卵巢癌患者血清miR-21及糖类抗原125水平变化及意义

尤娟

卵巢癌是妇科常见生殖系统肿瘤，恶性程度高、治疗难度大，严重威胁女性身体健康［1］。卵巢癌发病隐匿，早期症状不典型，临床也缺乏明确诊断方法，导致60%～70%卵巢癌患者确诊时已发展至晚期，错失最佳治疗时机［2］。病理活检是诊断卵巢癌的金标准，但其属于有创操作，部分患者依从性较差。血清肿瘤标志物在肿瘤筛查和诊断方面的应用日益广泛，成为目前临床研究的热点，糖类抗原 125（Carbohydrate antigen 125，CA125）是一种常用妇科肿瘤标记物，具有较高敏感性［3］。微小RNA（microRNA，miRNA）是一类小分子非编码RNA，参与细胞生长、凋亡以及能量代谢等生理过程。近年研究［4-5］发现，微小 RNA-21（microRNA-21，miR-21）与多种肿瘤疾病的发生密切相关，但其在卵巢癌发病过程中的作用尚不清楚。本研究分析了80例卵巢癌患者血清miR-21及CA125水平变化，探讨两者对卵巢癌的诊断价值及其与病例特征的关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2016年1月至2018年1月本院接受手术治疗的80例卵巢癌患者为恶性组，患者年龄37～65岁，平均（53.68±6.32）岁；临床分期：Ⅰ～Ⅱ期45例，Ⅲ～Ⅳ期35例；分化程度：低分化33例，中高分化47例；淋巴结转移28例，无淋巴结转移52例。选取同期卵巢良性肿瘤患者50例为良性组，患者年龄 35～65岁，平均（54.22±6.29）岁；卵巢囊肿 29例，卵巢纤维瘤11例，卵巢包块4例，畸形瘤6例。另选取同期50例健康女性为健康组，年龄32～65岁，平均（53.85±6.41）岁。3组研究对象基线资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2 纳入与排除标准

纳入标准［6］：（1）临床资料完整，病理诊断报告证实疾病；（2）初诊治，尚未接受治疗；（3）所有患者均知情同意；（4）研究方案经医学伦理委员会审核通过。

排除标准：排除肝肾功能不全、血液系统及免疫系统疾病患者；排除其他部位恶性疾病患者；排除近半年使用过激素和免疫调节类药物者；剔除病理资料不全，中途随访失联者。

1.3 研究方法

1.3.1 标本采集

恶性组患者于入院次日和术后1个月采集空腹外周静脉血样10 mL，良性组和健康组分别于初诊治或体检时采集空腹静脉血标本4 mL。将外周血以1 000 g离心15 min，分离血浆分装后置于-80℃保存备检。

1.3.2 试剂与仪器

Trizol试剂购于美国Invitrogen公司，RNA提取试剂购于Miltenyi Biotec公司，引物由上海生工公司设计合成（见表1），反转录试剂盒购于美国Invitrogen公司，实验仪器为ABI7300荧光PCR仪。CA125检测试剂购于罗氏公司，检测仪器为罗氏Conbase601分析仪。

表1 miR-21及内参引物序列Table 1 miR-21 and internal primer sequences

1.3.3 检测方法

①使用Trizol试剂提取外周血总RNA，然后采用反转录试剂盒进行cDNA合成。通过RT-PCR实验扩增mRNA，反应体系共10 μL，扩增条件：95℃15 min，94℃ 15 s，55℃ 30 s，70℃ 30 s，循环 50次。测定 mRNA 的 Ct值，通过 2-△△Ct计算 miR-21相对含量。②采用化学发光免疫法检测血清CA125水平，实验操作由专人根据说明书执行。

1.4 统计学方法

采用SPSS19.0软件分析，所有计量资料以（）进行描述，多组比较用单因素方差分析，两两比较用LSD法检验；计数资料以率（%）描述，组间比较采用χ2检验；根据受试者工作特征曲线（Receiver operator characteristic curve，ROC）分析血清miR-21及CA125在卵巢癌诊断中的价值，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 各组血清miR-21及CA125表达情况比较

恶性组血清miR-21及CA125表达水平均高于良性组和健康组，良性组患者血清miR-21及CA125表达又高于健康组（P＜0.05）。见表2。

2.2 血清miR-21及CA125检测对卵巢癌的诊断价值

以恶性组为阳性组，健康组与良性组合并为阴性组。绘制ROC曲线分析发现，血清miR-21和CA125单独检测诊断卵巢癌的AUC分别为0.925、0.872，两者最佳诊断临界值分别为miR-21＜2.13、CA125＜35.50 U/mL；在此诊断标准下 miR-21和CA125的诊断灵敏度分别为78.8%、62.5%，特异度为92.0%、98.0%。联合检测的AUC为0.959，诊断灵敏度为91.3%，显著高于miR-21和CA125单独检测（P＜0.05）；诊断特异度为92.0%，与单独检测差异无统计学意义（P＞0.05）。见表3、图1。

表2 各组血清miR-21及CA125表达水平比较（±s）Table 2 Comparison of expression levels of serum miR-21 and CA125 in each group（±s）

表2 各组血清miR-21及CA125表达水平比较（±s）Table 2 Comparison of expression levels of serum miR-21 and CA125 in each group（±s）

组别健康组良性组恶性组F值P值n 50 50 80 miR-21 1.02±0.36 1.55±0.42 2.39±0.72 87.123 0.000 CA125（U/mL）19.34±4.85 29.91±6.23 52.66±18.83 107.454 0.000

表3 血清miR-21及CA125检测对卵巢癌的诊断价值（U/mL，%）Table 3 Diagnostic value of serum miR-21 and CA125 in ovarian cancer（U/mL，%）

图1 血清miR-21及CA125检测对卵巢癌诊断的ROC曲线Figure 1 ROC curve of serum miR-21 and CA125 detection for the diagnosis of ovarian cancer

2.3 不同临床病理特征患者血清miR-21及CA125表达情况

根据ROC分析所得血清miR-21及CA125表达临界值为界定标准，超出临界值表示表达阳性，低于临界值者表示表达阴性。临床分期Ⅲ～Ⅳ期、低分化程度以及存在淋巴结转移的卵巢癌患者血清miR-21及CA125阳性率分别高于Ⅰ～Ⅱ期、中高分化和未发生淋巴结转移患者，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表4。

2.4 恶性组手术前后血清miR-21及CA125表达情况

恶性组患者手术1个月后血清miR-21及CA125表达水平较术前明显降低，差异具有统计学意义（P＜0.05）。见表5。

3 讨论

近年来，随着生活方式的改变和环境污染的加剧，卵巢癌的发生率逐年升高且呈年轻化趋势［7］。早期卵巢癌患者生存率较高，经系统治疗后五年生存率可达90%以上；但由于早期症状不明显且缺乏敏感的筛查指标，多数患者确诊时已处于晚期，导致预后较差，五年生存率低于40%［8-9］。因此，早期诊断和筛查对卵巢癌患者的临床治疗和远期预后尤为重要。

多种细胞因子参与肿瘤疾病的发生和发展过程，能够辅助临床医生监测治疗效果和判断预后［10］。CA125属于糖蛋白类肿瘤抗原，是目前临床上应用最为广泛的肿瘤标志物，在肺癌、乳腺癌等恶性肿瘤患者血清中均显著提高，并对患者的预后有一定指示作用［11］。本研究结果显示，与卵巢良性肿瘤及健康女性相比，卵巢癌患者血清CA125水平显著升高，提示CA125对卵巢癌的诊断同样具有重要参考价值。另外，CA125在不同临床分期、组织分化程度以及是否发生淋巴结转移患者血清中也存在明显差异，且卵巢癌患者术后1个月时血清CA125水平也明显降低，说明CA125在卵巢癌病理过程中发挥重要作用，可作为评估患者病情的辅助指标。

癌症的发生和发展是多基因共同参与的过程，miRNA是一类单链非编码RNA，通过与3′端配对而干扰正常mRNA的合成，实现对靶基因表达的调控作用［12］。研究［13-14］发现，miRNA通过对原癌基因或抑癌基因的调控作用，介导肿瘤细胞的免疫逃逸、新血管生成等途径，参与肿瘤疾病的病理过程。miR-21是一种具有类似癌基因的miRNA，通过负调控肿瘤抑制基因TPM1、PTEN、SPRY2等靶向位点，促进肿瘤细胞的生长、分裂和侵袭，从而在血液系统以及实体器官肿瘤中发挥作用［15-17］。本研究发现，卵巢癌患者血清miR-21相对表达量较卵巢良性肿瘤和健康女性显著升高，且不同临床分期、组织分化程度以及是否存淋巴结转移的患者血清miR-21表达也存在显著差异，提示miR-21在卵巢癌发病过程中可能发挥促癌作用，其相关作用机制还需进一步研究。

表4 不同临床病理特征患者血清miR-21及CA125表达情况比较［n（%）］Table 4 comparison of serum miR-21 and CA125 expression in patients with different clinical and pathological characteristics［n（%）］

表5 卵巢癌患者手术前后血清miR-21及CA125表达水平比较（±s）Table 5 Comparison of serum mir-21 and CA125 expression levels in ovarian cancer patients before and after surgery（±s）

表5 卵巢癌患者手术前后血清miR-21及CA125表达水平比较（±s）Table 5 Comparison of serum mir-21 and CA125 expression levels in ovarian cancer patients before and after surgery（±s）

组别术前术后1个月t值P值n 80 80 miR-21 2.39±0.72 1.87±0.53 5.465 0.000 CA125（U/mL）52.66±18.83 38.52±9.57 5.787 0.000

绘制ROC曲线分析miR-21及CA125对卵巢癌的诊断价值，结果显示，血清miR-21和CA125单独检测诊断卵巢癌的AUC均大于0.8，提示两者对卵巢癌的诊断均具有良好效果；其中miR-21对卵巢癌诊断的AUC和灵敏度均大于CA125，提示miR-21对卵巢癌诊断效能较高。卵巢癌恶性程度较高，对患者危害严重，避免漏诊是临床诊治的关键，单项指标检测必然会存在一定缺陷性，因此推荐多指标联合检测进行疾病筛查。本研究发现，miR-21和CA125联合检测的AUC大于单独检测，且联合检测的诊断灵敏度较单独检测也显著提高，说明miR-21和CA125联合检测可进一步提高灵敏度，降低漏诊率。

综上所述，血清miR-21和CA125表达情况与卵巢癌的发生发展密切相关，可作为卵巢癌早期诊断的参考指标，而miR-21和CA125联合检测更有助于提高卵巢癌筛查诊断的准确性，降低漏诊率。