重度脂浊对间接离子选择电极法测定血清钠钾氯的干扰

倪莉，方茂，朱丽丹，葛海峰，徐晓杰，丁红香

（1.温州医科大学附属第二医院 医学检验中心，浙江 温州 325027；2.余姚市妇幼保健院 检验科，浙江 宁波 315400）

近年来，由于生化检测项目的日渐丰富，全自动生化分析仪的大量应用，以及临床对检测结果准确度的高度重视，样本中的干扰成分对结果的影响越来越受到关注。在临床工作中，脂浊标本时有出现，常常干扰检验科工作人员快速、准确地出具检验报告。电解质检测在临床诊疗工作中具有重要的指导意义，往往作为急诊检验项目要求检验科快速给出结果。临床工作中发现直接离子选择电极法（以下简称直接法）检测重度脂浊血清标本钠钾氯结果与间接离子选择电极法（以下简称间接法）检测结果存在明显差异，本研究严格按照美国国家临床实验室标准委员会（National Committee for Clinical Laboratory Standards，NCCLS）EP7-A2和EP9-A2文件，通过患者样本比对的偏倚分析及体外干扰试验来研究脂浊对此2种方法检测血清钾钠氯干扰情况，以明确脂浊对间接法测定血清钾钠氯的干扰。

1 对象和方法

1.1 对象 按照NCCLS EP7-A2和EP9-A2文件方案[1-2]，收集2018年9月温州医科大学附属第二医院住院患者无溶血、无脂浊血清样本40份[3]，用作直接法和间接法检测钠、钾和氯的可比性试验。另外收集40份2018年9月温州医科大学附属第二医院住院患者不同脂浊程度的血清标本（脂浊指数从+～++++）分别用2种方法检测。从原先收集的40份无溶血、无脂浊血清样本中选取高、中、低浓度钠、氯的患者血清各5 mL至旋涡振荡器上2 000 r/min混匀5 min，作为基础血清A、B和C；同样选取无脂浊、无溶血的高、中、低浓度钾的患者血清各5 mL至旋涡振荡器上2 000 r/min混匀5 min，分别作为基础血清D、E和F。本研究经本院伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 仪器和试剂：间接法检测血清钠、钾和氯采用ADVIA 2400全自动生化分析仪（上海西门子医学诊断产品有限公司），采用ADVIA 2400 配套电解质稀释液（批号：NS832A）和校准品（批号：HS821AA），室内质控采用朗道室内质控品（批号:1199UN、946UE）；直接法检测血清钠、钾和氯采用VITROS 5600全自动生化分析仪（上海强生医疗器材有限公司），采用VITROS 5600配套试剂和校准品（试剂批号：Na+：4431、K+：9712、Cl-：9832；校准品批号：Na+：3689、K+：9499、Cl-：9171），室内质控采用奥森多室内质控品（批号：D6497、E6499）。

1.2.2 2种方法检测血清样本：直接法：样品或标准液不经稀释直接进入电极管道作电位分析；间接法：样品或标准液用一定离子强度与pH值的稀释液按一定比例稀释后再送入电极管道，测量其电位。分别用2种方法检测40例无溶血、无脂浊患者血清标本，双份测定，测试在2 h内完成；选取其中钠、钾和氯高、中、低浓度标本各1例，用2种方法各检测20次，计算批内精密度。分别用2种方法检测40例不同脂浊程度患者血清标本，双份测定，测试在2 h内完成。

1.2.3 体外干扰试验：利用A、B、C、D、E和F 6份基础血清标本和脂肪乳剂（广州百特侨光医疗用品有限公司，批号：GM1507096）设计体外干扰试验，将脂肪乳与蒸馏水按4:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3、1:4、1:9、1:19 稀释，加上蒸馏水和脂肪乳原液，总共11管，与收集的A、B和C基础血清以1:9混合[4]，分别用直接法和间接法测定钠氯浓度、甘油三酯浓度和脂浊指数（为仪器提供的量化脂浊指数，无脂浊≤25、25＜+≤43、43＜++≤208、＜208+++≤343和++++＞343）；同理，将配制好的不同浓度脂肪乳与D、E和F基础血清以1:9混合，分别用直接法和间接法测定钾浓度、脂浊指数和甘油三酯浓度，分析2种方法检测钾钠氯结果产生明显偏倚的甘油三酯浓度和脂浊指数。6份样本分别用2种方法双份测定，测试在2 h内完成。

1.3 统计学处理方法 采用SPSS19.0软件进行统计分析。计量资料以表示，直接法和间接法测定血清钠、钾和氯的两样本均数比较采用配对t检验；体外干扰试验以干扰值小于2017年卫生部临床检验中心室间质量评价规定的总允许误差的1/2作为无明显干扰的判断标准（钠±2%、钾±3%、氯±2.5%）[5]。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 方法重复性 2 种方法钠、钾和氯批内变异系数均小于2017 年卫生部临检中心室间质量评价标准总允许误差的1/4（钠±1%，钾±1.5%，氯±1.25%）。2种方法每天随样本测定的室内质控品结果均在控制范围内，见表1。

2.2 2种方法测定钠钾氯结果比较 40例无脂浊、无溶血标本分别用直接法和间接法测定血清钾钠氯，结果显示2种方法测定的钾钠氯结果之间的差异均无统计学意义（P＞0.05），见表2。

2.3 脂浊对间接法检测血清钠的干扰 甘油三酯浓度在40.6 mmol/L、脂浊指数为1 620对间接法测定血清钠离子浓度在154.5 mmol/L已经产生明显负偏倚（＞-2%）；甘油三酯浓度在39.8 mmol/L、脂浊指数为1 390对间接法测定血清钠离子浓度在129.2 mmol/L已经产生明显负偏倚（＞-2%）；甘油三酯浓度在35.3 mmol/L、脂浊指数为965对间接法测定血清钠离子浓度在113 mmol/L已经产生明显负偏倚（＞-2%）。

表1 直接法和间接法检测血清钠钾氯批内变异系数（%）

表2 直接法和间接法测定无脂浊标本钾钠氯的结果比较（每组n=40，mmol/L）

表2 直接法和间接法测定无脂浊标本钾钠氯的结果比较（每组n=40，mmol/L）

方法 Na+ K+ Cl-直接法 141.30±1.67 4.15±0.29 104.40±2.50间接法 141.40±1.69 4.15±0.28 104.60±2.52 t 0.826 -0.951 1.390 P 0.414 0.348 0.173

2.4 脂浊对间接法检测血清钾的干扰 甘油三酯浓度在28.4 mmol/L、脂浊指数为710对间接法测定血清钾离子浓度在5.8 mmol/L已经产生明显负偏倚（偏移＞-3%）；甘油三酯浓度在33.25 mmol/L、脂浊指数为993 对间接法测定血清钾离子浓度在4.35 mmol/L已经产生明显负偏倚（偏移＞-3%）；甘油三酯浓度在30.4 mmol/L、脂浊指数为867对间接法测定血清钾离子浓度在2.8 mmol/L已经产生明显负偏倚（偏移＞-3%）。

2.5 脂浊对间接法检测血清氯的干扰 甘油三酯浓度在22.5 mmol/L、脂浊指数为680对间接法测定血清氯离子浓度在126.6 mmol/L已经产生明显负偏倚（偏移＞-2.5%）；甘油三酯浓度在20.5 mmol/L、脂浊指数为645 对间接法测定血清氯离子浓度在94.3 mmol/L已经产生明显负偏倚（偏移＞-2.5%）；甘油三酯浓度在20 mmol/L、脂浊指数为615对间接法测定血清氯离子浓度在79.6 mmol/L已经产生明显负偏倚（偏移＞-2.5%）。

2.6 偏倚分析 40份脂浊指数分别为+～++++的患者血清标本，分别用直接法和间接法测定血清钾钠氯浓度，计算偏倚，与之前检测的40份无脂浊标本进行比较作图，x轴为直接法测定的钠、钾和氯结果，y轴为间接法测定值与直接法测定值的差值跟直接法测定值的比值，结果显示脂浊对间接法测定血清钠、钾和氯存在负干扰（见图1-3）。直接法测定脂浊血清钠、钾和氯明显高于间接法，差异有统计学意义（P＜0.05）。

图1 脂浊对间接法测定血清钠的干扰

图2 脂浊对间接法测定血清钾的干扰

图3 脂浊对间接法测定血清氯的干扰

3 讨论

目前检测电解质的方法有火焰光度法、酶法、离子选择电极法等。火焰光度法由于其操作麻烦、不适合大批量检测，在临床中已基本被淘汰[6]，酶法由于酶的稳定性以及部分试剂干粉需要复溶，在临床的推广亦受到限制[7]，离子选择电极法因其简便、灵敏、快速的特点，被大多数实验室普遍使用。

本研究显示，对于无脂浊标本，两法检测血清钠钾氯的结果无明显差异；患者脂浊样本两法检测结果比较及体外干扰试验均提示重度脂浊标本采用间接法检测血清钾钠氯存在明显负偏倚。

离子选择电极法是利用电极电位和离子活度的关系来测定被测离子活度的一种电化学分析法[8]，但所测定的电解质离子只限于分布在血清中的水相部分，一般情况下，血清中水相占总体积的比例稳定，约为93%，剩余7%的体积则是被蛋白质和脂类所占据。离子选择电极法依据对样本是否进行稀释分为直接法和间接法。两种方法的区别在于：间接法检测时需用一定离子强度的稀释液对血清进行1:30左右的稀释，操作简单、检测快速，且电极工艺小巧，适合装备大型自动生化分析仪，虽然只稀释和检测了占93%水相中的电解质，但在正常情况下可通过换算得到实际的电解质浓度[9]。然而在病理情况下（如重度脂浊），血清中固体物质部分增加，大量脂质占据了原本属于一部分水相的体积，引起水相比例减少，而被脂质占据的体积内并不含电解质，此时若仍按93%的水相比例来换算，就会导致钠、钾和氯结果出现假性偏低[10]。而直接法不需要稀释血清，直接测定血清样本，只检测和计算水相中的电解质浓度，并且电极具有多层涂膜结构，将血脂和蛋白异常的干扰降至最低[11-12]，结果更真实可靠。

综上所述，脂浊对间接法测定血清钠钾氯存在负干扰，导致检测结果假性偏低。随着全自动生化分析仪的广泛应用，间接法比以往更加广泛地用于临床电解质的测定。当遇到重度脂浊，若采用间接法检测血清钠钾氯，检测结果明显偏低，对临床医师判断患者病情产生误导，因此，重度脂浊样本应该以直接法的检测结果为准，也可以使用高速离心去除脂质后，再采用间接法来测定，避免结果出现假性降低[13-14]。