白药子质量标准研究

张志同，傅兴圣，朱 琳，孙晓娟

南通市食品药品监督检验中心，南通 226006

白药子为防己科植物头花千金藤（金线吊乌龟，Stephania cepharantha Hayata）的干燥块根。其分布西至陕西汉中地区和四川东部和东南部，贵州东部和南部，东至浙江、江苏和台湾，南至广西和广东[1]。白药子在我国多数省份常有临床应用，《北京市中药饮片炮制规范（2008年版）》和《江苏省中药饮片炮制规范（2002 版）》均有收载，但只有简单的理化鉴别，专属性不强，不能有效地控制白药子的质量。为此，本文拟建立白药子质量控制标准。

1 仪器与药品、试剂

1.1 仪器

戴安U3000 型高效液相色谱仪（德国Thermo Fisher 公司）；BX51 型系统显微镜及DP72 型成像系统（日本Olympus 公司）；CAP225D 电子天平（德国Sartorius 公司）；CAMAGA 薄层色谱系统（ATS-4全自动点样仪，TLC 成像系统，瑞士Camaga 公司）。

1.2 药品与试剂

千金藤素对照品（cepharanthine，纯度100%，批号：111647-200301，中国食品药品检定研究院）；硅胶G 板（进口Merck 公司）；甲醇、乙腈为色谱纯，其余试剂为分析纯；水为纯化水。

本次收集的6 批白药子样品，经南通市食品药品监督检验中心龚旭东主任中药师鉴定确认。样品信息见表1。

2 方法与结果

2.1 性状

本品为类圆形或不规则的厚片或小块。外皮暗褐色，有皱纹及须根痕。切面类白色或灰白色，可见筋脉纹（维管束），有的呈环状排列。质硬而脆，易折断，断面显粉性。气微，味苦。

表1 白药子样品来源及水分、总灰分及浸出物测定结果（%）

2.2 显微鉴别

本品粉末白色或灰白色。淀粉粒众多，单粒圆形或椭圆形，脐点点状或裂缝状；复粒由2～3 个分粒组成。木栓细胞类方形，壁薄。石细胞黄色或鲜黄色，壁厚，孔沟及层纹明显。纤维成束，淡黄色。草酸钙方晶或细小针晶存在于薄壁细胞中。见图1。

2.3 薄层色谱鉴别法

取本品粉末1g，加甲醇20mL，超声处理15min，放冷，滤过，滤液蒸干，固体物加甲醇1 mL 使溶解，作为供试品溶液；千金藤素对照品，加甲醇制成每毫升含1 mg 的溶液，作为对照品溶液。

吸取供试品溶液5 μL、对照品溶液3 μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以二氯甲烷-甲醇（8∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，用碘蒸气熏至斑点显色清晰。结果供试品色谱与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。见图2。

2.4 水分、总灰分和浸出物测定

按《中国药典》[2]四部通则对6 个批次白药子进行水分（烘干法）、总灰分和浸出物（热浸法，甲醇为溶剂）测定。结果见表1。

图1 白药子粉末显微特征

图2 白药子薄层色谱图（T：14℃，RH：50%）

2.5 含量测定

2.5.1 色谱条件 色谱柱：YMC-PACK ODS-A C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-0.1%三乙胺（75∶25）；检测波长：282 nm；柱温：30 ℃；流速：1.0 mL·min-1；进样体积：20 μL。

2.5.2 对照品溶液的制备 精密称取千金藤素对照品10.48 mg，置100 mL 量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，制成0.1048 mg·mL-1的对照品贮备液。

2.5.3 供试品溶液的制备 取本品粉末（中粉）约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20 mL，称定重量，水浴中加热回流30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.5.4 线性关系考察 分别精密吸取对照品贮备液适量，用甲醇稀释配制成10.48、20.96、31.44、41.92、52.40、104.80 μg·mL-1系列浓度对照品溶液，分别进样20 μL，记录峰面积，以浓度为横坐标，以峰面积A 为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为Y=7.402 6X-2.234 5（Y 为峰面积 值，X 为浓度），r=0.999 9。结果表明，千金藤素在10.48～104.80 μg·mL-1浓度范围内呈现良好的线性关系。

2.5.5 系统适用性试验 将对照品溶液与供试品溶液按“2.5.1”色谱条件进样分析，千金藤素保留时间约为20 min，与杂质完全分离；理论塔板数按千金藤素峰计，大于10 000。色谱图见图3。

2.6 方法学考察

图3 高效液相色谱图

2.6.1 精密度试验 精密量取浓度为104.80 μg·mL-1千金藤素对照品溶液20 μL，按“2.5.1”色谱条件连续进样6 次，测定峰面积，计算RSD 值为0.18%。

2.6.2 稳定性试验 取同一批白药子（S1）按“2.5.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.5.1”色谱条件分别在0、3、6、9、12、24、36、48 h 进样20 μL，测定峰面积，计算RSD 值为0.68%，结果表明，供试品溶液在48 h 内稳定。

2.6.3 重复性试验 取同一批白药子（S1）供试品6份，每份1.0 g，分别精密称定，按“2.5.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.5.1”色谱条件进样测定。结果千金藤素含量的RSD 为1.9%。

2.6.4 加样回收率试验 取已知含量的白药子样品（S3）9 份，每份0.5 g，分别精密称定，按高、中、低浓度（每个浓度3 份，对照品加入量与供试品中所含千金藤素量之比分别为1.2∶1、1∶1、0.8∶1）加入对照品，照“2.5.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.5.1”色谱条件进样测定。结果见表2。

表2 加样回收率试验结果（n=9）

2.7 样品测定

取6 批样品，分别按“2.5.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.5.1”色谱条件进样测定，按标准曲线法，以干燥品计算千金藤素含量。结果见表3。

表3 含量测定结果

3 讨论

3.1 薄层色谱法鉴别

采用不同硅胶G 板（merck 公司、自制），不同展开系统〔三氯甲烷-甲醇（8∶1），二氯甲烷-甲醇（8∶2）〕，不同温湿度条件（T：14℃，RH：50%；T：25℃，RH：65%；T：8℃，RH：50%）进行比较，结果表明，本实验所用薄层色谱条件耐用性好，结果稳定。

3.2 含量测定

以HPLC 理论塔板数、分离度为指标，本试验考察了不同流动相 〔甲醇-0.1%三乙胺（75∶25）[3]，乙腈-水（52∶48，含0.5 三乙胺、0.01%磷酸）[4]〕，不同色谱柱，不同提取方法（以甲醇为溶剂、超声30 min，加热回流30 min），优化色谱分析条件。结果表明，甲醇-0.1%三乙胺（75∶25）为流动相，分离效果好，理论塔板数高。

3.3 各指标测定结果

白药子样品之间的水分、总灰分、浸出物和含量测定结果有一定的差异，这与样品的采收、加工和贮藏有一定的关系。白药子的6 批样品的质量较稳定，故建议质量限度可定为：水分不得过12.0%；总灰分不得过4.0%；浸出物不得少于9.0%；按干燥品计千金藤素含量不得少于1 mg·g-1（0.10%）。

4 小 结

白药子活性成分千金藤素具有直接抗肿瘤作用[5]，同时具有升白细胞作用，用于预防和治疗肿瘤患者因放射治疗或化学治疗引起的白细胞减少症[4]。本实验运用显微鉴别法、薄层色谱法和高效液相色谱法对收集的6 批白药子药材进行定性鉴别及定量研究，初步建立了白药子质量标准；但色谱图上有两强峰，有待后续进一步研究。