仪器法在检测网织红细胞中的应用价值

陈述英

江西省萍乡市芦溪县妇幼保健院 （江西萍乡 337200）

网织红细胞（reticulocyte，RET）是一种尚未成熟的红细胞，主要经骨髓进入血液，并在24～48 h内合成约20%的血红蛋白，其是有效评价机体内骨髓造血干细胞功能的重要指标，在血液性疾病的临床诊断及病情评估中具有较高的应用价值[1]。近年来，随着临床对快速诊疗需求的不断提高，传统手工法检测RET逐渐被自动化仪器检测RET技术所取代，仪器法检测具有速度快、可重复等特点，与手工法的耗时长比较具有一定优势，但目前临床尚未有统一的标准检测系统，对仪器检测结果准确性的评估尚不完善，因此其临床应用存在一定争议性[2-3]。本研究分析仪器法在检测RET中的应用价值。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018年5月至2019年2月江西省萍乡市芦溪县妇幼保健院72例住院及门诊患者，其中男42例，女30例；年龄15～72岁，平均（38.68±5.14）岁；住院患者39例，门诊患者33例。所有标本均为空腹采集的抗凝静脉血，均于当天完成相关检测。

1.2 方法

1.2.1 标本制作

抽取患者空腹静脉血2 ml，放入含有乙二胺四乙酸二钾（EDTA-K2）抗凝剂中进行抗凝处理，混合均匀后，在室温下放置10～20 min，然后进行检测（所有标本均于当天完成相关检测）。

1.2.2 仪器法检测

采用Sysmex XE-2100全自动血液分析仪及其配套的相关试剂，以Sysmex XE-2100自动模式进行标本检测，每份标本连续检测2次后，取平均值。

1.2.3 手工法检测

严格参照试剂厂家关于RET染色液的相关使用说明操作进行，取清洁干燥试管1支，滴入2滴由珠海贝索生物技术有限公司提供的RET生产染色液（成分为新亚甲蓝），并加入经过EDTA-K2抗凝处理的标本血液2滴，遵照1：1比例混合。在室温下静置20 min后取出1滴制片，并由2名检验科室经验丰富的人员采取双盲法分别计数1 000个红细胞内含有的RET，换算成百分比，以%表示，求其平均值。

根据患者血红蛋白值不同（血红蛋白＞120 g/L、90 g/L≤血红蛋白≤120 g/L、血红蛋白＜90 g/L）分为高、中、低3个级别，每个级别标本24份，将每份标本采用仪器法及手工法分别测定5次RET，取其平均值。

1.3 临床评价

比较仪器法与手工法测定RET的结果。

1.4 统计学处理

采用SPSS 24.0统计软件进行数据分析，计量资料以±s表示，采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 仪器法与手工法检测RET结果比较

仪器法检测RET为（3.65±1.24）%，手工法检测RET为（3.35±1.18）%，差异无统计学意义（t=1.487，P=0.139）。

2.2 仪器法与手工法检测不同浓度血红蛋白RET结果比较

仪器法检测高、中、低浓度血红蛋白RET结果与手工法比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 仪器法与手工法检测不同浓度血红蛋白RET结果比较（%，±s）

表1 仪器法与手工法检测不同浓度血红蛋白RET结果比较（%，±s）

检测方法 高浓度（24份） 中浓度（24份） 低浓度（24份）仪器法 1.28±0.79 1.77±0.76 3.98±2.74手工法 1.27±0.79 1.72±0.74 4.00±2.81 t 0.044 0.231 0.025 P 0.965 0.818 0.980

3 讨论

手工法是应用于RET检测最传统的方法，虽具有检测时间长、重复性差等缺点，但仍是目前临床用于RET检测的一种有效复核方法[4]。而近年来，随着检验技术的不断发展与进步，检测RET的全自动血液分析仪逐渐取代传统手工检测法，并广泛应用于临床各类血液性疾病检测中。

仪器法检测重复性优于传统手工法，分析主要原因为血液分析仪在进行RET检测时可有效控制质量，本研究中仪器法检测采用Sysmex XE-2100全自动血液分析仪进行，采用半导体激光流式原理及细胞化学染色技术，提高了检测速度及临床应用的便捷性。全自动血液分析仪使用新型的聚次甲基荧光染料进行染色，其中含有与次甲基相连的杂环核，因此当染料与核酸或膜有效结合后，将会干涉分子运动，继而吸收更多的光，继而在检测过程中发生强荧光。RET检测过程中，应首先处理稀释液，促使血液中白细胞及红细胞增大，利于检测的染色，由于不同细胞中RNA含量存在一定差异性，因此可通过染色有效区分RET及红细胞，并根据DNA及RNA含量不同区分白细胞，继而利用不同细胞荧光染色，于激光照射下产生不同强度的侧向光及侧向散射光、前向散射光，并通过不同的通道对RET进行检测[5]。本研究结果显示，仪器法与手工法RET检测结果无明显差异，且仪器法与手工法在不同浓度血红蛋白中的RET检测结果亦无明显差异，表明仪器法应用于RET临床检测中具有较高的准确性，可为血液性疾病的诊断及鉴别提供全新的检测指标。

与传统手工法比较，仪器法具有检测速度快的特点，每小时可检测约150个标本，且检测模式多样，检测灵活，可满足对不同血液标本检测的需求，应用范围广。此外，所用的仪器具有恒定的温度及染色时间，可有效避免手工法中人为因素的不利影响，且消除了检测中抗凝剂的影响，因此具有检测速度快、可重复、干扰因素少、操作简便等特点，可作为临床血液检测的常规方法，但仪器法检测成本较高，无法在基层医院及经济困难患者中得到广泛推广[6]。此外，血小板团块等可影响仪器检测结果，且仪器法临床应用中针对RET检测结果较高的患者，应结合人工法再次进行检测，以保证检测结果的准确性，降低漏诊率及误诊率。

综上所述，仪器法与手工法检测RET结果无明显差异，两者均可应用于临床RET检测中，但前者具有更好的重复性。