MyD88在骨巨细胞瘤中的表达及其与微血管密度的相关性

刘文博 李晓菊

骨巨细胞瘤是一种潜在恶性或介于良恶性之间的溶骨性肿瘤，约占原发骨肿瘤4%[1-2]。骨巨细胞瘤的肿瘤组织主要由多核巨细胞和基质细胞组成，来源于中胚叶细胞，易发生肿瘤转移，预后相对比较差[3-4]。现代研究表明骨巨细胞瘤的发生与发展为多阶段协同与多基因参与的结果，Toll样受体4(Toll-like Receptor 4，TLR4)可通过识别病原相关的分子模式(pathogen-associated molecular patterns，PAMPs)及内源性配体，从而在天然免疫防御中发挥重要作用[5-6]。髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88，MyD88)是TLR4信号通路中的一个关键衔接分子，包括N端的死亡区(death domain，DD)、中间区域及C端的Toll区，其为一种胞质可溶性蛋白，在信号传导中发挥重要作用[7-8]。微血管密度(microvessel density，MVD)是指一定体积的组织中微血管的数量，肿瘤组织的MVD不仅可定量地反映肿瘤血管生长情况，也能预测肿瘤的生物学行为[9-10]。本文具体探讨了骨巨细胞瘤的MyD88病理学表达特征与微血管密度的相关性，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料

研究时间为2016年2月到2018年7月，采用回顾性总结研究方法，选择安康市中医医院诊治的骨巨细胞瘤患者101例作为研究对象。纳入标准：临床与病理学资料完整；病理组织学证实为骨巨细胞瘤；患者签署了对本研究的知情同意书；入院前未行任何治疗；年龄20～80岁；研究得到了医院伦理委员会的批准。排除标准：临床与病理学资料缺项者；妊娠与哺乳期妇女；精神疾病患者。

101例患者中男性61例，女性40例；平均体重指数为(21.42±2.13)kg/m2；平均病程(1.82±0.82)年；年龄最小26岁，最大78岁，平均年龄(56.22±5.29)岁；组织学分化：高分化40例，低分化40例，中分化21例；临床分级：Ⅰ级60例，Ⅱ级30例，Ⅲ级11例；发病部位：肱骨9例，桡骨21例，尺骨20例，髂骨10例，股骨30例，胫骨10例，腓骨1例；转移情况：淋巴结转移33例，肺转移20例，肝转移11例。

1.2 MyD88免疫组化分析

兔抗人MyD88多克隆抗体来自美国Santa Cruz公司，免疫组化试剂盒来自北京中杉金桥生物技术有限公司。选择所有患者的瘤组织标本与瘤旁组织标本，瘤旁组织标本为距瘤肿边缘2 cm以内细胞组织为瘤旁组织。选择标本进行10%福尔马林固定，24 h内常规脱水、浸蜡、包埋。在显微镜100倍视野下观察切片，每张切片随机选择5个区域，根据棕黄色阳性信号的强弱和面积判断结果。MyD88于细胞质中显示阳性信号，MyD88的阳性细胞百分比得分为0～4分(0分：阴性或基本不着色定；1分：≤10%；2分：>10～30%为；3分：>30～50%；4分：>50%)，0～1分判定为阴性，2～4分判定为阳性。

石蜡切片标本经染色后由两位病理科医生独立阅片，共同判断组化结果。

1.3 MVD计数方法

在光学显微镜下观察所有组织标本免疫组化标记CD34、CD31的内皮细胞分布，CD31、CD34的阳性染色为棕黄色色素沉积，定位于血管内皮细胞胞膜和胞质中。MVD计数方法参照文献[11]，每个高倍镜下视野面积为0.474 mm2，每平方毫米的血管数为MVD。

1.4 统计方法

选择SPSS 20.00软件进行分析，计数数据、计量数据采用例数或者百分比、均数±标准差表示，对比采用卡方分析与t检验，相关性分析采用直线相关分析，检验水准为α=0.05。

2 结果

2.1 Myd88阳性表达率对比

MyD88在瘤旁组织中的阳性表达率为9.9%(10/101)，在瘤组织中的阳性表达率为66.3%(67/101)，对比差异有统计学意义(χ2=58.187，P=0.000)。

2.2 Myd88阳性表达率与临床病理资料的相关性

在瘤组织中，MyD88阳性表达与临床分级、分化情况、淋巴结转移、肺转移、肝转移都有显著相关性(P<0.05)。见表1。

表1 Myd88在骨巨细胞瘤中的表达与临床病理资料的相关性(例，%)

2.3 MVD对比

瘤组织中的CD31-MVD与CD34-MVD值都显著高于瘤旁组织(P<0.05)。见表2。

表2 不同组织的MVD值对比(个，

2.4 相关性分析

在瘤组织中，直线相关分析显示MyD88的阳性表达率与CD31-MVD、CD34-MVD值都呈显著正相关性(P<0.05)。见表3。

表3 骨巨细胞瘤的Myd88病理学特征与微血管密度的相关性(n=101)

3 讨论

骨巨细胞瘤是一种常见的骨原发性肿瘤，早期多为良性肿瘤，但是随着病程的发展，恶变的几率显著增加[12]。骨巨细胞瘤的病变主要见于骨骺与四肢，较大的病灶可扩展到干骺端，甚至骨干[13]。骨巨细胞瘤的复发率比较高，少数患者会发生肺转移与肝转移[14]。

当前骨巨细胞瘤的具体发病机制还不明确，相关的信号通路作用机制也尚待阐明[15]。TLR4/MyD88 信号通路在许多脏器的肿瘤组织中有表达，MyD88在二乙基亚硝酸胺诱导肝癌发生中起着关键性的促进作用，具有促进肿瘤发展的关键作用[16]。本研究显示MyD88在瘤旁组织中的阳性表达率为9.9%，在瘤组织中的阳性表达率为66.3%，对比差异有统计学意义(P<0.05)，表明MyD88在骨巨细胞瘤中呈现高表达状况。

MyD88是TLRs通路中共有一个关键的转导分子，在诱导炎症细胞因子中起着重要作用，其能够引起多种细胞因子的释放，促进骨巨细胞瘤细胞的增殖和抗凋亡作用，从而导致骨巨细胞瘤的发生、发展、侵袭及转移[17]。本研究显示在瘤组织中，MyD88阳性表达与临床分级、分化情况、淋巴结转移、肺转移、肝转移都有显著相关性(P<0.05)，提示MyD88阳性表达可增加骨巨细胞瘤的恶性程度，提高其转移浸润性。最近研究证明表达MyD88的肿瘤细胞还可主动攻击与之接触的免疫活性细胞，肝癌细胞可通过表达MyD88传导信号杀伤浸润的淋巴细胞[18]。

本研究显示瘤组织中的CD31-MVD与CD34-MVD值都显著高于瘤旁组织(P<0.05)。在肿瘤的生长过程中，肿瘤细胞可分泌大量的血管生长因子，促使肿瘤新生血管的生长。原发肿瘤可通过肿瘤血管从宿主获取营养和氧气，也通过血管向宿主输送转移细胞，导致肿瘤转移，为此MVD值能反映肿瘤状况，且MVD与肿瘤的转移复发有很好的相关性[19-20]。

MyD88阳性的肿瘤细胞还可主动攻击与之接触的免疫活性细胞，同时肿瘤也可以通过MyD88的高表达被动地逃避机体免疫监控[21]。肿瘤血管形成是肿瘤生长、浸润及转移的重要条件，正常细胞是非血管新生性的，在癌变过程中，需要经过从无血管新生性到血管新生性的表型转变[22]。相关研究也显示CD31标记MVD高的患者预后较差，提示肿瘤血管形成在骨巨细胞瘤的发病中起到重要作用[23]。本研究直线相关分析显示瘤组织的MyD88阳性表达率与CD31-MVD、CD34-MVD值都呈显著正相关性(P<0.05)。相关研究表明MyD88传导多种信号通路介导的促进炎症和致癌作用，从而引发肿瘤细胞生长、分化、增生、肿瘤免疫抑制细胞凋亡，从而调节MVD值[24-25]。

总之，MyD88在骨巨细胞瘤中呈现高表达状况，与骨巨细胞瘤的临床病理特征有一定相关性，与MVD有显著相关性。