CEA、NSE、SCCA联合miR-21检测与肺癌患者临床病理特征、疗效及预后的相关性研究

汤乔雅 宫郡茗 马艳凌

肺癌（lung cancer）是最常见的癌症之一，导致约25%的癌症死亡［1］。研究表明，90%～95%的肺癌来自上皮细胞，其覆盖较大和较小的气道。肺癌倾向于在早期阶段扩散或转移，身体的任何器官都可能受到肺癌肿瘤的侵袭［2］。为防止肺癌复发，建议在手术后进行化疗治疗［3］。肿瘤标志物的精确测量和肿瘤的治疗效果监测是早期诊断的关键，包括癌胚抗原（Carcinoembryonic antigen，CEA）、神经元特异性烯醇化酶（neuron specific enolase，NSE）、鳞状上皮癌细胞抗原（squamous cell carcinoma antigen，SCCA）［4］。 据 相 关 研 究mRNA-21过表达缩短了人类原发性鳞状细胞肺癌的生存时间，表明miRNA-21可能是这种疾病的诊断和预后标志。目前由于单个肿瘤标志物通常不足以用于癌症诊断，检测一组肿瘤标志物可以显着提高诊断价值［5］。本文将研究 CEA、NSE、SCCA联合miR-21检测与肺癌患者临床病理特征、疗效及预后的相关性。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选择本院自2016年2月至2019年3月期间接受肺癌治疗的患者87例，其中男性45例，女性42例，年龄37～83岁，平均年龄（58.46±3.12）岁，其中病理类型鳞癌28例，腺癌59例。纳入标准：①患者具有明确的细胞学或病理学确诊证明；②患者的病灶经影像学检查认为具有研究价值。排除标准：①患者治疗前没有进行肿瘤标志物CEA、NSE、SCCA血清检查；②患者患有其他恶性肿瘤、免疫系统疾病或严重感染性疾病。以上患者及其家属已知情并签署同意书，本课题已通过我院伦理委员会。选取87例肺癌患者作为实验组和同期体检的87例健康人作为对照组。

1.2 用电化学发光免疫法检测各组肿瘤标志物的表达

采用电化学发光免疫分析仪（UniCel DxI800）检测 CEA、NSE、SCCA 的表达水平，所有受试者与上午空腹抽取静脉血5 mL，室温静置后用离心机进行离心，3 000 r/min，10 min，去沉淀取上清液，使用电化学发光免疫分析仪进行检测。

1.3 用实时定量PCR检测血清中miR-21的表达

从健康人和肺癌患者静脉采血约5 mL，离心3 000 rpm十分钟分离去血清，放于-80℃备用。从血清中提取总RNA并对其检测是否完整，用实时定量PCR检测血清中miR-21的表达，GAPDH作为内部参考。采用2-ΔΔCT方法计算基因的相对表达水平。

1.4 疗效评价标准

肺癌临床疗效评价标准［6］：①完全治愈（Complete Response，CR），体内无肿瘤，完全治愈；②部分治愈（Partial Response，PR），体内肿瘤数量减少和肿瘤体积减少超过原始体积一半；③病情稳定（Stable Disease，SD），体内肿瘤体积减少小于一半或增加小于原来体积的25%；④病情发展（Progressive Disease，PD），体内肿瘤体积大于原来体积的25%或者出现肿瘤扩散。

1.5 统计学方法

以上数据采用SPSS 20.0软件系统，采用Kruskal-Wallis H检验肺癌患者血清中CEA、NSE、SCCA和miR-21的表达和肺癌患者临床病理特征的关系，采用Spearman等级相关性分析CEA、NSE、SCCA和miR-21和临床病理特征的关系，采用Kaplan-Meier生存分析法分析CEA、NSE、SCCA和miR-21表达高低的生存曲线；以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组血清中CEA、NSE、SCCA及miR-21的表达对比

根据实验结果显示，实验组患者肿瘤标志物CEA、NSE、SCCA表达水平显著高于对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05）；实验组患者血清中miR-21的表达显著高于对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 各组CEA、NSE、SCCA及miR-21的表达（±s）Table 1 Expression of CEA，NSE，SCCA and miR-21 in each group（±s）

表1 各组CEA、NSE、SCCA及miR-21的表达（±s）Table 1 Expression of CEA，NSE，SCCA and miR-21 in each group（±s）

组别对照组实验组P值CEA（μg/L）2.35±0.26 11.65±1.75 0.032 NSE（μg/L）6.14±0.79 14.51±1.62 0.027 SCCA（μg/L）1.41±0.11 2.94±0.16 0.029 miR-21 0.92±0.14 2.13±1.13 0.041

2.2 CEA、NSE、SCCA及miR-21与肺癌临床病理特征的关系

根据分析结果，肺癌患者CEA、SCCA及miR-21的表达与性别、年龄、病理类型和TNM分期无关，差异无统计学差异（P＞0.05）。肺癌患者NSE的表达与性别、年龄、病理类型无关，差异无统计学差异（P＞0.05），与临床分期相关，差异具有统计学意义（P＜0.05）；临床分期从Ⅰ～Ⅳ逐渐升高，NSE的表达从12.37、14.98、15.76逐渐增加，与临床病理呈正相关。见表2。

2.3 CEA、NSE、SCCA及miR-21与肺癌患者疗效的关系

实验数据显示，未有完全痊愈的患者。PR患者（26.4%，χ2=5.78）治疗后CEA、NSE、SCCA及miR-21的表达显著低于治疗前，差异具有统计学意义（P＜0.05）；SD患者（40.2%，χ2=8.26）治疗后CEA、NSE、SCCA及miR-21的表达显著低于治疗前，差异具有统计学意义（P＜0.05）；PD患者（33.3%，χ2=4.91）治疗后CEA、NSE、SCCA及miR-21的表达显著低于治疗前，差异具有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

表2 实验组CEA、NSE、SCCA及miR-21与肺癌临床病理特征的关系（μg/L）Table 2 Relationship between CEA，NSE，SCCA and miR-21 in experimental group and clinicopathological features of lung cancer（μg/L）

表3 CEA、NSE、SCCA及miR-21与肺癌患者疗效的关系（±s）Table 3 Relationship between CEA，NSE，SCCA and miR-21 and the efficacy of lung cancer patients（±s）

表3 CEA、NSE、SCCA及miR-21与肺癌患者疗效的关系（±s）Table 3 Relationship between CEA，NSE，SCCA and miR-21 and the efficacy of lung cancer patients（±s）

疗效（%）PR（26.4%）SD（40.2%）PD（33.3%）P值例数23 35 29 CEA治疗前2.41±1.32 6.17±2.31 5.87±2.69治疗后2.13±1.12 5.79±1.89 5.19±2.09 0.039 NSE治疗前15.19±5.69 16.37±6.12 15.39±6.34治疗后14.54±5.98 16.08±5.59 14.92±6.03 0.028 SCCA治疗前2.98±0.18 3.45±0.26 3.28±0.14治疗后2.08±0.17 2.45±0.21 2.36±0.11 0.027 miR-21治疗前2.45±1.26 2.89±1.21 2.63±1.36治疗后1.48±0.95 1.56±0.84 1.76±0.59 0.041

2.4 CEA、NSE、SCCA及miR-21的表达与患者预后的关系

Kaplan-Meier生存曲线显示，随着CEA、NSE及SCCA表达的阳性率增加，生存曲线越低，患者存活时间越短，表明CEA、NSE及SCCA表达越高，患者预后情况越差。miR-21的表达情况与以上3种肿瘤标志物与患者生存情况一致。生存分析结果显示：CEA、NSE、SCCA及miR-21的表达表达的高低对患者预后情况有重要意义。见图1。

图1 CEA、NSE、SCCA及miR-21的表达与患者预后关系的对比Figure 1 Comparison of CEA，NSE，SCCA and miR-21 expression and patient prognosis

2.5 血清中单个项目及联合检测的灵敏度和特异度

实验结果显示，CEA、NSE、SCCA及miR-21诊断肺癌的灵敏度分别是51.7%、37.9%、52.9%、63.2%，特异度分别是90.8%、82.7%、85.1%、81.6%，四种指标联合诊断的灵敏度为85.1%，显著高于单项指标，但特异度为70.1%，显著低于单项指标。见表4。

表4 血清中单个项目及联合检测的灵敏度和特异度对比［n（%）］Table 4 comparison of sensitivity and specificity of single item and combined detection in serum［n（%）］

3 讨论

肺癌是主要癌症发病率和死亡率的最常见原因［7］。该癌症的常见治疗方法包括手术，化学疗法，姑息治疗和放射治疗［8］。目前，肺癌的诊断常用支气管镜检查、组织病理学检查和计算机断层扫描，但这些方法均存在侵袭性差、敏感性低、特异性差等缺点；低剂量螺旋CT检查是筛查肺癌的推荐方法［9］，由于潜在的辐射危险，患者对CT检查感到不适，这限制了该技术在常规筛查中的应用。因此，在临床诊断中检测肿瘤标志物可能是对肺癌早期筛查的补充。然而，由于肿瘤标志物的低特异性，通常单一的肿瘤标志物不足以诊断癌症。并且检测一组肿瘤标志物可以显着提高诊断价值。因此，多生物标志物免疫测定法引起了越来越多的关注。此外，就成本，测定时间，样品消耗，劳动力和便利性而言，多生物标记物免疫测定法比单生物标记物免疫测定法具有显着优势。本文将研究CEA、NSE、SCCA联合miR-21检测与肺癌患者临床病理特征、疗效及预后的相关性。

对某些特异miRNAs的研究表明，其可作为治疗的靶点。例如，Kim等人指出miR-21具有抑制肿瘤的作用，可以作为肝癌治疗的新靶点［10-13］。Yang等人指出miRNA-21可以预测NSCLC的复发和低生存率。mRNA-21过表达缩短了人类原发性鳞状细胞肺癌的生存时间，表明miRNA-21可能是这种疾病的诊断和预后标志［14］。miRNA在基因表达调控中起着关键作用，其异常表达与肿瘤的发生和发展有关［15］。肺癌的高发病率和高死亡率已成为威胁人类健康的重要因素，故本课题研究miR-21的表达与肺癌患者临床病理特征、疗效及预后的相关性。实验结果显示，肺癌患者miR-21的表达水平显著高于正常人，与肺癌患者临床病理特征无关，与疗效及患者生存预后相关。

肿瘤标志物的精确测量是早期诊断癌症和监测肿瘤的治疗效果的关键，包括癌胚抗原（CEA），神经元特异性烯醇化酶（NSE）；鳞状上皮癌细胞抗原（SCCA）［16］。CEA是一种广谱肿瘤标志物，可用于预测许多癌症的复发率和存活率，例如结肠癌、胃癌和肺癌等［17-18］。NSE是神经元和外周神经内分泌细胞的高度特异性标记物［19］。SCCA是鳞状细胞癌的特异性标志物，是宫颈鳞状细胞癌的独立预后因素［20］。这些标志物大多数研究集中于这些标志物对肺癌的预后和存活率的预测价值。故本课题研究CEA、NSE、SCCA检测与肺癌患者临床病理特征、疗效及预后的相关性。实验结果显示，实验组患者CEA、NSE、SCCA的表达水平显著高于正常人，CEA和SCCA的表达水平与肺癌患者临床病理特征无关，NSE与肺癌的TNM分期相关，3者的表达水平与疗效及生存预后相关。

灵敏度即用来衡量诊断患有疾病方法的能力，将患者正确判定为真阳性；所谓特异性就是指该指标在诊断某疾病时，不误诊的机会有多大小。故本课题将血清中单个项目及联合检测的灵敏度和特异度进行对比，四种指标联合诊断肺癌的灵敏度显著高于CEA、NSE、SCCA及miR-21诊断肺癌的灵敏度，但是四种联合诊断肺癌的特异性低于单项指标。任何一个诊断指标，都有两个最基本的特征，即灵敏度和特异性，如果提高其诊断的灵敏度，必然降低其诊断的特异性，换句话说，减少漏诊必然增加误诊，反之亦然。综上可知，肺癌患者血清中CEA、NSE、SCCA和miR-21的表达水平显著高于正常人，可作为肺癌的诊断、疗效及预后的指标，四种指标联合诊断肺癌的灵敏度显著提高肺癌的诊断率，为未来诊断和治疗肺癌提供了新思路，但提高诊断肺癌的特异度还有待进一步研究。