绵阳北川羌族肺腺癌患者EGFR基因突变特点的研究*

樊伶俐，田娟娟，张小波，张羽，杜小波

621000 四川 绵阳，绵阳市中心医院 肿瘤科(樊伶俐、张羽、杜小波)；622750 四川 绵阳，北川羌族自治县人民医院 内科(田娟娟)；622750 四川 绵阳，北川羌族自治县第三人民医院 内科(张小波)

据2018年全球癌症统计数据显示，肺癌占癌症总发病率的11.6%，死亡患者占癌症导致死亡人数的18.4%，仍然是全世界和我国发病率及死亡率最高的恶性肿瘤，肺腺癌是最常见的病理类型[1]。随着技术的进步，新兴的分子靶向治疗已经成为目前治疗肺癌的有力手段[2-3]，而表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)已经成为目前标准指南推荐的肺癌分子靶向治疗中最主要的靶点[4-6]，携带某些EGFR突变的非小细胞肺癌患者从这种靶向治疗中受益显著。研究发现，常见的突变外显子19缺失、L858R以及罕见的突变S768I、G719、L861Q为EGFR酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor,TKI)的敏感型突变，而T790M和外显子20插入突变为耐药型突变[7-9]。因此，检测非小细胞肺癌患者的EGFR基因突变情况对临床治疗具有重要意义。已经有多项研究指出[10-13]，EGFR突变率和突变类型在不同地域、不同种族的人群存在较大差异。羌族是我国少数民族之一，有着独特的文化和生活习俗，既往也有研究证实了环境和遗传可以交互作用，从而导致不同民族间同一疾病的发病率和严重程度不同[14]。本实验旨在研究四川绵阳北川地区的羌族肺腺癌患者EGFR突变的特点，以便为羌族肺腺癌患者的个体化治疗提供基因学的依据。

1 资料与方法

1.1 研究对象

2015年1月至2019年3月期间收集绵阳市中心医院58例、北川县人民医院50例和北川县第三人民医院12例，共120例羌族肺腺癌患者，其中有5例为腺鳞癌。120例患者中有初治患者112例，化疗后患者8例。本研究获绵阳市中心医院伦理委员会批准，所有患者均签署知情同意书。收集患者的临床资料，包括性别、年龄、吸烟状态、肿瘤大小、有无淋巴结转移、肿瘤分期、肿瘤分化程度等。其中男性64例，女性56例，年龄32～86岁，中位年龄56岁(表1)。

1.2 研究方法

120例标本中有癌组织108例，胸腹水9例，血液3例。108例组织标本中有87例来源于原发灶，21例来源于转移灶。将所有患者的病理标本送至绵阳市中心医院病理科，采用QLAamp DNA FFPE提取试剂盒(QIAGEN)提取样本DNA，采用NanoDrop 2000分光光度仪(Thermo Fisher)检测DNA纯度和浓度，以A260/A280在1.8～2.0之间视为合格。统一提取DNA后，用武汉友芝友公司生产的EGFR基因突变试剂盒，采用扩增阻滞突变系统方法，检测EGFR的21个位点的突变情况，包括常见的外显子19缺失突变，外显子21的L858R和L861Q突变，外显子18的G719A、G719S和G719C突变，外显子20的插入突变、S768I和T790M突变等。将EGFR突变状态与患者临床病理特征进行分析比较。

1.3 研究指标

肺腺癌的诊断均由两位病理科医生确认。患者的肿瘤分期按照国际抗癌联盟第八版肺癌TNM分期，EGFR的18、19、20、21号外显子至少一项有突变为突变型，否则为野生型。

1.4 数据分析

数据分析采用SPSS 21.0 软件，组间率的比较用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 EGFR突变位点检测结果

120例羌族肺腺癌中EGFR突变共57例，野生型63例，总突变率47.5%，其中L858R和19号外显子缺失的突变率最高，分别占52.6%(30例)和42.1%(24例)，另外有L861Q突变2例(3.5%)，20号外显子插入突变1例(1.8%,表1)。

2.2 EGFR 突变与临床特征的关系

女性肺腺癌患者EGFR突变率显著大于男性(60.7%vs35.9%)；不吸烟患者EGFR突变率大于吸烟患者(56.4%vs31.0%)，差异均有统计学意义(P<0.05)。以患者年龄、肿瘤大小、淋巴结有无转移、肿瘤分期与肿瘤分化程度分组后，EGFR突变率差异均无统计学意义(P>0.05,表1)。

表1 肺腺癌EGFR突变状态与临床病理特征的关系(n)

Table 1. Association between EGFR Mutations and Clinicopathological Characteristics in Lung Adenocarcinoma(n)

VariableOver-allEGFRmutations Wild typeχ2PGender Male6423417.35230.007 Female563422Age(yrs) <607834441.36640.242 ≥60422319Smoking history Smokers4213297.09500.008 Non-smokers784434Tumor size(cm) ≤35227250.71990.396 >3683038Lymph node me-tastasis Yes5731262.06440.151 No632637Differentiation Well176112.39780.302 Moderately573126 Poorly462026TNM stage I-II3216160.10940.741 III-IV884147

EGFR:Epidermal growth factor receptor.

3 讨 论

我国是一个多民族国家，其中羌族人口大约有32万，绵阳北川是全国唯一的羌族少数民族自治县，茂县、理县、汶川等其他地区也散在分布有羌族。本研究选取绵阳北川地区的羌族肺腺癌患者为研究对象，分析其EGFR基因的突变率及与临床特征的相关性。目前国内研究EGFR突变情况的对象多是汉族，其次是维吾尔族，尚无针对羌族的研究。我国幅员辽阔，肺癌 EGFR 突变率在不同地区、不同人种间有一定的差异性[10-13]。因此，有必要根据地方特色研究EGFR基因突变发生率，为今后对EGFR抑制剂的选择提供临床依据。既往有研究显示，亚洲肺癌患者的EGFR突变率高于欧美地区[15]，而我国的汉族肺癌患者的EGFR突变率则高于维吾尔族[11-12]。亚洲人群的EGFR 突变率约为48%～63.3%[16-17],欧美地区的EGFR 突变率约为10%[18]。王秀丽等[12]的研究显示维吾尔族的EGFR突变率为15.8%，明显低于汉族患者(突变率为45.7%)，而与西方国家相接近。本研究发现，绵阳北川地区羌族肺腺癌 EGFR 突变率为47.5%，明显高于维吾尔族的EGFR突变率，而与亚洲人群和中国汉族人群的EGFR突变率大体一致，该差异反映了不同民族间的肿瘤遗传学差异。

目前，国内外有研究发现不同地区的EGFR 突变位点存在一定的差异，但总体上以 19、21 号外显子突变为主[15]。国内大多研究[12,19-20]报道肺癌EGFR突变以19号外显子突变率较高。本次研究的人群为四川绵阳地区的羌族，发现肺腺癌EGFR 基因突变虽然仍以19、21 号外显子突变为主，但不同的是 21 号外显子突变率较 19 号外显子突变率稍高(分别为 52.6%，42.1%)，这与杨启英等[21]报道青海地区和魏丹凤等[22]报道四川成都地区的肺癌EGFR突变情况一致。有研究发现，在EGFR 基因中，19 号外显子缺失突变的肿瘤较 21 号外显子突变的肿瘤对TKIs的反应更为敏感[23-25]。该差异提示种族可能决定肿瘤遗传学背景的差异，进而影响肿瘤患者的预后及对治疗的反应。

在本研究中，通过分析肺腺癌 EGFR 突变状况及其与临床特征的关系，我们发现绵阳北川地区羌族肺腺癌 EGFR 突变以女性、不吸烟患者为主，而与患者的年龄、肿瘤大小、淋巴结有无转移、肿瘤分化程度、肿瘤分期等无明显直接关系，这与既往研究[26-30]总体上报道的肺腺癌EGFR 突变状况相一致。综上所述，本研究证实四川绵阳羌族肺腺癌的EGFR突变率较高，以19、21 号外显子突变为主，EGFR突变率与性别、吸烟状况有关，而与患者年龄、肿瘤大小、淋巴结有无转移、肿瘤分化程度、分期均无明显相关性。本研究是第一项针对少数民族羌族肺腺癌患者EGFR基因突变特点的研究，初步显示羌族人群EGFR基因状态与汉族人群大体一致，此结论需控制变量后，扩大样本量进一步研究论证。

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