5309对不良孕产史夫妇外周血淋巴细胞培养及G显带染色体核型分析

(河南省南阳市第一人民医院生殖医学科，河南 南阳 473003)

不良孕产史为常见妊娠病理现象，主要包括习惯性流产、死胎、生育智力低下儿与畸形儿、胚胎停育、死产等，其中胚胎停育、习惯性流产为主要临床表征[1-3]。不良孕产史病因较多，包括子宫结构异常、生殖道感染、内分泌代谢异常、母体全身性疾病、免疫因素、环境因素及染色体异常[数目异常、结构异常(重复、易位、缺失、倒位、等臂染色体、插入、环状染色体等)、染色体多态性]等，其中染色体异常为最重要原因[4-6]。本研究选取我院5309对不良孕产史夫妇，进行外周血淋巴细胞培养、G显带染色体核型分析，探究不良孕产史与染色体异常的关系。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取我院2016年1月—2019年3月5309对(10618例)不良孕产史夫妇，进行外周血淋巴细胞培养、G显带染色体核型分析。临床表现为习惯性流产、染色体异常儿孕产史、胚胎停育、畸胎史等。5309对不良孕产史夫妇中，染色体异常患者684例(6.44%)，其中胚胎停育、习惯性流产398例，占58.19%(398/684)；染色体异常儿孕产史158例，占23.10%(158/684)；畸胎史50例，占7.31%(50/684)；其他78例，占11.40%(78/684)。患者均知情同意，本研究经我院伦理委员会同意批准。

1.2方法 抽取静脉血3 ml，EDTA抗凝。于淋巴细胞培养基中接种混匀的外周血(0.4 ml)，培养68～72 h(恒温箱，37℃)，加入0.1 ml秋水仙素工作液，1 h后离心(8 min，2500 r/min)，将上清液去除。加入8 ml氯化钾(KCl)(0.075 mol/L)，低渗(37℃水浴箱，30 min)。加入2 ml固定液(甲醇∶冰醋酸=3∶1)，15 min后离心，将上清液去除。加入固定液8 ml，20 min后离心，将上清液去除，加入8 ml固定液，放置在4℃冰箱过夜。滴片将置于烤箱(80℃，4 h)。将玻片置于胰酶溶液(37℃，0.25%)，消化20～30 s，以生理盐水对染色体片进行漂洗，染色5 min(Giemsa、PBS混合液)，漂洗，晾干后扫片。核型分析≥5个/例，中期分裂相记数≥20个，异常者加倍。

2 结果

684例染色体异常中，数目、结构异常184例，其中数目异常47例，超雄或超雌12例，表现为胚胎停育、畸胎史、反复性流产等；特纳或超雌嵌合体22例，表现为胚胎停育、反复性流产等；Y染色体倒位13例，表现为畸胎引产或流产。结构异常137例，72例染色体平衡易位，均为常-常染色体易位；16例罗伯逊易位，17例倒位，11例染色体增加，10例染色体重复，5例染色体缺失，6例标记染色体。染色体多态性500例，1号、9号、16号、Y染色体次缢痕增加共330例，9号染色体倒位114例，染色体随体柄增加36例，染色体随体增加20例。见表1。

表1 染色体异常与临床的关系

3 讨论

有报道称[7-9]，在我国人群中，不良孕产史患者染色体异常率为2.98%～10.8%，显著高于染色体总异常率(0.5%～1.0%)。本研究中，5309对不良孕产史夫妇染色体异常率为6.44%(684/10618)；684例染色体异常中，数目异常47例，其中超雄或超雌12例，特纳或超雌嵌合体22例，表现为反复性流产、畸胎史，胚胎停育等。其原因在于，X染色体单体致使特纳表型特征复杂，如无月经、胚胎停育、流产等[10]。Y染色体倒位13例，表现为流产、畸胎引产，其原因在于，Y染色体倒位携带者配子形成时易产生倒位环，导致不平衡配子形成，进而引起死胎、流产等[11]。

684例染色体异常中，结构异常137例，染色体易位为最主要染色体结构异常，表现为胚胎停育、畸胎、多次自然流产等不良妊娠结局。其原因在于，染色体易位携带者生殖细胞减数分裂时，通过配对、互换、分离可形成不平衡易位合子，导致不良妊娠结局(死胎、流产、畸胎、死产等)[12]。染色体倒位可产生部分缺失、重复，其致生殖异常的机制有：①配子形成时，同源染色体形成倒位圈，进而发生交换，形成异常染色体(部分缺失、部分重复)，导致不平衡配子形成，引起胎儿畸形、流产等；②常染色质重排移至异染色质区，发生染色质化，抑制某些基因表达。本研究中，染色体倒位17例，行产前诊断，无部分重复或缺失胎儿，同时，发现11例染色体增加，10例染色体重复，5例染色体缺失，6例标记染色体，这些染色体大片段重复、增加、缺失可对减数分裂造成影响，进而引起流产。

684例染色体异常中，染色体多态性500例，1号、9号、16号、Y染色体次缢痕增加共330例，114例9号染色体倒位，36例染色体随体柄增加，20例染色体随体增加。次缢痕增加指由异染色质区DNA序列(高度重复)增加，导致减数分裂时，同源染色体联会、配对受到影响，形成非整倍体配子，引起流产[13]。胡兰萍等[14]研究显示，染色体多态性qh+与复发性流产、畸形儿、胚胎停育等不良孕产史密切相关。36例染色体随体柄增加，20例染色体随体增加，其原因可能为次缢痕区着丝粒-动粒复合体(CKC)为染色体运动、均等分离的基础，染色体随体变异，使端着丝粒染色体的不分离概率增加，导致异常配子形成，干扰细胞分裂，影响胚胎发育。既往研究显示，inv(9)不涉及遗传物质丢失，不引起临床效应。本研究中，13例46，XY，inv(9)(p12q13)，均存在死胎、畸形儿史，其原因可能在于，9号染色体发生臂间倒位，由于位置效应，使松弛基因(RLX)作用减弱，进而引起生育障碍[15]。

综上可知，夫妇染色体异常为引起不良孕产史的重要因素，同时应对染色体多态性对不良孕产史的影响给予充分重视。