原发性肝癌患者血清微囊藻毒素水平与TNM分期的关联及对患者预后的影响

汪富涛，徐 冰，张典朋，成 勇

原发性肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是最常见的消化系统恶性肿瘤之一[1-3]，且我国是一个肝癌大国[4-6]，肝癌位居我国男性恶性肿瘤死亡率第二位，女性恶性肿瘤死亡率第三位[7-9]。乙肝病毒（hepatitis B virus，HBV）感染和黄曲霉毒素（Aflatoxin）暴露是肝癌的两大危险因素[10-11]，但是尚不足以完全解释肝癌的全部病因。今年来研究显示，微囊藻毒素（microcystic，MC）暴露可能是肝癌发病的另一项重要病因[11-12]。微囊藻毒素是富营养化水体中蓝藻所释放的一类七肽环状藻类毒素，是一类强烈的肝致癌物质，其中微囊藻毒素-LR（MC-LR）是较为常见且毒性最强的亚型[11]。本研究将就HCC患者血清MC-LR水平对HCC患者肿瘤分期和预后的影响做如下研究。

1 材料与方法

1.1 研究对象本研究所有临床样本均为2013年1月—2017年12月收集于安康市人民医院的HCC患者共计338例，患者平均年龄为（55.5±11.9）岁，其中男性94人，女性63人；课题组前期每3个月对所有患者进行一次电话随访。

1.2 血清MC-LR检测 本研究通过ELISA试剂盒（Beacon Analytical Systems Inc, 美国）对血清MC-LR水平进行检测。血清MC-LR水平按所检测中位数浓度分为高暴露组和低暴露组（＜0.69 ng/mL为低暴露组，≥0.69 ng/mL为高暴露组）。

1.3 统计分析采用χ2检验分析不同HCC患者临床特征及疾病进展中血清MC-LR水平的差异，采用K-M法绘制生存曲线，用log-rank检验不同组患者生存时间之间的差异。统计过程使用实验SPSS 19.0软件运行，所有检验均为双侧检验，α=0.05，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 HCC患者血清MC-LR水平 本课题通过ELISA方法检测结果显示，HCC患者血清MC-LR水平中位数为0.69 ng/mL（Q25=0.33 ng/mL，Q75=0.97 ng/mL）。

2.2 不同TNM分期HCC患者血清MC-LR水平对比TNM分期越晚的HCC患者，其血清MC-LR平均浓度显著升高（F=7.343，P＜0.001），通过两两之间比较得出，Ⅰ期与Ⅲ期（P=0.020），Ⅰ期与Ⅳ期（P＜0.001），Ⅱ期与Ⅳ期（P＜0.001），Ⅲ期与Ⅳ期（P=0.001）差异具有统计学意义，见表1。

2.3 HCC患者血清MC-LR水平与TNM分期之间的相关性经kendall' s tau 相关性检验分析发现，HCC患者血清MC-LR水平与TNM分期之间呈明显正相关（γ=0.274，P＜0.001），见表2。

表1 不同TNM分期HCC患者血清MC-LR平均浓度的比较

表2 HCC患者血清MC-LR水平与TNM分期之间的相关性

2.4 血清MC-LR水平与HCC患者临床特征之间的关系 通过分析血清MC-LR水平与HCC患者临床特征之间的关系可见，MC-LR水平与HCC患者的年龄（P=0.003），性别（P=0.007），饮酒（P=0.002），肿瘤临床分期（P＜0.001），淋巴结转移（P＜0.001），远端转移（P=0.002）及HBV感染（P=0.016）相关见表3。

2.5 血清MC-LR水平与HCC患者预后之间的关系 在血清MC-LR较高和较低水平的HCC患者具有相同手术率的前提下，通过进一步分析血清MC-LR水平与HCC患者预后之间的关系，发现血清MC-LR水平较高的HCC患者生存期明显较低表达患者生存期短（χ2=5.578，Plog rank=0.018），见图1。

3 讨论

我国作为一个HCC大国[13-14]，其发病率约占全世界的54%[11]。目前对于HCC致病因素的研究主要集中在HBV和AF，然而MC-LR作为HCC致病因素的研究已成为近年来的新热点，研究结论明确证实MC-LR和HCC具有关联性[11]，但是仍局限于样本量偏小等不足。本研究收集并分析了我院2013—2017年确诊HCC患者的血液标本，通过ELISA方法检测血液标本中MC-LR的含量并与患者临床特征及其预后进行关联分析，研究结果发现HCC患者血清中MC-LR含量与年龄、性别、饮酒、肿瘤临床分期、淋巴结转移、远端转移和HBV感染相关，这与先前的文献报道结果一致[15-16]。

表3 血清MC-LR水平与HCC患者临床特征之间的关系

图1 血清MC-LR水平与HCC患者预后之间的关系

MC是水体富营养化后蓝藻水华产生的次生代谢物，其具有强烈的肝脏毒性。目前MC-LR被归为2B级致癌物，将MC-LR释放后可入水，蓄积在动物体内，并沿食物链向高营养级转移，进而人群可通过饮食等途径暴露。MC毒性作用的靶器官主要是肝和肾，同位素示踪结果表明静脉注射、腹腔注射和口服进入小鼠体内的125I-MCLR，70%以上均分布在肝脏和肾脏。

本研究中发现，血清MC-LR含量与HCC患者年龄相关，可以推测MC-LR在人体中的作用存在类似于持久性有机污染物的生物累积效应[17]，年龄越大，接触暴露物质时间越久，危害愈大。本研究发现HCC患者血清MC-LR含量与性别及其饮酒相关，可考虑不同性别从事不同工种及生活习惯差异所造成的暴露差异[18]，但本研究因资料不全，未完全统计到纳入本研究的HCC患者的职业情况及生活习惯相关数据，尚不能证实此观点。本研究还发现HCC患者血清MC-LR含量与其临床分期、淋巴结转移和远端转移相关，与农清清等[12,19-21]的系列研究相符，其研究发现MC-LR能够促进肝细胞恶性转化，并促进细胞迁徙和转移。另，本研究还发现血清MC-LR含量与HBV相关，众所周知，HBV感染是造成肝癌的首要危险因素，本研究发现其与血清MC-LR含量相关，可推测MC-LR与HBV感染存在协同效应或相加效应，或可联合作用促进肝细胞恶性转化及癌变。

本研究通过大样本HCC患者血清标本检测发现HCC患者血清MC-LR含量与年龄，性别，饮酒，肿瘤临床分期，淋巴结转移，远端转移及HBV感染相关，但未能从分子水平验证上述结论，尚不明确其中的分子机制，是本研究的不足之处。