青杞果实化学成分研究

郭瑞，郭少波，王海凤，王晓

(1.山西中医药大学 基于炎性反应的重大疾病创新药物山西省重点实验室，山西 晋中 030619; 2.北京中医药大学中药学院,北京 102488)

青杞系茄科茄属植物青杞(SolanumseptemlobumBunge)的干燥全草，多年生草本或半灌木，又名单叶青杞、卵叶青杞、蜀羊泉、野茄子、野枸杞等，产于西北、华北和东北等地区[1]。青杞始载于《新修本草》[2]，明初朱木肃的《救荒本草》记载“青杞，本草名蜀羊泉。今祥符县西田野中有之。苗高二尺余，叶似菊而稍长，花开紫色，子类枸杞子，生青熟红，根如远志，无心有糁”[3]。由于青杞分布较为广泛，其果实又与枸杞类似，加之地域文化有别，对青杞的叫法也不同，在内蒙古锡林郭勒盟、陕西绥德一带称之为野狗杞，而在河北，陕西等华北地区称野茄子。除此之外，由于温度、日照强度、海拔等气候因素的影响，除青杞之外，还包括许多变种，例如茄子蒿、单叶青杞和卵果青杞等(见表1)。青杞化学成分多样，主要含有萜类、生物碱类、甾体类和苯丙素类等化学成分[4-8]。生物活性广泛，具有抗真菌、抗炎、抗癌等作用[9-11]，临床上可用于治疗乳腺炎、目赤目昏、咽喉肿痛，以及疥癣瘙痒等疾病[3]。目前，国内外对于该植物化学成分的报道相对较少，为了丰富茄属植物中的化学成分组成，寻找具有较强生物活性的天然产物，本实验对青杞果实的化学成分进行了较为系统的研究，从中分离得到5个化合物，分别鉴定为正丁基-O-α-D-呋喃果糖苷[N-butyl-O-α-D-Fructofuranosidase](1)、9,12,13-三羟基-10,15-十八碳二烯酸 (9,12,13-trihydroxy-10-octadecaenoic acid) (2)、邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯 [di(ethylhexyl)phthalate] (3)、邻苯二甲酸二异丁酯(diisobutyl phthalate) (4)、邻苯二甲酸二丁酯 (dibutyl phthalate) (5)，其中化合物1首次从该植物中分离得到。

表1 青杞变种与正品青杞的区别

1 材料

Waters 2545-2489制备型HPLC(沃特世科技有限公司)；Waters2695-2998分析型HPLC(沃特世科技有限公司)；Thermo Q Exactive Focus液质联用仪(赛默飞世尔科技公司)；核磁共振光谱仪Bruker-600型(Bruker公司)；分析型色谱柱XSelect®HSS T3(5 μm,4.6 mm×250 mm,沃特世科技有限公司)；半制备型色谱柱Acchrom C18(10 μm,100 A,10 mm×250 mm，华谱新创科技有限公司)；旋转蒸发仪EYELA N-1300(日本东京理化公司)；柱色谱反相ODS(C18)60 μm 100 A(华普新创科技有限公司)；石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、甲醇均为分析醇(天津市进丰化工有限公司)。

药材为2018年10月—2018年11月采于山西中医药大学药植园，经山西中医药大学药学院中药资源教研室王兵副教授鉴定为青杞(SolanumseptemlobumBunge)的果实。药材标本(20181015)存放于山西中医药大学中药化学实验室。

2 提取与分离

取干燥的青杞果实0.6 kg，经粉碎后用7倍量的95%乙醇加热回流提取2次，每次3 h，双层纱布过滤，合并2次提取液，减压浓缩回收乙醇，得到总浸膏407.4 g。取200 g浸膏用水分散，依次加入等体积量的石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、水饱和正丁醇萃取，反复多次，直至萃取至无色。萃取液通过旋转蒸发仪回收至干，分别得到石油醚萃取部位21.6 g，二氯甲烷萃取部位6.24 g，乙酸乙酯萃取部位12.2 g，正丁醇萃取部位100.2 g。将石油醚萃取部位21.6 g经硅胶柱色谱，石油醚-乙酸乙酯(40∶1→0∶1)梯度洗脱，得到4个流分Fr. 1～4。Fr. 1经过经硅胶柱色谱二氯甲烷(40∶1)等度洗脱得到化合物2(21.3 mg)；Fr. 2经过经硅胶柱色谱二氯甲烷-甲醇(30∶1→0∶1)梯度洗脱，得到化合物3(27.6 mg)，化合物4(33.4 mg)，化合物5(17.2 mg)。取10.0 g正丁醇萃取部位，经硅胶柱色谱二氯甲烷-甲醇(10∶1→0∶1)梯度洗脱，得到1个流分，经ODS反相柱色谱，甲醇-水(30∶70→100∶0)梯度洗脱得到一个组分，再经HPLC(52%，甲醇/水，流速2 mL/min)，制备得到化合物1(11.35 mg)。

3 结构鉴定

3.1 化合物1

化合物1为无定型粉末 (MeOH)，易溶于甲醇。Molish反应呈阳性。化合物1酸水解后，采用GC-MS色谱检测其水解后的糖，其出峰时间与标准品D-呋喃果糖(D-fructopyranose)一致。因此可判断化合物1中连有D-呋喃果糖(D-fructopyranose)。化合物1的正性HRESIMS质谱，在m/z 237.134 6给出[M+H]+离子峰，表明化合物1的分子量为236，结合化合物1的1H-NMR、13C-NMR及DEPT谱，可推测其分子式为C10H20O6，并计算其不饱和度为1。

1H-NMR(CD3OD,600 MHz)，δH3.51(1H,dt,J=9.3,6.6 Hz, H-1a), 3.70 (1H, dt, J=9.3, 6.6 Hz, H-1b), 1.43 (1H, overlapped, H-2a), 1.49 (1H, overlapped, H-2b), 1.32 (1H, overlapped, H-3a), 1.39 (1H, overlapped, H-3b), 0.90 (1H, t, J=7.2 Hz, H-4), 3.49 (1H, d, J=12.0 Hz, H-1′a), 3.69 (1H, d, J=12.0 Hz, H-1′b), 4.11 (1H, d, J=5.0 Hz, H-3′), 3.89 (1H, dd, J=5.0, 7.2 Hz, H-4′), 3.81 (1H, ddd, J=3.2, 5.0, 7.2 Hz, H-5′), 3.63 (1H, dd, J=5.0, 12.1 Hz, H-6′a), 3.77 (1H, dd, J=5.0, 12.1 Hz, H-6’b);13C-NMR (CD3OD, 100 MHz), δC64.3 (C-1), 33.5 (C-2), 20.4 (C-3), 14.3 (C-4), 62.2 (C-1′), 105.2 (C-2′), 78.4 (C-3′), 78.1 (C-4′), 83.4 (C-5′), 64.9 (C-6′)。将化合物1的1H-NMR和13C-NMR数据与文献数据对照[12]，发现与文献报道一致，化合物1被确定为正丁基-O-α-D-呋喃果糖苷[N-butyl-O-α-D-Fructofuranosidase]。

3.2 化合物2

化合物2为白色粉末 (MeOH)，易溶于甲醇，正性HRESIMS谱在m/z 351.214 8给出[M+Na]+离子峰，表明化合物2的分子量为328。结合1H-NMR谱和13C-NMR谱，推测其分子式为C18H32O5，计算其不饱和度为3。

1H-NMR (CD3OD, 600 MHz), δH2.26 (1H, t, J=7.4, H-1), 1.58 (1H, overlapped, H-2), 1.33 (1H, overlapped, H-3), 1.33 (1H, overlapped, H-4), 1.33 (1H, overlapped, H-5), 1.33 (1H, overlapped, H-6), 1.33 (1H, overlapped, H-7), 1.51 (1H, overlapped, H-8), 4.03 (1H, m, H-9), 5.70 (1H, m, H-10), 5.72 (1H, m, H-11), 3.95 (1H, m, H-12), 3.45 (1H, ddd, J=4.0, 8.3, 10.0 Hz, H-13), 2.03 (1H, m, H-14a), 2.31 (1H, m, H-14b), 5.45 (1H, m, H-15), 5.46 (1H, m, H-16), 1.33 (1H, m, H-17), 0.96 (1H, t, J = 7.5 Hz, H-18);13C-NMR (CD3OD, 100 MHz), δC177.8 (C-1), 35.3 (C-2), 26.2 (C-3), 26.5 (C-4), 30.2 (C-5), 30.4 (C-6), 30.6 (C-7), 38.4 (C-8), 73.0 (C-9), 136.6 (C-10), 131.1 (C-11), 75.8 (C-12), 75.9 (C-13), 31.6 (C-14), 134.4 (C-15), 126.4 (C-16), 21.7 (C-17), 14.6 (C-18)。综上数据，将化合物2的波谱数据与文献比较[13]，发现两者基本一致，因此，确定化合物2为9, 12, 13-三羟基-10,15-十八碳二烯酸 (9,12,13-trihydroxy-10-octadecaenoic acid)。

3.3 化合物3

化合物3为无色油状化合物 (MeOH)，正性HRESIMS谱在m/z 391.285 0给出[M+H]+离子峰，表明化合物3的分子量为390。结合1H-NMR谱和13C-NMR谱，推测其分子式为C24H38O4，计算其不饱和度为6。

1H-NMR (CD3OD, 600 MHz) δH: 7.7 (2H, m, H-3, 6), 7.61 (2H, m, H-4, 5), 0.96 (6H, t, J=4.3 Hz, 1′,1″-CH3), 1.28 (6H, t, J=8.0 Hz, 6′, 6″-CH3);13C-NMR (CD3OD, 100 MHz) δC: 133.6 (C-1, 2), 132.3 (C-3, 6), 129.8 (C-4, 5), 69 (C-1′, 1″), 40.2 (C-2′, 2″), 30.1 (C-3′, 3″), 24.9 (C-4′, 4″), 24.0 (C-5′, 5″), 14.5 (C-6′, 6″), 11.5 (CH3-1′, 1″), 31.7(CH3-6′, 6″),169.3(C=O)。综上数据，将化合物3的波谱数据与文献比较[14]，发现两者基本一致，因此，确定化合物3为邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯[di(ethylhexyl)phthalate]。

3.4 化合物4

化合物4为白色无定形粉末 (MeOH)，正性HRESIMS谱在m/z 301.142 2给出[M+Na]+离子峰，表明化合物4的分子量为278。结合1H-NMR谱和13C-NMR谱，推测其分子式为C16H22O4，计算其不饱和度为6。

1H-NMR (CD3OD, 600 MHz) δH: 7.70 (2H, dd, J = 3.4 Hz, 5.7 Hz, H-2, 5), 7.61 (2H, dd, J=3.3 Hz, 5.7 Hz, H-3, 4), 4.0 (2H, d, J=6.5 Hz, H-1′, 1″), 2.04(2H, m, H-2′, 2″), 0.98 (12H, m, J=2.72, H-3′, 3″, 4′, 4″);13C-NMR (CD3OD, 100 MHz) δC: 133.6 (C-1, 6), 129.9 (C-2, 5), 132.4 (C-3, 4), 72.9 (C-1′, 1″), 29.0 (C-2′, 2″), 19.5 (C-3′, 3″, 4′, 4″), 169.3 (C-1α, 2α)。综上数据，将化合物4的波谱数据与文献比较[15]，发现两者基本一致，确定化合物4的结构为邻苯二甲酸二异丁酯 (diisobutyl phthalate)。

3.5 化合物5

化合物5为淡黄色油状物 (MeOH), 正性HRESIMS谱在m/z 279.156 6给出[M+H]+离子峰，表明化合物5的分子量为278。结合1H-NMR谱和13C-NMR谱，推测其分子式为C16H22O4，计算其不饱和度为6。

1H-NMR (CD3OD, 600 MHz,) δH: 7.70 (2H, dd, J = 3.3, 5.7 Hz, H-2,5), 7.60 (2H, dd, J=3.3, 5.7 Hz, H-3, 4), 4.27 (4H, t, J=6.6 Hz, H-1′, 1″), 1.68 (8H, m, H-2′, 2″, 3′, 3″), 0.97 (6H, t, J=7.4 Hz, H-4′, 4″);13C-NMR (CD3OD, 100 MHz) δC: 132.3 (C-1, 6), 129.9 (C-2,5), 133.6 (C-3, 4), 66.7 (C-1′, 1″), 31.7 (C-2′, 2″), 20.3 (C-3′, 3″), 14.1 (C-4′, 4″), 169.3 (C-1α, 2α)。综上数据，将化合物5的波谱数据与文献比较[16]，发现两者基本一致，故确定化合物5为邻苯二甲酸二丁酯 (dibutyl phthalate)。

4 结论

从青杞果实的石油醚和正丁醇萃取部位中分离得到5个化合物，依次鉴定为正丁基-O-α-D-呋喃果糖苷[N-butyl-O-α-D-Fructofuranosidase](1)、9,12,13-三羟基-10,15-十八碳二烯酸(9,12,13-trihydroxy-10-octadecaenoic acid)(2)、邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯[di(ethylhexyl)phthalate](3)、邻苯二甲酸二异丁酯(diisobutyl phthalate)(4)、邻苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate)(5)。其中化合物1为首次从该植物中分离得到。