肺炎支原体检测中应用胶体金法与被动凝集法的优劣差异

广东省阳江市妇幼保健院（529500）冯王富 冯梅华 佘意贵

肺炎支原体肺炎（mycoplasma pneumonia）是临床上较为常见的一种非典型肺炎，其病原体为肺炎支原体，好发于儿童和青少年，症状以顽固性咳嗽为主要特征，其病理表现以间质性肺炎为主[1]。由于支原体肺炎的症状和体征与普通细菌性肺炎相似，因而常导致误诊，造成抗生素的使用不当甚至滥用，使患者症状反复迁延不愈，甚至诱发哮喘等并发症[1]。因此近年来对支原体肺炎的病原学检测研究逐渐增多，其中酶联免疫吸附试验（ELISA）、被动凝集法和胶体金法等血清学抗体检测应用较多，而后两者因具有快速简便易操作的优点因而应用广泛[2]。本研究对比了应用胶体金法与被动凝集法在肺炎支原体检测中的优劣差异，现报道如下。

1 材料方法

1.1 一般材料 选取我院2015年3月～2017年10月就诊的肺炎患者220例，其中男122例，女98例，年龄5～12岁，平均(8.38士2.77)岁；病程6～18d，平均(12.68士5.39)d，体重指数（BMI）平均（19.11±2.06）kg/m2，所有患者入院后经支原体（MP）快速液体培养后证实其中属于肺炎支原体肺炎患者110例，非支原体肺炎患者110例。本研究得到医院伦理委员会批准；患者及其家属签署知情同意。

1.2 检测方法 所有患者采集空腹静脉血以备检测。胶体金法：采用肺炎支原体抗体检测试剂盒（胶体金法）（上海古朵生物科技有限公司，24人份/盒）。检测方法：①滴入二滴试剂Ⅰ于反应板中央孔中，待完全渗入；②滴入100µl血清于反应板孔中，待完全渗入；③滴加三滴试剂Ⅱ于反应板孔中，待完全渗入；渗入三滴试剂Ⅰ于反应板孔中，待完全渗入。结果：反应板孔中C端出现红色圆斑，T端出现红色圆斑，为肺炎支原体抗体阳性；反应板孔中C端出现红色圆斑，T端不出现红色圆斑为肺炎支原体抗体阴性。反应板孔中C端不出现红色圆斑，或C端、T端均不出现红色圆斑，则试剂盒失效[3]。

附表1 两种检测方法灵敏度比较[例(%)]

附表2 两种检测方法特异度比较[例(%)]

被动凝集法：采用肺炎支原体抗体诊断试剂盒（赛乐迪亚-麦可II，富士瑞必欧株式会社，25人份/盒），操作方法严格按说明书进行，结果判定：颗粒呈纽扣状聚集，呈现出外周边缘均匀且平滑的圆形为阴性；粒子形成小环状，呈现出外周边缘均匀且平滑的圆形为（±）；粒子环明显增大，其外周边缘不均匀且杂乱地凝集在周围，为（+）；凝集粒子在底部整体上呈膜状延展为（++）[3]。

1.3 疗效评价 记录肺炎支原体肺炎患者在两种检测方法下阳性和阴性例数，则灵敏度=阳性数/总数×100%；记录非肺炎支原体肺炎患者在两种检测方法下阳性和阴性数，则灵敏度=阴性数/总数×100%。采用约登指数评价诊断准确率，约登指数=灵敏度+特异度-1[4]。

1.4 统计学方法 拟采用SPSS17.0软件对数据进行分析，计数资料采用[例(%)]表示，组间比较采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两种检测方法灵敏度比较 在110例支原体肺炎患者中，胶体金法检测的灵敏度为75.55%，被动凝集法检测的灵敏度为91.82%，胶体金法检测灵敏度显著低于被动凝集法，差异具有统计学意义(χ2=11.73，P＜0.01)。见附表1。

2.2 两种检测方法特异度比较 在110例非支原体肺炎患者中，胶体金法检测的特异度为70.9%，被动凝集法检测的灵敏度为83.64%，胶体金法检测特异度显著低于被动凝集法，差异具有统计学意义(χ2=5.07.73，P=0.02)。见附表2。

2.3 两种检测方法约登指数比较依据上述两表，胶体金法的灵敏度为74.55%，特异度为70.91%，则其约登指数为0.45；被动凝集法的灵敏度为91.82%，特异度为83.64%，则其约登指数为0.75，被动凝集法的约登指数高于胶体金法。

3 讨论

肺炎支原体（MP）是支原体肺炎的主要病原体，也是呼吸道感染的常见病原体，MP感染与细菌病毒等因素感染引起的肺炎症状体征，在肺部影像学表现上都极为相似，难以鉴别诊断。因此实验室病原体检测在支原体感染中极为重要。WHO推荐MP的分离培养为诊断的金标准[5]，但是实际应用中该方法培养时间长，灵敏度较低，培养条件要求高，因而难以实践运用。研究表明抗MP-IgM是人体受支原体感染后的特异性抗体，因而通过实验室血清学检测抗MP-IgM对于诊断MP感染具有重要意义，除了传统的冷凝集试验方法外，近年来随着对MP抗体的检测方法研究的深入，诸如补体结合试验、被动颗粒凝集法、酶联免疫吸附试验以及胶体金法等检测方法逐渐运用于临床，效果良好。

胶体金法即金标免疫斑点法（Dot Immungo Gold Method, DM）是应用于各种病原体抗体检测的一种新型的免疫标记技术。胶体金是由氯金酸在还原剂的作用下聚合成一定大小的金颗粒，并由于静电作用成为稳定的胶体状态，该胶体在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子正电荷基团牢固结合，且不影响蛋白质的生物特性；因而蛋白质抗体即可被带有颜色的胶体金颗粒标记出来[6]。被动凝集法的原理是将表面吸附有MP抗原的明胶颗粒替代由动物红细胞制成的致敏人工明胶颗粒，再与血清中存在的MP抗体在适宜的电解质溶液条件发生特异性的凝集反应，从而标记处相应的抗体[6]。

本研究表明：胶体金法检测的灵敏度和特异度均显著低于被动凝集法；胶体金法检测的约登指数也低于被动凝集法，说明被动凝集法较胶体金法具有更高的诊断准确度。分析原因认为：胶体金虽然在特定环境下可以结合抗体蛋白，但是难以保证对特定蛋白结合的特异性，因此其灵敏度和特异度均较低，且当IgM含量较少时，检测结果会出现假阴性。被动凝集法采用诊断试剂盒直接检测，操作简便迅速，结果判读容易；其用带有MP抗原的明胶颗粒替代动物红细胞所制的人工明胶颗粒，因而可以消除动物红细胞载体引起的非特异性凝集反应，因此其特异性高，灵敏度也增高，此外血清MP抗体的滴度与患者病情呈正相关，因此更有助于提高诊断的准确性。可见被动凝集法检测肺炎支原体感染，更为准确可靠，这也与黎翠翠、李蔼文等人的研究一致[7]。

综上所述，被动凝集法检测患者血清支原体抗体的灵敏度和特异度都显著高于胶体金法，其约登指数也高于胶体金法，具有较高的诊断准确度，值得推广应用。