞恶性病变的风险[4]；p53是一种重要的抑癌基因，能够通过诱导肿瘤细胞凋亡相关蛋白的激活，抑制肿瘤细胞的持续性增殖，促进肿瘤细胞凋亡[5-6]。一项关于p53蛋白与生殖系统恶性肿瘤关系的研究发现，p53蛋白表达水平升高与晚期卵巢浆液性腺癌患者的临床分期密切相关[7]。目前，关于hMOF、p53蛋白表达与NSCLC关系的研究尚少。本研究对hMOF、p53蛋白在NSCLC患者中的表达情况进行分析，并对其与NSCLC患者临床特征的关系进行探讨，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2015年1月至2018年1月周口市中心医院收治的NSCLC患者。纳入标准：①经病理组织学检查确诊为NSCLC；②手术前未行放化疗等抗肿瘤治疗；③病历资料及手术标本保存完整。排除标准：①合并其他系统恶性肿瘤；②合并肝肾功能障碍、免疫系统疾病、血液系统疾病等其他严重疾病。根据纳入和排除标准，本研究共纳入NSCLC患者89例作为NSCLC组，并收集患者的NSCLC组织标本。另外，选取同期于周口市中心医院行手术切除的肺良性病变患者47例作为对照组，所有患者均经病理组织学确诊，且均未合并肝肾功能障碍、免疫系统疾病、血液系统疾病等其他严重疾病；其中肺大疱14例，肺结核12例，炎性假瘤15例，支气管扩张6例，收集肺良性病变患者的肺良性病变组织标本。NSCLC组和对照组患者的性别、年龄、体重指数比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）（表1），具有可比性。

表1 两组患者的基本临床特征

1.2 免疫组织化学法检测hMOF和p53蛋白表达

采用免疫组织化学法对NSCLC组织和肺良性病变组织中hMOF和p53蛋白的表达情况进行检测。石蜡包埋组织，行连续性切片，厚度为3 μm，60℃烤片60 min，常规脱水后，采用乙二胺四乙酸（ethylenediamine tetraacetic acid，EDTA）进行抗原修复，加入 10 μl蒸馏水，加入 10%过氧化氢 5 μl，室温下孵育30 min，磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline，PBS）洗涤3次，每次3 min，加 入hMOF、p53单克隆抗体（1∶1000，购自罗氏公司），37℃孵育60 min，PBS洗涤3次，每次3 min，加入辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）标记的hMOF、p53二抗（1∶2000，购自罗氏公司），37 ℃孵育20 min，PBS洗涤3次，每次3 min，加入二氨基联苯胺（diaminobenzidine，DAB）后，PBS冲洗和复染，脱水后在显微镜下进行观察。

1.3 免疫组织化学法检测结果判定

hMOF、p53蛋白定位于细胞核，呈黄色颗粒状；随机选取5个高倍镜视野，每个视野计数100个细胞，总计500个细胞，采用半定量积分法对染色强度和阳性细胞比例进行评分。染色强度评分：无着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；阳性细胞比例评分：＜10%为1分，11%～30%为2分，31%～50%为3分，≥51%为4分。最终得分为染色强度和阳性细胞比例得分之积，分数≥4分为阳性表达。

1.4 统计学分析

采用SPSS 19.0统计软件进行数据分析。符合正态分布的计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验；计数资料以例数和率（%）表示，组间比较采用χ2检验；采用多元Logistic回归分析法对影响NSCLC患者NSCLC组织中hMOF、p53蛋白表达的因素进行分析；相关性分析采用Spearman秩相关分析法。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 hMOF、p53蛋白表达水平的比较

hMOF、p53蛋白均定位于细胞核，呈黄色颗粒状。NSCLC组织中hMOF、p53蛋白的阳性表达率分别为58.4%（52/89）和61.8%（55/89），均高于肺良性病变组织的14.9%（7/47）和12.8%（6/47），差异均有统计学意义（χ2=23.732、29.894，P＜0.05）。（图1）

图1 NSCLC 组织和肺良性病变组织中hMOF和p53蛋白的表达情况（免疫组化染色，×400）

2.2 hMOF、p53蛋白表达与NSCLC患者临床特征的关系

TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期、分化程度为中低分化NSCLC患者NSCLC组织中hMOF蛋白的阳性表达率分别高于TNM分期为Ⅰ～Ⅱ期、分化程度为高分化的患者，差异均有统计学意义（χ2=14.634、17.311，P＜0.05）；TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期、分化程度为中低分化、有淋巴结转移NSCLC患者NSCLC组织中p53蛋白的阳性表达率分别高于TNM分期为Ⅰ～Ⅱ期、分化程度为高分化、无淋巴结转移的患者，差异均有统计学意义（χ2=21.515、18.495、11.855，P＜0.05）。（表2）

表2 不同临床特征NSCLC患者NSCLC组织中hMOF、p53蛋白的表达情况（n=89）

2.3 NSCLC患者NSCLC组织中hMOF、p53蛋白表达影响因素的多因素分析

多元Logistic回归分析结果显示：TNM分期、分化程度均为NSCLC患者NSCLC组织中hMOF蛋白表达的独立影响因素（OR=2.67、2.39，P＜0.01）；TNM分期、分化程度、淋巴结转移均为NSCLC患者NSCLC组织中p53蛋白表达的独立影响因素（OR=2.41、2.49、2.63，P＜0.01）。（表3、表4）

表3 89例NSCLC患者NSCLC组织中hMOF蛋白表达影响因素的多因素分析

表4 89例NSCLC患者NSCLC组织中p53蛋白表达影响因素的多因素分析

2.4 NSCLC组织中hMOF和p53蛋白表达的相关性分析

NSCLC组织中hMOF和p53蛋白的表达呈正相关（rs=0.838，P＜0.05）。（表5）

表5 NSCLC组织中hMOF和p53蛋白表达的相关性

3 讨论

遗传易感因素、长期吸烟等均能够促进肺泡上皮细胞的持续性病变，增加NSCLC的发生风险。在合并有呼吸系统恶性肿瘤家族史的人群中，NSCLC的发病率可进一步上升[8]。NSCLC患者临床预后较差，其中位生存时间不足34个月，采用综合性措施治疗后，NSCLC患者的病死率仍超过35%[9-11]。免疫靶向治疗能够在肺癌患者的辅助治疗过程中发挥重要作用，而本研究对NSCLC患者NSCLC组织中hMOF、p53蛋白的表达情况进行探讨，不仅能够为深入揭示NSCLC的发病机制提供参考，同时还能够为NSCLC患者免疫靶向治疗的靶点选择提供参考。

hMOF为组蛋白乙酰转移酶家族成员，其能够通过激活上皮细胞内的不同信号通路，促进肿瘤细胞的异常增殖和分化，进而导致上皮来源恶性肿瘤的发生。hMOF蛋白可以通过乙酰化修饰肿瘤细胞的DNA，提高癌基因上游转录因子的活性，进而增加癌基因的扩增风险。hMOF蛋白表达水平升高时，能够通过诱导癌基因突变，降低癌基因的错配修复能力，促进恶性肿瘤的病情进展。p53是抑癌基因家族成员，能够判断DNA的变异程度。当DNA变异较小时，p53可以促进细胞的自我修复；但当DNA变异较大时，p53则会诱导细胞凋亡[12]。姜爱英等[13]对hMOF、p53蛋白在NSCLC患者中的表达情况进行研究，结果发现hMOF、p53蛋白表达水平升高与NSCLC的发生过程密切相关，但缺乏对hMOF、p53蛋白表达与NSCLC患者临床特征关系的研究。

本研究通过免疫组织化学法检测了hMOF、p53蛋白在NSCLC患者NSCLC组织中的表达情况，并探讨了hMOF、p53蛋白表达与NSCLC患者临床特征的关系，结果显示NSCLC组织中hMOF、p53蛋白的阳性表达率均高于肺良性病变组织，差异均有统计学意义（P＜0.05），提示hMOF、p53蛋白的表达水平升高均能影响NSCLC的发生过程，究其原因可能与hMOF、p53蛋白的下述几个方面的作用有关[14-16]：①hMOF表达水平升高会导致组蛋白酶的修饰异常，过度的乙酰化修饰能够提高上游启动子在肿瘤细胞中的活性，提高肿瘤细胞的扩增速度；②p53蛋白具有抑癌作用，但在NSCLC患者中p53蛋白的表达水平升高，这主要由于肿瘤细胞的过度增殖，能够反馈性诱导p53蛋白的释放，从而参与到肿瘤细胞的增殖调控过程。郁俊[17]研究表明，NSCLC患者NSCLC组织中，p53蛋白的阳性表达率可平均上升40%以上，特别是在合并有远处转移或肿瘤病情进展较为明显的患者中，p53蛋白的表达水平升高更为明显。在探讨hMOF、p53蛋白表达与NSCLC患者临床特征的关系中发现，TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期、分化程度为中低分化NSCLC患者NSCLC组织中hMOF、p53蛋白的阳性表达率均分别高于TNM分期为Ⅰ～Ⅱ期、分化程度为高分化的患者，有淋巴结转移NSCLC患者NSCLC组织中p53蛋白的阳性表达率高于无淋巴结转移的患者，差异均有统计学意义（P＜0.05），提示hMOF、p53蛋白表达水平均与NSCLC患者的病情进展有关，究其原因可能为hMOF、p53蛋白的表达水平升高能够影响肺泡上皮细胞分化成熟，从而导致肿瘤细胞低分化的发生；而hMOF和p53蛋白可使肿瘤细胞的浸润及侵袭能力发生改变，从而促进肺癌患者临床分期的进展。多因素分析结果显示，TNM分期、分化程度均为NSCLC患者NSCLC组织中hMOF蛋白表达的独立影响因素（P＜0.05），而TNM分期、分化程度、淋巴结转移均为NSCLC患者NSCLC组织中p53蛋白表达的独立影响因素（P＜0.05），提示不同临床病理因素可能对hMOF、p53的表达水平产生影响，而这主要由于相关临床病理特征的进展能够促进肿瘤细胞内肿瘤信号通路的激活，最终导致hMOF、p53的异常表达。本研究结果还显示，NSCLC组织中hMOF和p53蛋白的表达呈正相关，提示两者在NSCLC的发生、发展过程中可能发挥了一定的协同作用，但具体作用机制尚未明确。

综上所述，NSCLC患者NSCLC组织中hMOF、p53蛋白表达水平均明显升高，且hMOF、p53蛋白的表达水平均与NSCLC患者的临床分期及肿瘤细胞分化程度有关。