E6/E7 mRNA表达在阴道镜检查阴性女性宫颈上皮内瘤变随访评估中的价值分析

黄志伟

【摘要】 目的 分析E6/E7 mRNA表达在阴道镜检查阴性女性宫颈上皮内瘤变（CIN）随访评估中的价值。方法 选取行阴道镜检查阴性的1586例宫颈炎性疾病患者， 其中E6/E7 mRNA阳性886例， E6/E7 mRNA阴性700例， 均随访1年后， 比较E6/E7 mRNA阳性、阴性患者的高危型人乳头瘤病毒（HR-HPV）检出情况， CINⅡ+ 发生情况， 不同年龄段患者CINⅡ+ 发生情况。结果 随访1年后， 886例E6/E7 mRNA阳性患者中检出HR-HPV416例， 检出率为46.95%;700例E6/E7 mRNA阴性患者中检出HR-HPV50例， 检出率为7.14%;E6/E7 mRNA阳性患者的 HR-HPV检出率高于E6/E7 mRNA阴性患者， 差异具有统计学意义（P<0.05）。886例E6/E7 mRNA阳性患者发生CINⅡ+ 97例， 发生率为10.95%;700例E6/E7 mRNA阴性患者发生CINⅡ+ 15例， 发生率为2.14%;E6/E7 mRNA阳性患者的CINⅡ+ 发生率高于E6/E7 mRNA阴性患者， 差异具有统计学意义（P<0.05）。将E6/E7 mRNA阳性患者分为<40岁464例， ≥40岁 422例;E6/E7 mRNA阴性患者分为<40岁356例， ≥40岁344例。E6/E7 mRNA阳性患者中<40岁患者的CINⅡ+ 发生率为4.96%， ≥40岁患者发生率为17.54%， 比较差异具有统计学意义（P<0.05）。E6/E7 mRNA阴性患者中<40岁患者的CINⅡ+ 发生率为0， ≥40岁患者发生率为4.36%， 比较差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 E6/E7 mRNA表达对CINⅡ+ 发生具有较高的预测价值。

【关键词】 宫颈上皮内瘤变;E6/E7 mRNA;随访评估

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2019.30.023

随着阴道镜检查技术的应用， CIN的检出率明显提高， 但尚无预后评估的有效指标， 导致患者需要进行多次宫颈细胞学检查、HPV检测以及组织病理学检查， 不仅增加了患者的经济负担， 也增加了其心理压力[1]。研究发现[2]， HR-HPV E6/E7基因编码的致癌蛋白与CIN发生、发展密切相关， 宫颈癌、癌前病变患者E6/E7 mRNA表达明显升高， 且其表达与患者预后具有相关性。本文将分析E6/E7 mRNA表达在女性CIN随访评估中的价值， 现报告如下。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 选取2017年1月～2018年1月到本院进行阴道镜检查阴性的1586例宫颈炎性疾病患者， 年龄26～68岁， 平均年龄（44.58±11.92）岁， 存在HR-HPV感染， 既往无CIN病史、子宫全切术史、盆腔放射史等， 已排除妊娠期、哺乳期女性。其中， E6/E7 mRNA阳性886例， 阴性700例。

1. 2 方法

1. 2. 1 宫颈细胞学检查 在宫颈柱状上皮与鳞状上皮交接处旋转宫颈刷收集脱落细胞， 送实验室进行检验， 利用描述式诊断系统（TBS）诊断。

1. 2. 2 HPV-DNA检测 使用Hbri Max医用核酸分子快速杂交仪、美国PE公司PE5700基因扩增仪、HPV扩增分型检测试剂盒、基因芯片检测系统等， 根据导流杂交原理， 利用杂交仪及扩增分型试剂盒， 在基因芯片膜上進行基因分型快速检测， 包括13种高危亚型、5种低危亚型以及3种常见亚型。

1. 2. 3 E6/E7 mRNA检测 使用河南Kodia生物公司提供的Quanti Virus HPV E6/E7 mRNA试剂盒， 对上述高危HPV亚型进行检测。

1. 2. 4 病理学检查 随访1年后， 对患者再次进行HPV-DNA检测、液基薄层细胞（TCT）检测， 发现HR-HPV持续感染或非典型鳞状上皮细胞（ASCUS）以上， 进行阴道镜病理检查， 将其分为正常/炎症、CIN Ⅰ～Ⅲ级、宫颈癌等， 以CINⅡ+ 为研究终点[3]。

1. 3 观察指标 随访1年后， 比较E6/E7 mRNA阳性、阴性患者的HR-HPV检出情况， CINⅡ+ 发生情况， 不同年龄段患者CINⅡ+ 发生情况。

1. 4 统计学方法 采用SPSS21.0统计学软件对数据进行处理。计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验。P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2. 1 E6/E7 mRNA阳性、阴性患者的HR-HPV检出情况比较 随访1年后， 886例E6/E7 mRNA阳性患者中检出HR-HPV 416例， 检出率为46.95%;700例E6/E7 mRNA阴性患者中检出HR-HPV 50例， 检出率为7.14%;E6/E7 mRNA阳性患者的 HR-HPV检出率高于E6/E7 mRNA阴性患者， 差异具有统计学意义（χ2=298.68， P<0.05）。

2. 2 E6/E7 mRNA阳性、阴性患者的CINⅡ+ 发生情况比较随访1年后， 886例E6/E7 mRNA阳性患者发生CINⅡ+ 97例， 发生率为10.95%;700例E6/E7 mRNA阴性患者发生CINⅡ+ 15例， 发生率为2.14%;E6/E7 mRNA阳性患者的CINⅡ+ 发生率高于E6/E7 mRNA阴性患者， 差异具有统计学意义（χ2=46.20， P<0.05）。

2. 3 不同年龄段E6/E7 mRNA表达患者的CINⅡ+ 发生情况比较 将E6/E7 mRNA阳性患者分为<40岁464例， ≥40岁422例;E6/E7 mRNA阴性患者分为<40岁356例， ≥40岁344例。E6/E7 mRNA阳性患者中<40岁患者的CINⅡ+ 发生率为4.96%， ≥40岁患者发生率为17.54%， 比较差异具有统计学意义（χ2=35.87， P<0.05）。E6/E7 mRNA阴性患者中<40岁患者的CINⅡ+ 发生率为0， ≥40岁患者发生率为4.36%， 比较差异具有统计学意义（χ2=15.86， P<0.05）。见表1。

3 讨论

宫颈癌是危及女性生殖健康的常见恶性肿瘤， CIN是一种宫颈病变， 与宫颈浸润癌关系密切， 早期发现及治疗是预防宫颈癌发生的重要环节。2003年食品药品监督管理局（FDA）批准了在宫颈癌筛查中应用HPV DNA基因分型检测， 可提高CIN检出率， 减少宫颈癌发生[4]。自从HPV DNA检测开展以来， 越来越多的 CINⅠ可被检测出来， 但其中60%左右的患者可自然消退， 不需要接受治疗， 需要进行长期随访评估。宫颈TCT是一种常见的宫颈疾病检测技术， 具有较高的特异性， 对CINⅠ持续或进展均具有预测价值， 但敏感度较低， 且受检测医师诊断技术影响较大。HPV DNA基因分型检测是一种敏感度较高的病因检测方法， 但特异度不足， 无法判断HPV的致癌活性。两种检测方式均无法了解宫颈病变进展风险， 可能引起过度治疗， 尤其是<30岁的年轻女性， 承受了较大的心理及经济负担。因此， 迫切需要制定科学、合理、经济的随访方案， 尽量减轻患者的心理负担及经济负担。

研究发现[5]， HPV E6/E7基因与宫颈癌发生密切相关， 其一旦与宿主细胞DNA整合， 可出现HPV E6/E7过度表达， 产生癌蛋白， 诱发癌变。由于RNA模板水平可在一定程度上反映癌基因活性， 因此， 可通过检测E6/E7 mRNA表达评估HPV感染后进展情况。以往有研究显示， 61.9%的CINⅠ转阴患者均为HPV E6/E7 mRNA阳性、表达水平为583.5 copies/ml， 而进展患者或持续感染患者的HPV E6/E7 mRNA阳性率约为81.8%、表达水平约为3738.4 copies/ml， 比较差异具有统计学意义（P<0.05）。也有报道显示， HPV E6/E7 mRNA检测 CINⅠ持续感染或进展的敏感度为81.8%， 而TCT检测敏感度仅为50.0%， HPV E6/E7 mRNA检测具有明显优势。但HPV E6/E7 mRNA检测的特异度较低， 仅为38.1%， 而TCT检测的特异度为66.7%。有学者认为， HPV E6/E7 mRNA检测的最佳临界值为2724.0 copies/ml， 该时期可获得较高的特异度， 约为81.0%。对CINⅠ患者进行HPV E6/E7 mRNA检测降低了漏诊率， 并通过定量检测， 可降低其误诊率。有研究显示， HPV E6/E7 mRNA检测准确率与宫颈病变的严重程度有关， CINⅠ～Ⅲ患者检测阳性率分别为7.50%、94.74%、92.00%， 而炎症患者的检测阳性率为47.29%， 比较差异具有统计学意义（P<0.05）。80%的HPV感染患者均会在2年内自然消退， 从感染到发生癌变可能需要数年。作为毒癌基因转录产物， E6/E7 mRNA可反映癌基因活性， 因此， 与HPV DNA相比， 精准度及特异度更高， 因此， 用于CIN随访评估可减轻患者的心理负担。在本次研究中， 随访1年后， E6/E7 mRNA阳性患者中HR-HPV检出率明显高于阴性患者， CINⅡ+发生率高于阴性患者， 差异均具有统计学意义（P<0.05）;E6/E7 mRNA阳性患者中≥40岁患者的CINⅡ+ 发生率明显高于<40岁患者， 差异具有统计学意义（P<0.05）。表明E6/E7 mRNA表达阳性患者的HR-HPV检出率更高， CINⅡ+ 病变风险更高， 尤其是≥40岁女性， 应作为重点随访对象。应注意的是， E6/E7 mRNA阴性患者同样可发生CINⅡ+ ， 仍需要密切随访观察， 确保能够尽早发现并治疗。建议可适当减少随访次数， 延长随访时间。对E6/E7 mRNA表达水平高于2724.0 copies/ml的患者， CIN持续或进展可能性更大， 应采取更加积极的随访方案， 避免延误病情， 影响治疗效果[6-8]。

综上所述， E6/E7 mRNA表达对CINⅡ+ 发生具有较高的预测价值， 可应用于宫颈癌筛查， 避免过度检查及治疗。

参考文献

[1] 桂定清， 张力忆， 青友芬， 等. HPV E6/E7 mRNA检测对宫颈上皮内瘤变患者的预后价值. 空军医学杂志， 2018， 34（6）：408-411.

[2] 桂定清， 张力忆， 青友芬， 等. 高级别宫颈上皮内瘤变术后检测HPV E6/E7 mRNA的诊断价值. 临床误诊误治， 2018， 31（12）：58-61.

[3] 吴双， 朱月华. 高危型人乳头瘤病毒E6/E7 mRNA和DNA检测对2级以上宫颈上皮内瘤变诊断价值的Meta分析. 检验医学与临床， 2018， 15（22）：3371-3376.

[4] 朱远航. HPV E6/E7 mRNA检测对ASCUS患者宫颈高级别上皮内瘤变和宫颈癌的诊断价值. 郑州大学， 2018.

[5] 邵敏芳， 任琼珍. E6/E7 mRNA表达在阴道镜检查阴性女性宫颈上皮内瘤变随访评估中的价值分析. 中国医疗设备， 2017， 32（S1）：62.

[6] 李满元， 刘文， 王宝， 等. HPV E6/E7 mRNA检测在年轻女性宫颈癌筛查及宫颈疾病诊治中的应用价值. 贵州医药， 2019， 43（1）：124-126.

[7] 陈飞， 任琛琛， 楊立， 等. HPV E6/E7 mRNA、p16/Ki67检测在ASCUS中的诊断价值. 现代妇产科进展， 2019， 28（1）：54-57.

[8] 岳晚侠， 吴利侠， 蒙树勇. 人乳头瘤病毒E6/E7 mRNA检测在年轻女性宫颈癌筛查及宫颈疾病诊治中的应用研究. 临床和实验医学杂志， 2019， 18（1）：66-68.

[收稿日期：2019-03-14]