2018年海南省猪A 型塞尼卡病毒血清流行病学调查

2019-12-06王金秀李亚文谢国信周启转李布勇

中国动物检疫 2019年12期

代蕾，王金秀，方莉，章瑶，李亚文，谢国信，周启转，李布勇

（海南省动物疫病预防控制中心，海南海口 571100）

A 型塞尼卡病毒（Senecavirus，SVA）也称塞尼卡谷病毒（Seneca Valley virus，SVV），属于RNA 病毒科塞尼卡病毒属[1]，于2002年在美国被首次分离到。2007年，美国从加拿大进口的187头猪出现水疱病症状，发病率高达80%，最终确诊为SVA 感染[2]。2014年以来，全球多个国家确诊发生猪SVA 感染。2015年9月以来，美国中西部多个地区的猪群发生水泡性疫情，新生仔猪病死率达30%～70%，最终确诊为SVA 感染[3]。现已证实，猪SVA 感染能够引起原发性水泡病，导致猪鼻吻、蹄部冠状带的水泡病变，同时伴有跛行、厌食、嗜睡和发烧等临床表现[4-5]。2015年，我国广东省发现了由SVA 感染导致的猪水泡性疾病[6]。2017年我国福建省和河南省再次发生猪SVA 感染案列[5]。近两年，猪SVA 感染在全球多地出现，并已传入我国。为了解海南省猪群中的SVA 感染和分布情况，2018年采集海南省15个市（县）的猪血清样品，使用间接ELISA 方法进行SVA 抗体检测，以期为海南省的SVA 防控提供参考。

1 材料与方法

1.1 样品采集

2018年5—7月，从海南省15个市（县）中，随机选取112个规模场和散养户作为采样点，根据各场点实际存栏量，按照10%～50%的采样率，共采集2 547份猪血清样品，-20 ℃保存或4 ℃备用。

1.2 试剂

SVA 间接ELISA 抗体检测试剂盒，由中国农业科学院兰州兽医研究所提供。

1.3 主要仪器

离心机、微量加样器，购自德国Eppendorf公司；iMARK 型酶标仪、自动洗板机，购自美国BIO-RAD 公司。

1.4 检测方法

严格按照SVA 间接ELISA 抗体检测试剂盒说明书进行操作：统计样品数量，确定所需SVA 抗原包被ELISA 板（条）数量；阳性对照、阴性对照分别测量2孔，待测样品测1孔；在抗原包被ELISA 板中，加入50 μL 30倍稀释的待检血清，以及未稀释的阴、阳性对照血清各50 μL，充分振荡混匀，在37 ℃恒温箱孵育30 min；用PBST洗涤5次，加入50 μL 兔抗猪IgG-HRP 工作液，37 ℃恒温箱孵育30 min；再用PBST 洗涤5次，拍干；每孔加入50 μL TMB 液，37 ℃恒温箱孵育显色（12±1）min；每孔快速加入50 μL 终止液，用酶标仪测定450 nm 波长的吸光值（OD450）。

1.5 判断标准

OD450阴性对照平均值≤0.2，并且OD450阳性对照平均值-OD450阴性对照平均值≥0.9，则试验结果成立。根据公式S/P=（样品OD450-阴性对照OD450平均值）/（阳性对照OD450平均值-阴性对照OD450平均值），计算S/P值。当S/P＜0.4时，判定为阴性；S/P≥0.4时，判定为阳性。

2 结果与分析

2.1 总体情况

在15个市（县）112个采样场点中，检出阳性场点56个，场点阳性率为50.0%；在采集的2 547份猪血清样品中，检出抗体阳性278头份，样品阳性率为10.9%（表1）。总体来看，海南省猪群中的SVA 流行面较广。

2.2 区域分布

检测结果（表1）显示：海南省15个市（县）的SVA 抗体场点阳性率在14.3%～100%之间，其中场点阳性率小于20%的有4个市（县），超过50% 的有6个；SVA 抗体样品阳性率在1.0%～31.7%之间，其中小于10%的有9个市（县），而超过20%的有2个。从上述结果可以看出，海南省各市（县）的SVA 感染情况并不均衡，存在一定的区域差异。

表1 2018年海南省SVA 抗体检测结果

2.3 场群分布

2.3.1 不同养殖场点在检出的56个阳性场点中，共有规模化养殖场41个，场点阳性率为61.2%（41/67）；散养户15个，场点阳性率为33.3%（15/45）。在检出的278份阳性样品中，规模化养殖场阳性216份，样品阳性率为10.4%（216/2 068）；散养户阳性62份，样品阳性率为12.9%（62/479）。具体结果见表2。从上述结果可以看出，SVA 在规模场的感染面高于散养户。

2.3.2 不同养殖阶段从不同阶段猪群的SVA 抗体阳性率统计结果（表3）看，仔猪SVA 抗体阳性率最高（20.5%），其次是母猪（15.5%）、后备猪（13.5%）和公猪（10.7%），育肥猪最低（5.9%）。

表2 不同养殖场点SVA 血清学检测检测结果

表3 不同阶段猪群SVA 抗体检测结果

3 讨论

SVA 传播速度和范围在不断加大，2014年开始全球多个国家相继发生SVA 感染疫情[3]，2016年后疫情又陆续扩散至加拿大、美国、巴西、泰国和哥伦比亚等国家[7-8]。2015年我国广东省报道了SVA 感染导致的猪水泡性疾病[3]，2016—2017年又有一些省份从患病猪群中分离到SVA[9-10]。SVA在我国传播快速，现已确定传播到海南省。

本研究对海南省15个市（县）112个规模养殖场和散养户猪群采集血清进行SVA 抗体检测，发现场点阳性率为50.0%，样品阳性率为10.9%，说明SVA 不仅已扩散至海南省，并且在快速扩散流行，因此应注意加强监测和防控。调查发现，海南省不同市（县）的SVA 感染情况存在较大差异，两个交通枢纽城市（L 市和K 市）及其周边城市（F、G、N 市）阳性率较高，SVA 感染情况最为严重，说明人流、物流对SVA 的传播存在影响，因此应加强对猪群移动的检疫监管。从不同养殖阶段猪群的检测结果来看，规模化养殖场的场点阳性率高于散养户，但样品阳性率低于散养户。这其中可能与散养户采样数量偏少有关，因此应该考虑到样本偏倚造成的误差，真实情况及其原因需要进一步开展调查确认。

SVA 是一种新发病，猪对其易感。SVA 感染引起的仔猪病死率和感染率均很高，成年猪通常带毒而不表现临床症状，而亚临床感染的成年猪应该是猪群中危险的污染源。目前SVA 的传播方式尚不清楚，为了防控SVA 的进一步传播，一定要加强饲养管理，提高生物安全水平，并且做好SVA的主动监测和追索研究工作。目前SVA 还未大范围流行，因此在现有条件下如何有效控制SVA 进一步传播已经成为一个紧迫任务。