亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性检测对先兆流产孕妇的临床价值

陈跃

（温州市中医院，浙江 温州325000）

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2016 年6月-2019 年2月本院住院治疗的先兆流产患者291 例为病例组，入组患者均符合《妇产科学》先兆流产的诊断标准[4]，年龄20-42 岁，平均（30.1±4.5）岁。 另取同期本院体检健康孕妇95 例为对照组， 年龄20-40 岁， 平均（29.8±4.7）岁。对照组纳入标准：（1）产检孕妇，无不良孕产史；（2）孕期各指标检查均正常。 排除标准：（1）生殖器官解剖学异常，有肝肾等器官基础疾病；（2）遗传病史，染色体核型不正常；（3）既往甲状腺功能异常，有糖尿病等内分泌疾病；（4）抗核抗体阳性， 抗中性粒细胞胞浆抗体阳性， 抗磷脂抗体阳性。 两组年龄和孕周差异均无统计学意义 （P＞0.05）。 详见表1。

表1 两组一般资料比较（±s）

表1 两组一般资料比较（±s）

组别 n 年龄（岁） 孕周（周）病例组 291 30.1±4.5 6.2±2.1对照组 95 29.8±4.7 6.0±1.7

1.2 方法

1.2.1 MTHFR 基因多态性检测 采集受检者全血2mL，EDTA 抗凝， 采用离心柱型血液基因组DNA提取试剂盒（天根生物科技公司提供），运用PCR-荧光探针法检测，最后利用分析软件确定基因分型结果，仪器和软件由湖南圣湘生物公司提供，PCR 扩增 探 针 序 列：FAM 探 针：5'-FAM-AGGTGTCTGCGGGAGTCGATTTC-TAMARA-3'；VIC探针：5'-VICAGGTGTCTGCGGGAGCCGATTTC-TAMARA-3'。

1.2.2 同型半胱氨酸（Hcy）检测 采集受检者空腹静脉血3mL， 置于分离胶促凝管内，2 小时内离心上机检测，检测原理为酶循环法，仪器为德国罗氏cobas8000 全自动免疫生化分析仪， 试剂由罗氏原装提供。

1.3 统计学处理 采用SPSS19.0 统计学软件对数据进行处理及分析，计数资料以百分率表示，组间比较采用χ2检验；正态分布计量资料以（±s）表示，比较采用t 检验。

2 结果

2.1 MTHFR C677T 基因多态型和等位基因频率比较，病例组的TT 型占比较对照组高，差异有统计学意义（P＜0.05）。 详见表2。

表2 两组MTHFR C677T 基因型和等位基因频率比较[n（%）]

2.2 Hcy 水平 对照组血清Hcy 为（6.00±1.54）μmol/L，病例组为（6.54±1.02）μmol/L，病例组高于对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05）。

3 讨论

先兆流产为妊娠28 周前出现少量阴道流血且无妊娠物排出，并伴有阵发性下腹痛或腰背痛，经休息及治疗后症状消失， 可继续妊娠的一类病症。 若阴道流血量增多或下腹痛加剧，可发展为难免流产。 病因形成较复杂，受遗传、环境和饮食条件的共同影响。 MTHFR 基因有多种突变类型，有近30 个SNP 位点，其中677 位的C/T 位点的多态性与酶活性及热稳定性密切相关， 包括三种基因型，分别是野生型纯合子（CC 型），杂合子（CT 型）和突变纯合子型（TT 型）[5]。 MTHFR 为叶酸代谢和Hcy 代谢的关键酶，催化5，10-亚甲基四氢叶酸转化为5-甲基四氢叶酸。 5-甲基四氢叶酸不仅作为一碳单位的供体， 参与体内嘧啶、 嘌呤的生成及RNA、DNA、蛋白质的甲基化；还可作为细胞内甲基的供体，在维生素B12和甲硫氨酸合酶的催化下使血Hcy 发生甲基化，形成甲硫氨酸，使血Hcy 水平保持平衡[6]。

当MTHFR 基因位点发生突变时， 会导致MTHFR 酶活性下降，引起对叶酸的利用率下降，同时伴有甲基化的异常，导致血同型半胱氨酸水平升高[3]。 当叶酸代谢障碍，不能被很好地吸收与利用时，儿童神经管畸形、Down 综合征、胎儿宫内发育迟缓、 自发性流产等一系列与其密切相关的疾病发生率会增高[7]。 本研究显示，病例组MTHFR C677T 突变TT 基因型所占比例较对照组高， 与黄晓玲等[8]的研究结果相近，说明不同的基因型与先兆流产的发生有一定的关联，可以为孕妇预测发生先兆流产风险提供参考。 同时通过本研究还发现，对照组血Hcy 水平低于病例组，差异有统计学意义（P＜0.05）。 说明病例组同时存在高TT 基因型占比和高血Hcy 浓度的现象， 该现象可能由于突变TT型引起MTHFR 酶活性降低，导致甲基及5-甲基四氢叶酸的产生量减少，而未甲基化的dUMP 与甲硫氨酸循环中无法进行Hcy 代谢，致高Hcy 血症[9]。

有研究将血Hcy 水平直接按不同基因型分组进行比较，TT 组血Hcy 水平高于CT 组和CC 组，更能说明MTHFR 的基因型与血Hcy 水平存在密切的联系， 所以TT 基因型孕妇从妊娠早期就要密切监测其血Hcy 水平变化[10]。对于发生高Hcy 血症的孕妇，可通过加强补充叶酸，使血Hcy 降至正常水平，同时降低妊娠流产的风险[11]。