石斛提取液对斜纹夜蛾引诱效果评价

王诗琪 王占娣

摘要  [目的]评价石斛提取物测定斜纹夜蛾幼虫行为的调节作用。[方法]采用热回流法，根据溶剂的极性由小到大依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、无水乙醇、蒸馏水对石斛进行提取，利用Y形嗅觉仪测定石斛提取液对斜纹夜蛾4～5龄幼虫的引诱效果。[结果]石斛的石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、无水乙醇、蒸馏水提取液中均存在有对斜纹夜蛾幼虫具有明显引诱效果的活性成分。[结论]石斛提取物可用于斜纹夜蛾绿色防控产品的开发。

关键词石斛;斜纹夜蛾;植物源;引诱

中图分类号：S433.4文献标识码：A文章编号：2095-3305（2019）03-010-02

DOI： 10.19383/j.cnki.nyzhyj.2019.03.005

斜纹夜蛾[Spodoptera litura（Fa？鄄bricius）]属鳞翅目夜蛾科迁飞性害虫，其寄主范围广，主要取食十字花科植物，可严重危害植物，导致蔬菜的产量和品质下降。目前斜纹夜蛾的防治方法主要为农业防治、化学防治、物理防治等。其中，农业防治主要措施为人工铲除杂草和人工捕虫，这些方式需要耗费大量的人力和财力[1];化学防治易在农作物上残留大量的农药，使昆虫产生抗性，污染环境[2];物理防治的效果不理想[3]。采用昆虫性信息素进行害虫监测和无公害防治具有活性高、特异性强、无毒、无污染、不杀伤天敌、使用简便、成本低廉等优点[4]，但存在合成成本高、诱集雄虫量不足的问题[5]。从天然产物中寻找替代性信息素的物质，成为斜纹夜蛾绿色防治研究的热点。目前研究发现，蓖麻、番茄、白菜和薄荷[6]等植物对斜纹夜蛾均具有一定的诱集作用。这些植物都是斜纹夜蛾的寄主，由此可知，寄主植物中存在有防治斜纹夜蛾的活性物质。

铁皮石斛（Dendrobium officinale）属兰科，表皮呈铁绿色，是多年生附生草本植物，二级保护植物。铁皮石斛是珍贵中药石斛品种，药食同源的滋阴补品。近年来，铁皮石斛在云南种植面积逐渐增加，斜纹夜蛾也逐渐成为危害石斛的主要害虫[7]。现代研究发现石斛在医药行业应用较广泛，其提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、黏质沙雷氏菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、小肠结肠炎耶尔森菌及沙门菌具有明显的抑制效果[8-10]，但其在农业害虫防治方面的研究较少。因此，笔者选取石斛作为供試材料，采用5种溶剂提取其活性成分，评价提取液对斜纹夜蛾4～5龄幼虫行为的调节作用，为斜纹夜蛾绿色防控产品的开发奠定理论基础。

1材料与方法

1.1试验材料

1.1.1供试昆虫斜纹夜蛾饲养条件为温度（27±1）℃，相对湿度为60%～70%，光周期为L∶D=12∶12（光12 h∶暗12 h）。供试昆虫为4～5龄斜纹夜蛾幼虫。

1.1.2溶剂与仪器供试溶剂有石油醚、无水乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷、蒸馏水。供试仪器有大气采样仪、旋转蒸发仪、索氏提取器、Y形嗅觉仪。

1.1.3供试植物石斛购于市场，室内盆栽1月以上，剪掉地上部分，自然晾干，备用。

1.2试验方法

1.2.1提取液的制备采用热回流法，利用索氏提取器，按照极性由小到大依次采用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、无水乙醇和蒸馏水提取石斛中的活性成分，药液比为1∶10。提取液利用旋转蒸发仪，减压浓缩至10 ml，浓缩液作为母液，用相应的试剂分别稀释0倍（母液）、1倍、2倍、3倍、5倍，4℃冰箱保存，备用。

1.2.2风洞试验利用Y形嗅觉仪，直径为1.3 cm，臂长为10 cm。以不同稀释倍数的溶液为处理组，相应的提取溶剂为对照（CK），分别取20 μl，滴加到直径为0.8 cm的圆形滤纸片中，自然挥干溶剂，分别放在Y形管的2个支臂内。选取饥饿6 h以上的4～5龄的活跃幼虫，放入Y形管的主管内。设定风速为5 cm/s，20 min后记录2个支管里面幼虫的数量，每个处理4次重复。

1.2.3数据处理   试验数据用SAS 8.0软件进行分析，用x2分析空白组与对照组引诱效果，用Duncan的ANOVA比较不同处理间是否具有显著差异，评价不同处理引诱效果。

反应率（%）=处理组虫量或CK组虫量/20×100（1）

2结果与分析

以石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、无水乙醇、蒸馏水为试剂，提取石斛中的活性物质，采用Y形嗅觉仪评价提取液对斜纹夜蛾4～5龄幼虫行为的调节作用。结果显示，以石油醚为提取试剂，提取液稀释1倍和3倍时，处理组斜纹夜蛾幼虫的数量明显高于CK组，其中，提取液稀释1倍时，处理组与CK组间存在极显著性差异，表明石斛的石油醚提取液稀释1倍和3倍对斜纹夜蛾幼虫具有明显的引诱效果（图1A）。

采用二氯甲烷提取石斛，以其母液及其3倍稀释液为处理时，斜纹夜蛾幼虫数量与CK组存在显著性差异，特别是滴加母液的处理组与CK组间存在极显著性差异，其他测试浓度处理组与CK组间幼虫数量差异不显著（图1B）。表明采用二氯甲烷提取石斛，其提取液母液及其3倍稀释液对斜纹夜蛾幼虫具有明显的引诱效果，其中，母液对斜纹夜蛾的引诱效果最好。

以乙酸乙酯为提取试剂，其稀释倍数在0～3倍范围内，斜纹夜蛾幼虫的数量随着稀释倍数的增加而增加， 其稀释倍数为1倍和3倍时，处理组斜纹夜蛾幼虫的数量明显高于CK组。表明乙酸乙酯提取液中存在对斜纹夜蛾有引诱效果的活性成分，其提取液稀释3倍对斜纹夜蛾幼虫的引诱效果最好（图1C）。

随着无水乙醇提取液稀释倍数的增加，处理组斜纹夜蛾虫口数量增加。提取液稀释2倍和3倍时，处理组虫口数量与CK组间存在极显著性差异（图1D）。表明石斛的无水乙醇提取液对斜纹夜蛾4～5龄幼虫具有引诱效果。

以水为提取试剂，提取液稀释0～3倍时，斜纹夜蛾幼虫的数量随着提液稀释倍数的降低而增加。提取液稀释0倍时，处理组虫口数量明显高于CK组（图1E）。表明石斛的水提取液母液对斜纹夜蛾幼虫具有明显的引诱效果。