水果酵素醋辅助降尿酸功能的实验研究

陈秀丽，李永康，李沛波，彭维，苏薇薇

(中山大学生命科学学院，广东省中药上市后质量与药效再评价工程技术研究中心，广东 广州 510275)

尿酸(uric acid,UA)是人体内嘌呤经代谢后的最终产物[1]，80%尿酸是在体内合成，或由次黄嘌呤、黄嘌呤在黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XOD)的作用下分解代谢产生，20%尿酸由摄入食物中的核蛋白或嘌呤分解代谢产生[2-4]，主要经由肾脏排泄[5-6]。体内的尿酸代谢障碍包括尿酸的生成和排泄紊乱均会使血清中的尿酸含量升高，引发高尿酸血症[7-8]。近年来随着人们生活水平的提高，高尿酸血症的发病率逐年上升，2018年我国痛风的患病率约3%，高尿酸血症的患病率男性约16.4%，女性约8.1%[9]。研制能抑制尿酸形成，加快尿酸代谢且不造成肾损伤，口味好的安全、有效、经济的健康产品对高尿酸血症的预防和治疗有着重要的意义。

酵素又叫酶，是生物体内细胞产生的—种生物催化剂，能有效促进生物体的新陈代谢[10-12]。微生物酵素是以新鲜蔬菜、水果为原料，经益生菌发酵而形成的微生物制剂，具有独特的生物活性和良好医疗保健功能[13]。研究表明微生物酵素中多种活性物质能活化肝细胞，促进肝细胞再生，有效预防改善脂肪肝[14-16]。

本研究所用的水果酵素醋是一种以玫瑰茄与桃金娘为主要原料，经自然发酵及调配后制成的酵素饮料，口感芳香，酸甜爽口。玫瑰茄(HibiscusSabdariffaL.)，又称洛神花、美丽纳等，为药食两用植物，在我国东南沿海地区均有大面积栽培，含有丰富的有机酸、维生素C、类黄酮类等营养物质，具有降血糖、降血脂、改善消化系统等作用[17-22]。研究发现，玫瑰茄可以促进尿酸排泄[23]。桃金娘(Rhodomyrtustomentosa)，别名山稔、岗稔等，为桃金娘科桃金娘属，分布在我国广东、广西、湖南、云南、贵州、福建、台湾等地[24]。桃金娘全株皆可入药，其成熟果实颜色呈紫红色、多籽，富含有机酸、黄酮类、酚类等营养物质[25]；具有清热解毒、通经活血止血、利湿止泻等功效[26]。目前，该种类水果酵素醋在降尿酸功能方面的研究尚无文献报道，本研究选其进行降尿酸动物实验研究，为评价其辅助降尿酸功能提供了依据，对其开发利用具有积极意义。

1 材料与仪器

1.1 实验动物 SPF级昆明种小鼠，体重约18～22 g，由广东省医学实验动物中心提供，许可证号：SCXK(粤)2018-0002。实验动物饲养于中山大学南校区时珍堂，动物使用许可证号为SYXK(粤)2014-0020，温度为(24±2)℃。

1.2 药物与试剂 水果酵素醋(池露牌)；苯溴马隆(德国赫曼大药厂，批号：1708594)；氧嗪酸钾盐(Aladdin公司，批号：K1829158)；UA测试盒(南京建成生物工程有限公司，批号：20190111)；肌酐(Cr)测试盒(南京建成生物工程有限公司，批号20190215)；尿素氮(BUN)测试盒(南京建成生物工程有限公司，批号：20190122)；XOD测试盒(南京建成生物工程有限公司，批号：20190115)；腺苷脱氨酶(ADA)测试盒(南京建成生物工程有限公司，批号：20190215)。

1.3 主要仪器 电热恒温水浴锅(HWS24型，上海一恒科学仪器有限公司)；离心机(L400，湖南湘仪离心机仪器有限公司)；Epoch多孔超微量核酸蛋白分析仪(BioTek公司)；紫外分光光度仪(Agilent公司)。

2 实验方法

2.1 动物分组、造模和给药 取60只小鼠，随机分为正常对照组、模型对照组、苯溴马隆组(10 mg·kg-1)及水果酵素醋低(玫瑰茄5.97 g生药/kg+桃金娘3.62 g生药/kg)、中(玫瑰茄11.93 g生药/kg+桃金娘7.23 g生药/kg)、高剂量(玫瑰茄23.86 g生药/kg+桃金娘14.46 g生药/kg)组，每组10只。实验前适应环境1周，常规分笼饲养。除正常对照组外，其余各组每天按250 mg·kg-1的剂量腹腔注射尿酸氧化酶抑制剂氧嗪酸钾，连续8 d，以构建高尿酸血症模型。每次造模后2 h，正常对照组和模型对照组给予等体积生理盐水，其余各组按相应剂量灌胃给药。灌胃给药容积均为10 mL·kg-1。末次给药2 h后，摘眼球采血，分离血清。

2.2 指标检测 取小鼠血清，按试剂盒说明测定UA、BUN及Cr含量，以及XOD、ADA活性。

3 实验结果

3.1 水果酵素醋对尿酸含量的影响 由表1可见，与正常对照组比较，模型对照组的尿酸含量显著升高(P<0.05)，说明本造模方法能成功造成小鼠高尿酸血症模型；与模型对照组相比，水果酵素醋低、中、高剂量组的血尿酸含量显著降低(P<0.05)，说明低、中、高剂量的水果酵素醋能显著降低血清中的尿酸含量。

3.2 水果酵素醋对黄嘌呤氧化酶和腺苷脱氨酶的影响 从表2可见，与正常对照组相比，模型对照组的XOD和ADA活性明显上调(P<0.01)，表明氧嗪酸钾可以提高小鼠XOD和ADA的活性；与模型对照组相比，水果酵素醋低、中、高剂量组和苯溴马隆组显著降低高尿酸血症小鼠的XOD和ADA活性(P<0.01)。

表1 水果酵素醋对小鼠血清尿酸含量的影响

注：与正常对照组比较，*P<0.05；与模型对照组比较，#P<0.05

表2 水果酵素醋对黄嘌呤氧化酶和腺苷脱氨酶的影响

注：与正常对照组比较，**P<0.01；与模型对照组比较，##P<0.01

3.3 水果酵素醋对血清肌酐和尿素氮含量的影响 由表3可见，与正常对照组比较，模型对照组、水果酵素醋给药组及苯溴马隆组的血清肌酐和尿素氮水平均无明显变化(P>0.05)。

表3 水果酵素醋对血清肌酐的影响

4 讨论

氧嗪酸钾是一种尿酸氧化酶抑制剂，可以抑制体内尿酸的分解以提高血清尿酸浓度，给小鼠腹腔注射氧嗪酸钾溶液是常见的高尿酸血症造模方法之一[27-29]。本实验研究结果表明，腹腔注射氧嗪酸钾能使小鼠血清尿酸水平显著升高，表明高尿酸血症模型构建成功；低、中、高剂量的水果酵素醋能显著降低小鼠血清尿酸含量，具有显著的降尿酸效应。

黄嘌呤氧化酶是嘌呤核苷代谢途径的限速酶，是调控尿酸生成的最终环节，在高尿酸血症的发病中占主导地位[30]。XOD可以连续氧化黄嘌呤和次黄嘌呤生成尿酸，直接调控尿酸的转变，其活性增强可加速尿酸生成[31-33]。ADA可催化腺苷生成肌酐，然后肌酐经核苷磷酸化酶转化为次黄嘌呤。最终被XOD转化为尿酸[34]。本实验以研究血清中XOD和ADA的活性来探讨水果酵素醋降低体内血尿酸的机制。结果表明，模型组血清中XOD和ADA的酶活性显著升高。水果酵素醋3个剂量组的XOD和ADA酶活性均显著降低，说明水果酵素醋可通过抑制XOD和ADA的酶活性，减少小鼠体内尿酸的形成，从而降低血尿酸水平。

临床上，血肌酐是评价肾功能的重要指标，其含量升高意味着肾功能的损伤[35-36]。BUN是判断肾小球滤过功能的指标，能较为准确地反映肾实质受损的情况[37]。尿素氮从肾小球滤过而排出体外。在肾功能不全失代偿时，BUN将升高。在本实验中，各试验组小鼠的Cr及BUN含量均无明显变化，说明氧嗪酸钾、苯溴马隆及水果酵素醋不会造成小鼠肾功能损伤。