流式细胞仪检测Ｂ系淋巴细胞白血病微小残留的研究进展

郭鹏举

【摘 要】流式细胞术（FCM）也就是识别白血病或肿瘤细胞的免疫表型标志（LAIP）与正常细胞的不同之处，通过多参数分析，将非正常细胞群表达的抗原识别出来，从而辨别正常细胞与白血病或肿瘤细胞的一种技术。这种技术的灵敏度较高，能够识别出有核细胞内10-3—10-5的白血病细胞，这种方法操作比较简便，覆盖范围较广，可以进行定量分析，且特异性强。可以对白血病微小细胞残留病（MRD）进行方便有效的检测，在为该疾病后续的诊断提供依据的同时指导临床的个体化治疗，以及治疗方案的制定，也可以对白血病的复发进行有效的预测，对病人的病情进行可靠的判断。随着近几年对流式细胞术的进一步研究，流式细胞仪设备被不断的升级，同时，新的荧光标记抗体技术不断问世，以及多色荧光标记抗体的开发，单一免疫表型的流式细胞术发展到三色、四色最终发展到六色，这样的进步使LAIP更容易被检测出来。通过查阅近年来相关FCM文献，本文就流式细胞术在B淋巴细胞性白血病（B-ALL）MRD检测中的进展进行分析。

【关键词】流式细胞术;白血病;微小残留

【中图分类号】R733【文献标识码】B【文章编号】1005-0019（2019）20-0-02

急性B淋巴细胞性白血病（B-ALL）是急性淋巴细胞白血病（Acute lymphoblastic leukemia，ALL）最常见的亚型，这一型白血病的出现表明恶性转化的B淋巴系前体细胞在克隆增殖，其发病率约占成人ALL的75%。目前，经过医疗技术治疗策略的进步，经过系统化疗后70%-90%的ALL患者可完全缓解，但是如果有微小残留病（ minimal residual disease，MRD）的病人，疾病复发就有较高的几率，所以MRD是ALL患者疾病复发的独立危险因素，所以MRD的检出对于患者存活率的提高具有重要意义。

1 MRD检测的意义

目前，ALL的治疗因不断改进的治疗策略以及新型化疗药物的研发问世已经有了很大的进步，经专业系统化疗方案治疗后，患者完全缓解率可达70%-90%，3-5年无进展生存率可达60%，但ALL患者20%的疾病复发率仍然不容忽视。相关研究指出，一般情况下发病时，ALL患者体内的白血病细胞数约为1012/L，而在完全缓解后，患者体内仍残留有108-109个白血病细胞，这些残留的白血病细胞即MRD，是造成ALL复发的根本原因，而复发机率与残留的白血病细胞数量呈正比例关系，复发机率上升的同时，时间也随之缩短。德国Cave等归纳了很多白血病化疗患者的信息，得出了一个结论：有MRD者的复发时间比无MRD者要短了很多，有MRD的患者复发率也较高，是无MRD患者的5.7倍。同时Cave等研究也显示，有MRD者的死亡率是无MRD者的10倍，MRD≥10-2患者复发的危险性较MRD≥10-3患者相比会增加16倍速。据此结论，可以认为在疾病各个阶段，ALL患者复发率和死亡率都是随着残留的白血病细胞数的增加而呈上升趋势。研究认为，经过系统治疗获得完全缓解的ALL患者，若存在MRD≥10-4的情况，疾病在任何时间点均有复发的风险，因此，对MRD水平进行定期监测对于控制疾病复发，具有极其重要的意义。同时，MRD也可以辅助疾病的危险分层，根据对CpG岛甲基化联合MRD水平的测定来对对疾病进行危险度分组，将会成为未来发展的方箱，并为决策治疗提供相应的数据支撑。

2 FCM对B-ALL免疫表型的分型及在MRD监测中的准确性和可靠性

对于白血病患者来说，抗原表达会体现出不同于正常人的表达模式，而通过这一规律，分析白血病患者异常表型，可以进行白血病的免疫分型及诊断。现如今，在ALL患者的免疫分型和MRD水平监测中，FCM检测技术已被广泛应用于临床，成为适用于大多数B-ALL患者的检测技术。

国外研究者将PCR与FCM的检测结果进行对比，以评估FCM的敏感性和可靠性，该研究分别应用PCR和FCM方法，同时对62例ALL治疗获CR患者骨髓进行检测，检测结果为62例病例中，两种方法结果不一致的仅有两例，而对60例患者的检测结果均为相同，其中检出MRD≥10-4者12例，<10-4者48例，两种方法的一致性可以达到96.77%，这一结果表明两种方法具有良好的相关性。

3 FCM在B-ALL患者MRD检测中的进展及展望

经过正规治疗后的B系淋巴细胞白血病患者，在骨髓增生的阶段，也会有正常的B系足细胞存在，但是传统的单色免疫标志无法识别正常的B系祖细胞将不会被识别，为了解决这一问题，需要找到在肿瘤细胞表达的免疫表型，即白血病相关免疫表型（Leukemia associated immunophenotype，LAIP）进行FCM分析，LAIP有三种类型，第一种主要是T淋巴细胞，第二种为异常前体B淋巴细胞表型，常用的免疫标志物有CD19/CD34/CD10/CD58等，第三种是由融合基因表达的融合蛋白，而MRD检测的CD分子与融合蛋白的表达有关。因此，单色免疫标志被三色流式细胞术取代，利用三色流式细胞术检测LAIP，这样可以增加后期MRD的监测结果的可靠性和准确性，也可作为白血病诊断的依据，同时可以对于病人的疾病进展进行预测，评估复发的可能性，给与临床准确的指导，让医生能够更好地进行下一步疾病干预，减少疾病死亡率。其中主要应用的是三色和四色FCM。

用流式细胞术检测MRD的方式有很多种。国外研究者开发了一种新的方法，这种方法是用层次聚类分析进行的，跟以往所应用的传统方法有较高的关联。如果能够将这种方法和方便使用的软件结合，或许可以提高分析技术，达到自动化的全过程分析。实现全自动分析MRD的目标，使这一过程更加精确的同时，可操作性也更高。

参考文献

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