PCR快速检测技术在肺炎支原体感染中的应用研究

闫文芳

MP为临床常见病原菌,会引起多种呼吸道感染性疾病,尤其是儿童呼吸道更容易受到感染,MP感染在临床上有着很多种表现,主要表现为呼吸道器官炎性反应。患者呼吸道纤毛运动会受到破坏,而呼吸道黏膜上皮细胞也会受到损害,临床表现出咳嗽、咳痰、气促等症状［1］。MP并没有细胞膜,抗菌药物不具有杀伤力,治疗时也要区别与其他细菌或病毒性疾病。临床对MP感染的诊断方法较多,临床多选择血清学方法诊断,但是结果会受到多种因素影响［2］,例如病情程度或个体差异等,导致发病早期确诊难度较大。现代分子生物学的发展,将PCR法应用在MP临床检测中,不会受到以上因素的影响,而且可以快速完成MP的检测。本次研究中,取97例疑似MP感染患者分别应用MP快速培养法与PCR快速检测技术进行检测,以传统MP分离培养法的检测结果作为金标准,分析PCR快速检测技术在MP感染中的应用价值,现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2016年5月～2019年2月本院收治的97例疑似MP感染患者作为研究对象,入选对象临床均表现出持续的、剧烈的咳嗽,观察全身症状与胸部体征相比更为明显,经X射线观察体征明显,观察胸片有片状阴影,且肺门阴影明显较浓,白细胞计数正常或偏高,血沉多有增快表现［3］,给予大环内酯类药物可以迅速缓解患者的病情,应用一般抗生素和抗病毒药物无效。排除合并呼吸系统疾病患者,合并心脏病和精神病患者。患者临床多有咳嗽、气喘、咽痛和头痛、发热等症状表现。97例患者中男50例,女47例；年龄3个月～18岁,平均年龄(8.2±7.1)岁。

1.2 方法 97例患者住院当日均采集咽拭子标本,以MP快速培养法、PCR快速检测技术进行检测,其中MP快速培养将标本放置在培养基瓶内,经过搅动,将咽拭子取出,经过密封,孵箱培养24 h后,对检测结果进行观察。而PCR检测将咽拭子标本中加1 ml的无菌生理盐水进行混合,以高速离心处理10 min,离心管中增加120 μl的DNA浓缩液进行混合,以高速离心处理10 min,再弃上清,于离心管中增加25 μl的DNA提取液。经100℃恒温处理10 min后,再经高速离心处理5 min,取3 μl进行检测。

1.3 观察指标 以传统MP分离培养法的检测结果作为金标准,比较MP快速培养法、PCR快速检测技术的灵敏度、阳性预测值、假阴性率、诊断符合率、特异度、假阳性率。

1.4 统计学方法 采用SPSS19.0统计学软件对研究数据进行统计分析。计数资料以率(%)表示,采用χ2检验。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 传统MP分离培养法检测结果 97例疑似患者中,87例确诊MP感染阳性,10例MP感染阴性。

2.2 两种检测方法的灵敏度、阳性预测值、假阴性率、诊断符合率比较 MP快速培养法、PCR快速检测技术的灵敏度、阳性预测值、假阴性率、诊断符合率比较差异无统计学意义(P＞0.05)。见表1。

2.3 两种检测方法的特异度、假阳性率比较 PCR快速检测技术的特异度明显高于MP快速培养法,假阳性率低于MP快速培养法,差异具有统计学意义(P＜0.05)。见表2。

表1 两种检测方法的灵敏度、阳性预测值、假阴性率、诊断符合率比较(%)

表2 两种检测方法的特异度、假阳性率比较(%)

3 讨论

儿童肺炎病原体感染临床没有典型的症状表现,很容易发生误诊或漏诊,所以,一定要及早诊断治疗,才能避免患者病情被延误。MP感染是经呼吸道飞沫传播,尤其是儿童为高发人群,发病均由呼吸道感染开始,经X线检测能发现患儿肺部有多种表现,肺纹理增多,选择痰、鼻或咽拭子培养能获取标本检测［4-7］。

PCR应用于MP检测具有明显优势,数个标本同时扩增,24 h内就可以完成。有研究发现,PCR对支原体表现相同扩增带,检测细菌扩增结果均呈阴性,经呼吸道分离细菌、其他支原体都没有发生预期扩增带［8-10］。PCR技术的快速性、高敏感性和高特异度用于MP检测工作中,无放射性污染和交叉反应。临床实际应用时PCR技术会存在一些困难,例如：样本处理不当,诊断敏感性和准确性都会受到影响,操作复杂,这些都会导致PCR的检测难度加大［11,12］。

MP快速培养法可以直接检测病原体,操作简单,而且速度较快,敏感性较高,短时间内就可以得到检测结果,发病初期就能检测出MP。但是,其特异度与假阳性率均不及PCR检测法,这与MP快速培养法培养液有关［13］,真菌也能生长于培养液中,会出现假阳性,当MP存活时才能检出,而PCR快速检测技术则不受此因素影响。

本文研究结果显示,97例疑似MP感染患者中,87例确诊MP感染阳性,10例MP感染阴性。MP快速培养法、PCR快速检测技术的灵敏度、阳性预测值、假阴性率、诊断符合率比较差异无统计学意义(P＞0.05)。PCR快速检测技术的特异度90.00%明显高于MP快速培养法的40.00%,假阳性率10.00%低于MP快速培养法的60.00%,差异具有统计学意义(P＜0.05)。

综上所述,PCR快速检测技术检测MP感染的特异度更优,值得推广应用。