甲胎蛋白、胸苷激酶1、Dickkopf相关蛋白1联合检测在原发性肝癌中的诊断价值

陈壮荣，黄伟，陈灵芝，李多善

海南西部中心医院综合内科，海南 儋州571700

原发性肝癌是临床上常见的恶性肿瘤之一，具有发病率高、病情进展速度快、病死率高及恶性程度强等特点，即使对患者行根治性切除术，术后5年内患者仍有可能出现复发和转移，而一旦发生复发和转移，患者的生存率极低[1]。早期原发性肝癌的临床症状不明显，大部分患者确诊时已发展到了晚期阶段，错过了治疗的最佳时机，因此，早期诊断和治疗可有效提高原发性肝癌患者的生存率[2]。临床上，血清甲胎蛋白（α-fetoprotein，AFP）、胸苷激酶1（thymidine kinase 1，TK1）、Dickkopf相关蛋白1（dickkopf WNT signaling pathway inhibitor 1，DKK1）三项指标单独诊断原发性肝癌具有较低的灵敏度和特异度，且容易出现误诊和漏诊的现象，而三项指标联合检测可提高原发性肝癌的临床检出率，为原发性肝癌的诊断提供重要的参考依据[3]。本研究探讨血清AFP、TK1、DKK1单独及联合检测在原发性肝癌中的诊断价值，旨在为原发性肝癌的诊断提供参考依据，现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取2016年8月至2018年4月海南西部中心医院收治的120例原发性肝癌患者作为原发性肝癌组，90例良性肝病患者作为良性肝病组。纳入标准：①符合原发性肝癌或良性肝病的诊断标准[4]；②无精神疾病，依从性佳。排除标准：①合并严重的糖尿病；②合并支气管哮喘、肺结核、肺部肿瘤等疾病；③存在免疫缺陷。另外，选取同期海南西部中心医院80例健康体检者作为健康对照组。原发性肝癌组中，男68例，女52例；年龄为34～66岁，平均年龄为（49.6±2.3）岁。良性肝病组中，男50例，女40例；年龄为35～66岁，平均年龄为（49.2±2.0）岁。健康对照组中，男45例，女35例；年龄为35～65岁，平均年龄为（48.6±1.9）岁。3组受试者的性别和年龄比较，差异均无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究获得医院医学伦理委员会的批准，所有受试者均对本研究知情同意并签署知情同意书。

1.2 检测方法

避免用药后对检测结果的准确度和客观性造成影响，所有患者于治疗前均抽取清晨空腹肘部静脉血4 ml，并将其置于带有惰性分离胶的真空采血管中，静置于室温环境中约30 min后，以4000 r/min的离心速度分离血清，10 min后，置于-25℃的环境下保存待测。应用DX1800 Access化学发光免疫分析仪检测血清AFP水平，检测试剂盒购自上海罗氏诊断产品有限公司；应用CIS-1型化学发光数字成像分析仪检测血清TK1水平，检测试剂盒购自深圳华瑞同康生物技术深圳有限公司；应用DNM-9602G型酶标分析仪采用酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）检测血清DKK1水平，ELISA试剂盒购自上海抚生实业有限公司。上述操作均严格按照试剂盒的说明书进行[5-6]。

1.3 观察指标及判定标准

观察3组受试者血清中AFP、TK1、DKK1的含量。以检测指标的临床正常值为临界参考值，超过该界限即为阳性。AFP、TK1、DKK1阳性判定标准：AFP＜10.0 ng/ml为正常，≥10.0 ng/ml定义为阳性；TK1＜2.0 pmol/L为正常，≥2.0 pmol/L定义为阳性；DKK1＜2.0 ng/ml为正常，≥2.0 ng/ml定义为阳性。以血清学检查结果为“金标准”，分析AFP、TK1、DKK1单独及联合检测对原发性肝癌的诊断价值。灵敏度=真阳性例数（/真阳性+假阴性）例数×100%，特异度=真阴性例数（/真阴性+假阳性）例数×100%，准确度=（真阴性+真阳性）例数（/真阳性+真阴性+假阳性+假阴性）例数×100%。AFP、TK1、DKK1联合检测结果的判定：任一指标检测结果为阳性，则判定联合检测结果为阳性；所有指标检测结果均为阴性，则判定联合检测结果为阴性。

1.4 统计学方法

采用SPSS 18.0软件对数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验；计数资料以例数和率（%）表示，组间比较采用χ2检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 血清AFP、TK1、DKK1水平的比较

3组受试者血清中AFP、TK1、DKK1水平比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）。原发性肝癌组患者血清中AFP、TK1和DKK1的水平均高于良性肝病组和健康对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。良性肝病组患者上述指标水平均高于健康对照组患者，差异均有统计学意义（P＜0.05）。（表1）

表1 3组受试者血清中AFP、TK1、DKK1水平的比较（±s）

表1 3组受试者血清中AFP、TK1、DKK1水平的比较（±s）

注：a与原发性肝癌组比较，P＜0.05；b与良性肝癌组比较，P＜0.05

组别原发性肝癌组（n=120）良性肝病组（n=90）健康对照组（n=80）χ2值P值AFP（ng/ml）324.1±91.1 61.2±5.1a 6.2±7.3a b 16.584 0.032 TK1（pmol/L）5.6±1.9 1.5±5.9a 0.8±0.2a b 16.591 0.034 DKK1（ng/ml）3.9±1.5 1.6±0.5a 1.3±0.1a b 16.475 0.036

2.2 血清AFP、TK 1、DKK 1阳性表达情况的比较

3组受试者血清中AFP、TK1、DKK1的阳性表达情况比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）。原发性肝癌组患者血清中AFP、TK1和DKK1的阳性表达率均高于良性肝病组和健康对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。良性肝病组患者上述指标的阳性表达率均高于健康对照组患者，差异均有统计学意义（P＜0.05）。（表2）

表2 3组受试者血清中AFP、TK1、DKK1阳性表达情况的比较[n（%）]

2.3 AFP、TK 1、DKK 1单独及联合检测对原发性肝癌的诊断效能

在单项诊断和联合诊断中，AFP、TK1、DKK1联合检测诊断原发性肝癌的灵敏度、特异度和准确度均最高，分别为71.7%、84.4%和77.1%。DKK1诊断原发性肝癌的特异度仅次于AFP、TK1、DKK1联合检测，TK1诊断原发性肝癌的准确度仅次于AFP、TK1、DKK1联合检测，为71.4%。（表3）

表3 AFP、TK1、DKK1单独及联合检测对原发性肝癌的诊断效能[%（n/n）]

3 讨论

在中国，原发性肝癌的发病率和病死率均较高，2011年，肝癌的发病率和病死率分别为26.39/10万和23.93/10万，在全部肿瘤中，肝癌的发病率位居第4位，而肝癌的病死率位居第2位[7-8]。原发性肝癌严重威胁着患者的生存质量，患者的主要临床表现为肝区疼痛（持续性钝痛、刺痛或胀痛）、全身乏力、食欲减退、恶心呕吐、腹泻；其并发症较多，常会合并肝性昏迷、上消化道出血和破裂出血等并发症，会对患者的生活质量造成严重的威胁；显微镜下观察，肝癌细胞较正常肝细胞大，且肝癌细胞的形态不规则[9]。此外，原发性肝癌的病情较为隐匿，且病情发展迅速，因此，早期诊断、早期治疗是延长原发性肝癌患者生存时间的关键[10]。

目前，临床上诊断原发性肝癌的方法较多，但是诊断灵敏度和准确度不理想，无法为原发性肝癌的诊断提供科学、可靠的依据[11]。肿瘤标志物是指特征性存在于恶性肿瘤细胞，或由恶性肿瘤细胞异常产生的物质，或是宿主对肿瘤的刺激反应而产生的物质，与肿瘤的发生、发展密切相关[12]。有研究发现，原发性肝癌中存在着多种肿瘤标志物，且认为一种肿瘤标志物可能存在于多种肿瘤中，并且同一种肿瘤中也可能存在多种肿瘤标志物[13]。本研究发现，原发性肝癌组患者血清中AFP、TK1和DKK1的水平均较高。

AFP是临床常用的诊断原发性肝癌的肿瘤标志物，其浓度与肿瘤直径呈正相关，即AFP的浓度越高，患者的肿瘤直径越大，且肝癌患者的肿瘤直径不同，AFP检测的灵敏度也存在差异。但很多研究认为AFP对原发性肝癌的诊断灵敏度和特异度不高，特别在原发性肝癌的早期阶段[14-16]。本研究中，血清AFP单独诊断原发性肝癌的灵敏度为54.2%，特异度为76.7%，准确度为63.8%，这与上述的研究结果相似，说明血清AFP单独诊断原发性肝癌的灵敏度和准确度均较低，而联合应用灵敏度较高的肿瘤标志物能够提高对原发性肝癌的诊断准确度。

TK1是与肿瘤细胞的增殖密切相关的血清标志物，也是DNA合成过程的关键酶。肿瘤细胞的过度增殖是形成肿瘤的第一步，而TK1与肿瘤细胞的增殖具有一定的关系，因此，通过检测TK1的浓度便可以了解恶性肿瘤的发生风险[17]。血清TK1水平在健康人群内趋近于无或者含量极低，因此，通过检测TK1的含量诊断原发性肝癌具有良好的诊断效果。本研究中，原发性肝癌组患者血清中TK1的水平高于良性肝病组和健康对照组（P＜0.05），说明TK1可能能够成为原发性肝癌的肿瘤标志物。但是，由于TK1在大多数恶性肿瘤中的表达水平均较高，因此，TK1单独诊断原发性肝癌的灵敏度较低，无法作为诊断原发性肝癌的首选血清标志物；另外，TK1存在个体差异，且TK1与肿瘤细胞的增殖密切相关，当患者肿瘤细胞的增殖速度较慢时，血清中TK1的浓度较低，因此，临床易出现漏诊的现象[18]。与灵敏度较高的肿瘤标志物联合检测可解决TK1癌谱广泛的问题。

DKK1是WNT信号通路的负调节蛋白，其在肿瘤细胞的增殖、分化和凋亡等过程中均发挥着重要的作用[19]。WNT信号通路与胚胎发育、生长及调节过程紧密联系，并且与肺癌、肝癌、乳腺癌等多种恶性肿瘤的发生、发展密切相关[20]。DKK1在不同类型恶性肿瘤中的表达情况不同。本研究中，原发性肝癌组患者血清中DKK1水平高于良性肝病组和健康对照组，AFP、TK1、DKK1联合检测诊断原发性肝癌的灵敏度和准确度均高于AFP、TK1、DKK1单独检测的结果，提示DKK1在原发性肝癌患者血清中的水平较高，AFP、TK1、DKK1联合检测可提高对原发性肝癌的诊断效能，具有重要的临床诊断价值。

综上所述，血清AFP、TK1、DKK1联合检测诊断原发性肝癌的灵敏度和准确度、特异度均较高，对于临床原发性肝癌的诊断具有重要的参考价值，拥有广阔的应用前景，值得临床推广和应用。