HPLC法测定氨糖美辛肠溶片的溶出度

贾亦兵，陈玥昕，孔令洋

(1.济宁市食品药品检验检测中心，山东 济宁 272100 2.长春精诚生物技术有限公司，吉林 长春 130000)

氨糖美辛肠溶片为非甾体消炎药，在进入患者体内后，通过刺激和恢复透明质酸和蛋白聚糖的生物合成，从而抑制巨噬细胞产生超氧自由基及对关节软骨有破坏作用的酶，能够防止糖皮质激素对软骨细胞的损害及由某些非甾体类抗炎药物对前列腺素的合成造成的不好的影响，以及可减少损伤细胞释放内毒性因子。吲哚美辛为消炎镇痛药，通过抑制前列腺素合成发挥解热、镇痛和抗炎作用，在体内发挥吲哚美辛和氨基葡萄糖两种药物的协同作用。具有解热、镇痛、抗炎的作用，适用于强直性脊柱炎、类风湿关节炎、肩关节周围炎、风湿性关节炎颈椎病、风湿免疫科和骨科的对症治疗以及莱特尔综合征、神经痛等[1-2]。

目前，溶出度的测定方法主要有紫外-可见分光光度(UV)法和高效液相色谱(HPLC)法，近年来，HPLC法测定溶出度的品种呈现出越来越多的趋势。UV法的定量方法有对照品对照法、吸光系数法和自身对照法等方法。采用UV法测定溶出度，虽然其方法简单方便，易于操作，但是其也有一定的缺陷，比如专一性不强，灵敏度和准确度不高。现行标准收载的溶出度使用紫外吸收系数法测定，吸收系数法的优点是简单方便，常用于制剂的含量测定，无需配置对照品溶液。但是缺点是专属性不强，准确度不高，有辅料等干扰[3-5],如果杂质或辅料在测定波长处有吸收，则结果偏高。

根据试验的结果，HPLC法测定溶出度，能避免上述情况的发生，有利于药品质量的控制。比紫外法能更真实地反映药品的质量。

1 仪器和试剂

1.1 仪器 LOGAN UDT-812A-12全自动溶出度系统；岛津UV2550紫外分光光度计；安捷伦1200系列高效液相色谱仪(包含有G1310A 低压四元泵、G1316A TCC柱温箱、G1329B自动进样器、G1314B UWD可变波长紫外检测器)；Mettlor XS205DU电子分析天平；KQ-500VDE型双频数控超声波清洗器(昆山市超声设备公司)。

1.2 试剂 纯化水，冰醋酸(分析纯)，乙腈(色谱纯)，吲哚美辛对照品(批号：100258-200904，含量：99.9%，中国药品生物制品检定所)，氨糖美辛肠溶片(浙江惠松制药有限公司，批号：171108、180102、180312)。

2 试验方法

2.1 色谱条件 Agilent C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)， 0.1 mol·L-1的冰醋酸溶液-乙腈(50∶50)为流动相，柱温：35 ℃，流速：1.00 mL·min-1，检测波长为320 nm。

2.2 溶出方法 取氨糖美辛肠溶片6片，照溶出度与释放度测定法(通则0931第一法方法2)[6-7]。以0.1 mol·L-1的盐酸溶液为溶出介质，转速为100 rpm，2 h后，立即将转篮升出液面，观察氨糖美辛肠溶片没有出现裂缝或者崩解现象。然后再把转篮转移至预热至37 ℃的1 000 mL磷酸盐缓冲液(pH 6.8)中，转速保持100 rpm不变，经45 min后，将溶液取出用微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。

2.3 线性关系考察 取吲哚美辛对照品0.010 29 g，用流动相溶解并稀释成0.1 mg·mL-1的溶液，作为对照品储备液。精密量取1、2、3、5、7.5、10 mL，置100 mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。分别取20 μL进入色谱仪检测。以吲哚美辛峰面积为纵坐标，以浓度为横坐标，得回归方程为Y= 76 959.7X+2 269.7，r=0.999 9(n=6)。吲哚美辛浓度在1.03～10.3 μg·mL-1浓度范围内，浓度与峰面积呈良好的线性关系。

2.4 辅料干扰试验 取相当于一粒样品的辅料的量的辅料，置100 mL的容量瓶中，用溶出介质稀释到刻度，摇匀。用微孔滤膜过滤，取续滤液。照“2.1”项下的色谱条件，在吲哚美辛主峰保留时间±10%处未检测到干扰峰。说明在该色谱条件下，辅料对其溶出量无影响(见图1)。

2.5 稳定性试验 取“2.2”项下的供试品溶液，精密量取20 μL，注入液相色谱仪，每小时进样1次，测定吲哚美辛的峰面积，共考察12 h，峰面积RSD为0.4%。结果表明，在12 h内供试品溶液的性质稳定(见图1)。

图1 辅料空白色谱图

2.6 回收率试验 分别精密称取样品与对照品及 3 份处方配比量的辅料，制成相当于标示量的80%、100%、120% 的模拟片各3份，置于转篮中，转移至预热至37 ℃的1 000 mL磷酸盐缓冲液(pH 6.8)中，转速为100 rpm，经过45 min，取溶液滤过，取续滤液作为供试品溶液。另精密称取25 mg吲哚美辛对照品，置100 mL量瓶中，加50 mL甲醇溶解(必要时可加热促其溶解，放冷后)，加入 pH 6.8 磷酸盐缓冲液稀释至刻度，摇匀。量取 5.00 mL，置于 50 mL 量瓶中，加溶出介质将其稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。取对照品溶液和供试品溶液20 μL，注入液相色谱仪，按“2.1”项下条件测定，计算回收率，结果见表1。试验结果表明：回收率良好，平均回收率为99.9%(RSD=0.3%，n=9)。

表1 回收率试验测定结果

2.7 供试品溶出度测定 紫外分光光度法：取微孔滤膜过滤后的续滤液作为供试品溶液，在(320±3)nm 的波长下测定吸光度，根据标准所规定的吸收系数为196，计算氨糖美辛肠溶片中吲哚美辛的溶出量。

高效液相色谱法：取过滤后的续滤液作为供试品溶液，精密量取20 μL，注入液相色谱仪，照含量测定法进行测定，结果见图2、表2。

3 讨论

3.1 与原标准相比，新的溶出度测定方法灵敏度高，专属性高，准确度高。如表3所示，紫外法的溶出结果明显较高，关键因素很可能是辅料在该波长下有吸收度，高效液相色谱法可以很好地避免这一现象，赋形剂的质量不同，紫外吸收影响的程度也不同。

3.2 测得3批样品的含量为97.6%、97.2%、96.8%，用HPLC和紫外法测得的溶出度如上表3，发现溶出度结果与自身含量差异过大的情况逐渐增多，尤其是胶囊剂、片剂等剂型的品种。推测为药品辅料的质量参差不齐，从而对药品检验产生一定的干扰，此点应当给以重视。

3.3 本文对氨糖美辛肠溶片中吲哚美辛的溶出度的进行直接测定，可在同一色谱条件下与含量同时进行测定，准确简单，节省了人力物力，提高了工作效率[8]。

4 结论

该方法准确、灵敏，可以为氨糖美辛肠溶片的质量控制提供依据。